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依维莫司联合全反式维甲酸逆转急性早幼粒细胞白血病细胞耐药的研究

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浙江大学学报（医学版） 2015年第5期44卷 525-531页

作者：廖伟超何莹王斌生黄河浙江大学医学院附属第一医院骨髓移植中心

目的：探讨依维莫司联合全反式维甲酸（简称维甲酸）逆转急性早幼粒细胞白血病（APL）细胞株NB4-R1耐药的作用。方法：应用CD11b染色流式细胞术及硝基四唑氮蓝（NBT）还原实验检测两药联合应用对细胞分化的影响，流式细胞术检测细胞周... 详细信息

目的：探讨依维莫司联合全反式维甲酸（简称维甲酸）逆转急性早幼粒细胞白血病（APL）细胞株NB4-R1耐药的作用。方法：应用CD11b染色流式细胞术及硝基四唑氮蓝（NBT）还原实验检测两药联合应用对细胞分化的影响，流式细胞术检测细胞周期情况，AnnexinV／PI双染色检测细胞凋亡情况，蛋白质印迹法检测自噬相关蛋白微管结合蛋白轻链3（LC3）、Beclinl及早幼粒白血病一维甲酸受体融合蛋白（PML—RARα）、磷酸化核糖体S6激酶（P-P70S6K）、磷酸化4E结合蛋白1（***）等表达水平。结果：与维甲酸组比较，联用组能诱导耐药细胞株NB4-RI细胞的分化，并将细胞增殖阻止在G、期而对细胞凋亡无明显影响。100nmol／L依维莫司组、1μmol／L维甲酸组、联用组、对照组NB4-R1细胞培养48h后分化百分率分别为（2．29±0．57）％、（17．06±2．65）％、（54．47±4．91）％、（2．54±0．53）％；处于G1期的细胞百分率分别为（35．20±11．97）％、（33．54±6．25）％、（53．70±8．73）％、（27．40±6．01）％；四组细胞凋亡细胞百分率分别为（2．30±0．14）％、（2．25±0．21）％、（2．40±0．28）％、（1．95±0．07）％。与维甲酸组比较，联用组mTOR信号通路下游的P70S6K、4E—BP1分子磷酸化水平下降，LC3-II和Beclin1的表达上调，且能部分降解融合蛋白PML-RAR（x。结论：依维莫司联合维甲酸能诱导NB4-R1细胞分化，且能阻滞细胞周期而不致细胞凋亡，其机制可能与依维莫司联合维甲酸抑制mTOR信号通路激活自噬作用从而降解PML-RARα蛋白有关。

关键词：白血病,早幼粒细胞,急性/病理学依维莫司维甲酸/药理学细胞分化/药物作用抑制因子,免疫抗药性,肿瘤

共抑制分子CD160在慢性HIV-1感染患者中的表达及临床意义

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中华医学杂志 2014年第20期94卷 1559-1562页

作者：王陆军徐向升冯国华张学秀王福生解放军第三○二医院生物治疗研究中心北京100039

目的探讨慢性HIV-1感染者中CD4^＋和CD8^＋T细胞上共刺激分子CD160分子的表达及临床意义.方法采集2010年1月至2011年12月解放军第三○二医院慢性HIV-1感染者23例（感染组）和20名健康人（对照组）的外周血,分离外周血单个核细胞,用直... 详细信息

