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扩心方对阿霉素诱导扩张型心肌病大鼠心脏血管新生作用的影响

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时珍国医国药 2022年第10期33卷 2321-2325页

作者：董艺丹徐迎佳吴琼安世英王延文苑素云曹敏彭陇萍王佑华上海中医药大学附属龙华医院上海200032 复旦大学附属第五人民医院上海200032

目的观察扩心方对阿霉素诱导扩张型心肌病大鼠心脏血管新生作用的影响。方法应用腹腔注射阿霉素诱导扩张型心肌病大鼠模型,60只SD大鼠随机分为空白组、模型组、扩心方低[1.8 mg/(kg·d)]、中[3.6 mg/(kg·d)]、高剂量组[7.2 mg/(kg·d)... 详细信息

目的观察扩心方对阿霉素诱导扩张型心肌病大鼠心脏血管新生作用的影响。方法应用腹腔注射阿霉素诱导扩张型心肌病大鼠模型,60只SD大鼠随机分为空白组、模型组、扩心方低[1.8 mg/(kg·d)]、中[3.6 mg/(kg·d)]、高剂量组[7.2 mg/(kg·d)]及卡托普利组[5 mg/(kg·d)]。各组分别给予药物或生理盐水灌胃4周。造模结束后采用超声心动图检测大鼠心脏功能;HE、Masson染色观察大鼠心肌组织病理学改变;免疫组化观察大鼠心肌组织VEGF、α-SMA、CD31、CD34表达情况;Western blot观察大鼠心肌组织VEGFR-2蛋白表达水平。结果与正常组相比,模型组大鼠LVIDD及LVIDS值升高,EF及FS值降低(P扩心方高、中、低及卡托普利组大鼠LVIDD、LVIDS值降低,EF、FS值升高(P扩心方低、中、高剂量组及卡托普利组VEGF、CD31、CD34表达明显增加,且CD34表达呈剂量依赖性;扩心方高剂量组α-SMA较模型组表达增加明显;扩心方低、中、高剂量组及卡托普利组VEGFR-2蛋白表达较模型组均升高,其中扩心方低、中剂量组及卡托普利组升高显著(P扩心方可通过上调促血管新生因子VEGFR-2表达,增加阿霉素诱导扩张型心肌病大鼠心肌微血管密度,促进血管生成。

关键词：扩张型心肌病血管新生扩心方阿霉素心功能

扩心方及其主要成分黄芪多糖对斑马鱼模型淋巴管新生调控作用的研究

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扩心方及其主要成分黄芪多糖对斑马鱼模型淋巴管新生调控作用的研...

作者：彭珑萍上海中医药大学

学位级别：硕士

背景:扩张型心肌病(Dilated Cardiomyopathy,DCM)是导致心力衰竭的主要病因之一,属原发性混合型心肌病的一种,猝死率高,5年病死率为15%～50%。其病因复杂多变,包括:病毒感染、免疫异常、基因突变、酒精中毒、围产期、抗肿瘤药物和代谢... 详细信息