目的探讨慢性HIV-1感染者中CD4^＋和CD8^＋T细胞上共刺激分子CD160分子的表达及临床意义.方法采集2010年1月至2011年12月解放军第三○二医院慢性HIV-1感染者23例（感染组）和20名健康人（对照组）的外周血,分离外周血单个核细胞,用直接免疫荧光染色方法标记并用流式细胞仪检测T细胞及Tn、Tcm、Tem和TemRA亚群上CD160表达的百分比及平均荧光强度（MFI）,并将CD160的表达水平与患者CD4^＋T细胞计数和病毒载量做相关性分析.结果感染组中CD4^＋和CD8^＋T细胞上CD160表达均显著高于对照组[表达率：（14.3±7.5）％比（3.9±2.2）％和（40.9±13.2）％比（12.9±6.6）％;MFI：26.4±11.0比12.4±2.9和52.5 ±17.4比18.2±5.0];且CD4^＋T细胞上CD160的表达与CD4^＋T细胞计数呈负相关（r=-0.550,P=0.010）,和病毒载量呈正相关（r =0.522,P=0.015）,但CD8^＋T细胞上CD160的表达与CD4^＋T细胞计数和病毒载量无相关性.感染组CD8^＋T细胞Tn、Tcm、Tem亚群上CD160表达均显著高于对照组（25.3±17.6比5.0±3.1,45.8±13.0比20.4 ±4.3,37.0±13.6比20.0±10.8）,Tcm和Tem亚群上表达更高,且CD160＋ CD8^＋T细胞亚群中Tn比例降低而Tcm比例升高.结论在慢性HIV-1感染中共抑制分子CD160的升高,可能与CD4^＋和CD8^＋T细胞的功能耗竭有关,且CD160可能主要对记忆性CD8^＋T细胞产生影响.

关键词：抑制因子,免疫 HIV-1 CD4阳性T淋巴细胞 CD8阳性T淋巴细胞

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应用不同术式的腰椎间盘突出症患者手术前后免疫学变化并与单纯脊柱手术患者比较

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中国临床康复 2005年第18期9卷 29-31页

作者：谢恩罗卓荆张子如解放军第四军医大学西京医院全军骨科研究所陕西省西安市710032 西北大学外语系陕西省西安市710032

目的:探讨接受不同手术方式的腰椎间盘突出症患者手术前后自身免疫反应的变化,并与单纯脊柱手术的非腰椎间盘突出症患者比较,分析免疫参数与腰椎间盘突出的关联性。方法:选择2004-01/06解放军第四军医大学西京医院全军骨科研究所拟行前... 详细信息

目的:探讨接受不同手术方式的腰椎间盘突出症患者手术前后自身免疫反应的变化,并与单纯脊柱手术的非腰椎间盘突出症患者比较,分析免疫参数与腰椎间盘突出的关联性。方法:选择2004-01/06解放军第四军医大学西京医院全军骨科研究所拟行前侧经腹膜外腰椎间盘完全摘除术20例,后侧部分椎间盘摘除术36例与接受脊柱手术的非腰椎间盘突出(对照组)患者22例。于手术前和术后1,3,5,7,14d采集晨起空腹外周血样。采用免疫单向扩散法检测IgG,IgM。临床流式细胞仪检测淋巴细胞的分化抗原,采用荧光标记的单抗检测。采用LBY-XC全自动血沉测试仪测定血沉,采用酶联免疫吸附法测定C反应蛋白。结果:按意向处理分析,78例患者进入结果分析。①外周血液IgM、IgG水平:前侧经腹膜外腰椎间盘完全摘除术组与后侧部分椎间盘摘除术组中术前外周血液IgM、IgG水平比对照组高(P0.05)。术后3组都明显上升(P0.05)。前侧经腹膜外腰椎间盘完全摘除术组与后侧部分椎间盘摘除术组血清C反应蛋白及白细胞术后第14天显示基本趋于一致。③外周血液CD4、CD8、CD4/CD8水平:前侧经腹膜外腰椎间盘完全摘除术组与后侧部分椎间盘摘除术组术前外周血液CD4、CD8、CD4/CD8水平比对照组高(P0.05)。3组术后第14天显示基本趋于一致。结论:不论何种手术方式,都使患者在接受椎间盘手术前后免疫功能发生明显改变,检测IgG,IgM及T细胞亚群CD4、CD8、CD4/CD8比值能够客观、准确、全面地反映患者的免疫状态,说明腰椎间盘突出症患者存在着体液和细胞免疫异常,且其术后免疫状态的改变也提示手术能够减缓或不同程度阻断异常的自身免疫反应。

关键词：椎间盘移位免疫球蛋白类 T淋巴细胞亚群抑制因子,免疫自身免疫

细胞因子信号转导抑制因子3与早产关系的研究

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中国医师杂志 2014年第12期16卷 1634-1636,1641页

作者：温娜张巧玉王振国解放军第三○九医院妇产科北京100091

目的探讨细胞因子信号转导抑制因子3（SOCS3）与早产的关系.方法选取2013年2月至2013年10月本院收治自发性早产患者及足月妊娠妇女各30例为研究对象,自发性早产患者为实验组,足月妊娠妇女设为对照组,收集两组胎盘组织,应用RT-PCR及Wes... 详细信息

目的探讨细胞因子信号转导抑制因子3（SOCS3）与早产的关系.方法选取2013年2月至2013年10月本院收治自发性早产患者及足月妊娠妇女各30例为研究对象,自发性早产患者为实验组,足月妊娠妇女设为对照组,收集两组胎盘组织,应用RT-PCR及Western-blot检测两组孕妇胎盘组织中的SOCS3蛋白及mRNA的表达情况,比较不同组间SOCS3表达强度;采用RT-PCR检测胎盘组织中IFN-α、IL-10基因表达情况,分析Th1/Th2平衡情况.结果 PCR检测结果显示,SOCS3-mRNA在对照组和实验组胎盘组织中均有表达,对照组SOCS3-mRNA表达强度值明显低于实验组（P ＜0.01）;West-ern-blot结果显示,实验组胎盘组织中SOCS3的蛋白表达明显强于对照组（P＜0.01）,SOCS3基因及蛋白表现一致;实验组患者Th1分泌的细胞因子IFN-α表达显著高于对照组（P＜0.01）,Th2分泌的细胞因子IL-10介导的体液免疫功能减弱（P＜0.05）,Th1/Th2平衡向Th1偏离.结论早产发生与SOCS3高表达有一定的关系,其作用机制可能是其通过的信号传导及转录活因子（JAK/STAT）信号途径调节体内免疫平衡.为早产研究奠定了基础.

关键词：细胞因子类信号传导抑制因子,免疫早产胎盘

肿瘤坏死因子家族的B细胞激活因子免疫抑制分子的表达及免疫原性分析

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中华风湿病学杂志 2007年第5期11卷 257-261页

作者：高会广何凤田李蓉芬吉清黄刚胡大强张立龚薇胡颖第三军医大学生物化学与分子生物学教研室重庆解放军第404医院检验科40038

目的制备异源性T辅助细胞表位修饰的人可溶性肿瘤坏死因子家族的B细胞激活因子(BAFF)突变体,并对其免疫抑制功能进行分析。方法经原核表达和Ni-NTA层析纯化制备异源性T辅助细胞表位修饰的人可溶性BAFF突变体;用所制备的重组蛋白免疫BAL... 详细信息

目的制备异源性T辅助细胞表位修饰的人可溶性肿瘤坏死因子家族的B细胞激活因子(BAFF)突变体,并对其免疫抑制功能进行分析。方法经原核表达和Ni-NTA层析纯化制备异源性T辅助细胞表位修饰的人可溶性BAFF突变体;用所制备的重组蛋白免疫BALB/c小鼠,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测小鼠血清中抗人BAFF抗体的滴度;四甲基偶氮唑蓝(MTT)实验检测免疫小鼠血清抑制重组sBAFF和天然sBAFF功能的情况。结果重组蛋白在大肠杆菌中均获得了高效表达;经Ni-NTA层析纯化后,目的蛋白的纯度均达90%以上;用重组蛋白免疫小鼠均可诱导产生高滴度抗人可溶性BAFF抗体;免疫小鼠血清可抑制重组sBAFF和天然sBAFF刺激淋巴细胞增殖的功能。结论成功制备了可诱导产生高滴度特异性抗体的BAFF免疫抑制分子,为进一步探讨其治疗作用奠定了基础。

关键词：肿瘤坏死因子类抑制因子,免疫 T辅助细胞表位

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Wnt通路抑制因子FrpHE的表达作用

实用肿瘤杂志 2007年第1期22卷 28-31页

作者：腊蕾班武吴曙光饶进军南方医科大学南方医院药学部广东广州510515 广州军区总医院广东广州510010 南方医科大学药学院广东广州510515

目的研究Wnt通路抑制因子FrpHE(frizzled related-protein)表达的调控作用。方法将携带p53基因的复制缺陷型腺病毒载体(Adp53)导入到p53缺失的人肝癌细胞株Hep3B中,并以Wnt通路的关键因子β-catenin的改变为功能指标评价Wnt通路的变化。... 详细信息

目的研究Wnt通路抑制因子FrpHE(frizzled related-protein)表达的调控作用。方法将携带p53基因的复制缺陷型腺病毒载体(Adp53)导入到p53缺失的人肝癌细胞株Hep3B中,并以Wnt通路的关键因子β-catenin的改变为功能指标评价Wnt通路的变化。以RT-PCR技术检测Wnt通路抑制因子FrpHE表达的调节作用,以流式细胞术检测Adp53的转基因情况和β-catenin的表达。结果FrpHE mRNA水平在转染p53 20小时后即有明显升高,其中以32小时达最高水平,随后逐渐降低。量效关系研究表明在转染剂量为0.05、0.5、5、50 pfu/cell时FrpHE mRNA表达均有显著增高,尤以5 pfu/cell时表达水平最高。β-catenin表达水平随着转染时间和转染剂量的增加,阳性细胞百分比强度和平均荧光量强度表达水平逐渐下降。结论外源性p53能够诱导Wnt通路抑制因子FrpHE的表达,进而产生抑制Wnt通路的作用。

关键词：肿瘤基因,p53 Wnt通路肿瘤细胞,培养的抑制因子,免疫

共刺激分子B7-H1对小鼠髓源性抑制细胞免疫抑制功能的调节作用

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中华老年医学杂志 2014年第2期33卷 197-200页

作者：刘红梅王翎张光波陈思文潘旭东毛燕青苏州大学附属第一医院特需病区 215006 江苏临床免疫重点实验室

目的探讨髓源性抑制细胞（MDSCs）负性共刺激分子（B7-HI）的表达及在增龄相关免疫抑制功能中的作用。方法健康C57BL／6老年（12月龄）及青年（4～8周龄）小鼠各18只。通过流式细胞分析法测定各组小鼠MDSCs上负性协同刺激因子的表达水... 详细信息

目的探讨髓源性抑制细胞（MDSCs）负性共刺激分子（B7-HI）的表达及在增龄相关免疫抑制功能中的作用。方法健康C57BL／6老年（12月龄）及青年（4～8周龄）小鼠各18只。通过流式细胞分析法测定各组小鼠MDSCs上负性协同刺激因子的表达水平，并分别通过免疫磁珠分选法及小鼠淋巴结研磨方法，选得MDSCs及T细胞。T细胞增殖干预实验分5组进行：T细胞羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂（CFSE）未标记组；T细胞CFSE标记组；T细胞标记CFSE＋老年MDSCs组；T细胞标记CFSE＋青年MDSCs组以及T细胞标记CFSE＋老年MDSCs＋B7-H1阻断抗体组，观察B7-HI在MDSCs抑制T细胞增殖过程中的作用。结果与青年组比较，老年组MDSCsB7-H1的表达明显增高（t=3．27，P〈O．05）。老年组MDSCs能明显抑制T细胞的增殖（t=5．42，P〈O．05），而青年组MDSCs对T细胞的干预作用不明显（t=0．64，P〉0．05），老年MDSCs加B7-HI阻断抗体组T细胞增殖被明显逆转，差异有统计学意义（￡=8．28，P〈O．05）。结论表达于MDSCs表面的B7-H1分子可能是增龄相关MDSCs发挥免疫抑制功能的重要调节因子。

关键词：抑制因子,免疫抗原,CD 免疫耐受

高强度聚焦超声治疗对乳腺癌细胞表达IL-6及IL-10的影响

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肿瘤 2006年第6期26卷 543-546页

作者：周强伍烽朱学强张军李莉王智彪四川省遂宁市人民医院肿瘤科遂宁629000 重庆医科大学附属第二医院肿瘤中心医学超声工程研究所重庆400010 四川省人民医院肿瘤科成都610072 四川省成都市第三人民医院肿瘤科成都610072

目的:探讨高强度聚焦超声(highintensityfocusedultrasound,HIFU)治疗乳腺癌对原发癌组织及腋窝转移淋巴结中癌细胞表达免疫抑制因子IL6及IL10的影响。方法:HIFU组23例乳腺癌患者改良根治术前1～2周接受HIFU治疗,对照组25例仅行改良根治... 详细信息

目的:探讨高强度聚焦超声(highintensityfocusedultrasound,HIFU)治疗乳腺癌对原发癌组织及腋窝转移淋巴结中癌细胞表达免疫抑制因子IL6及IL10的影响。方法:HIFU组23例乳腺癌患者改良根治术前1～2周接受HIFU治疗,对照组25例仅行改良根治术,术后用免疫组化SP法检测2组乳腺癌组织及腋窝转移淋巴结(分别为11、12例)中IL6及IL10的表达。结果:原发癌组织中,对照组癌细胞IL6及IL10的阳性率和阳性癌细胞数分别为68%、84%,(399.1±95.8)/mm2、(327.2±140.8)/mm2,HIFU组分别为47.8%、60.9%,(303.1±99.4)/mm2、(238.1±79.8)/mm2,2组比较差异具有显著性(P值均0.05),(217.9±57.7)/mm2、(212.0±49.5)/mm2(P免疫抑制因子的表达,推测其有利于肿瘤宿主免疫平衡的恢复。

关键词：乳腺肿瘤超声,高强度聚焦抑制因子,免疫免疫组织化学白细胞介素6 白细胞介素10

化疗后老年非小细胞肺癌患者细胞免疫功能的变化

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中华老年医学杂志 2011年第11期30卷 941-943页

作者：陈公平连宁芳金咏絮王碧瑛林其昌福建医科大学附属第一医院呼吸内科福州350005

目的研究老年非小细胞肺癌患者细胞免疫功能变化及化疗对其影响。方法分别测定初次确诊的老年非小细胞肺癌患者29例、中青年非小细胞肺癌患者20例及健康老年人22例的T淋巴细胞亚群（CD3、CD4、CD8、CD4／CD8）及自然杀伤（NK）细胞的值... 详细信息

目的研究老年非小细胞肺癌患者细胞免疫功能变化及化疗对其影响。方法分别测定初次确诊的老年非小细胞肺癌患者29例、中青年非小细胞肺癌患者20例及健康老年人22例的T淋巴细胞亚群（CD3、CD4、CD8、CD4／CD8）及自然杀伤（NK）细胞的值，同时比较老年非小细胞肺癌患者化疗前和2个周期化疗结束、第3个周期开始前的T淋巴细胞亚群及NK细胞的数值。结果老年非小细胞肺癌患者CD3、CD4、CD8、CD4／CD8及NK细胞分别为58．9±15．8、32．3±12．7、22．0±9．8、1．3±0．7、21．6±7．7，与中青年非小细胞肺癌患者65．9±7．2、38．5±7．6、23．1±9．2、1．5±0．7、16．8±6．2相比，CD3、CD4细胞降低，NK细胞增加（t=2．109、2．159、2．273，均P〈0．05），CD8、CD4／CD8变化差异无统计学意义（t=0．406、0．736，均P〉0．05）；与健康老年人67．3±9．0、39．0±7．8、23．9±9．3、2．0±1．6、22．5±5．8比较，CD3、CD4、CD4／CD8明显降低（t=2．234、2．200、2．016，均P〈0．08），CD8、NK细胞变化差异无统计学意义（t=0．700、0．474，均P〉0．08）；老年非小细胞肺癌患者化疗后分别为51．6±10．3、31．7±11．7、21．6±6．5、1．3±0．7、26．0±12．7，CD3明显减低（t=2．067，P〈0．05），CD4、CD8、CD4／CD8及NK细胞变化，差异无统计学意义（t=0．186、0．180、0．289、1．570，均P〉0．05）。结论老年非小细胞肺癌患者较中青年非小细胞肺癌患者及健康老年人免疫功能减低，化疗可进一步降低其细胞免疫功能。

关键词：癌,非小细胞肺 T淋巴细胞亚群抑制因子,免疫