背景:扩张型心肌病(Dilated Cardiomyopathy,DCM)是导致心力衰竭的主要病因之一,属原发性混合型心肌病的一种,猝死率高,5年病死率为15%～50%。其病因复杂多变,包括:病毒感染、免疫异常、基因突变、酒精中毒、围产期、抗肿瘤药物和代谢异常等。这些不同病因作用于心脏并导致心室扩张、心肌收缩和舒张受限的机理目前尚不清楚,目前缺乏针对性的治疗,治疗主要集中在抗心衰、抗心律失常及抗凝等对症治疗,而中医对该病的治疗在改善心功能、缓解临床症状及提高生存率等方面有一定的优势。课题组前期临床研究提示扩心方可明显改善扩心病患者心功能及临床症状,提高患者生活质量;扩心方能改善阿霉素诱导的扩张型心肌病大鼠心肌肥大、坏死,减少心肌纤维化,具体作用机制有待深入研究。心脏淋巴管的生理病理作用一直未引起人们的重视;目前扩张型心肌病与心脏淋巴管新生关系的报道十分罕见,机制未能阐明。我们前期研究发现,阿霉素诱导的大鼠DCM模型出现明显的心脏淋巴管新生障碍,显示模型组心肌淋巴管标志物心外膜淋巴管较正常组明显减少,而运用中药扩心方治疗能够有效逆转,呈现剂量依赖性,但机制不清。课题组进一步采用与DCM表型相似的Tnnt突变斑马鱼模型,用扩心方对其进行治疗发现可以改善Tnnt突变斑马鱼生存率;筛选扩心方的君药黄芪,发现其有效成分黄芪多糖对Tnnt突变斑马鱼(扩张型心肌病表型)同样具有治疗作用,作用机制与扩心方相似。在前期工作基础上,本课题拟研究扩心方及其有效成分黄芪多糖对淋巴管新生的调控作用机制。目的:利用网络药理学研究扩心方防治扩张型心肌病的作用机制,筛选出DCM心脏淋巴管新生有效作用通路或相关基因;利用Tg(Fli1a:EGFP;Gata1:Ds Red)转基因斑马鱼分别构建正常斑马鱼淋巴管模型、化学剂MAZ51诱导的斑马鱼淋巴管损伤模型两种模型,用于研究扩心方对斑马鱼淋巴管生理及病理情况的调控作用机制;利用RNA-Seq研究分析扩心方有效成分黄芪多糖对Tnnt斑马鱼的具体作用机制,筛选出有效通路或作用基因,探讨其对淋巴管新生的作用机制。方法:1.采用网络药理学方法研究扩心方防治DCM潜在的靶点及作用通路。中药系统药理学分析平台(TCMSP)检索并筛选出扩心方有效化学成分及相关靶点,筛选标准:口服生物利用度(OB)≥30%,药物相似性(DL)≥0.18,小肠上皮细胞通透性(Caco)≥0.4。Uniprot数据库将预测出的靶点蛋白名转换为相关基因名。***数据库检索与DCM相关的基因,将有效化合物靶点与DCM靶点运用R语言进行统计分析,获得药物-靶点网络,并且绘制药物靶点网络图。Cytoscape3.7.2软件根据药物及疾病靶点的交集绘制疾病靶点PPI网络图。Bioconductor数据库对筛选所得基因进行GO功能及KEGG通路富集分析,绘制富集基因气泡图及相关通路图。2.在进行斑马鱼毒性实验、研究扩心方药效浓度的基础上,根据毒性实验明确扩心方的可使用浓度范围。构建Tg(Fli1a:EGFP;Gata1:Ds Red)转基因斑马鱼淋巴管模型,分别应用扩心方对正常斑马鱼淋巴管模型、血管内皮生长因子3受体激酶抑制剂MAZ51诱导的斑马鱼淋巴管损伤模型进行干预,在荧光显微镜下观察斑马鱼淋巴管的生长情况并拍照统计,同时采用RT-PCR法来检测相关淋巴管因子VEGF-C、VEGF-A、PROX1、LYVE-1的m RNA水平的变化,以此来观察扩心方对Tg(Fli1a:EGFP;Gata1:Ds Red)转基因斑马鱼正常及损伤状态下淋巴管新生的作用。3.采用高通量测序方法对经黄芪多糖处理的斑马鱼幼鱼中提取的总RNA转录后所得c DNA文库进行测序。定量分析过程中读取序列时可获得RNA转录物。HISAT快速将转录本定位到参考基因组中,Bowtie 2软件把clean reads与新转录本中的基因参考序列(包含所有转录本的碱基序列)进行比对,RSEM对基因及转录本的表达水平进行计算及后续的差异表达分析。最后利用R软件中的phyper函数对差异表达基因进行GO功能和KEGG通路富集分析,制作富集分析图及相关通路图。结果:1.网络药理学研究发现,经筛选后,扩心方有106种有效成分,1217个相关靶点,3405个DCM相关靶点,其中,扩心方与DCM的共同靶点58个。GO分析得到1578个富集基因,KEGG分析得到132条信号通路。本研究初步发现扩心方可以通过PI3K-AKT信号通路、IL-17信号通路、HIF-1信号通路、TNF信号通路等调节淋巴管新生。靶点方面,扩心方可以通过VEGF-A、IL6、MMP9、MAPK1、CCL2、CASP3、IL1B、EGFR、NOS3、CXCL8、FOS、STAT3、IL10、MMP2、MYC、ICAM1、P

关键词：扩心方黄芪多糖扩张型心肌病斑马鱼淋巴管新生 RNA-Seq 网络药理学

阿霉素诱导扩张型心肌病模型小鼠心脏淋巴管生成障碍及扩心方干预作用的研究

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世界科学技术-中医药现代化 2024年

作者：董艺丹马梦娇彭珑萍周茂琳梁倩倩吴琼王延文王佑华上海中医药大学附属龙华医院

目的观察阿霉素(Doxorubicin,DOX)诱导扩张型心肌病(Dilated cardiomyopathy,DCM)模型小鼠心脏淋巴管生成的动态变化，并研究中药扩心方(KXD)对心脏淋巴管生成的干预作用。方法应用每周腹腔注射DOX方式构建DCM小鼠模型，并每周进行动... 详细信息

目的观察阿霉素(Doxorubicin,DOX)诱导扩张型心肌病(Dilated cardiomyopathy,DCM)模型小鼠心脏淋巴管生成的动态变化，并研究中药扩心方(KXD)对心脏淋巴管生成的干预作用。方法应用每周腹腔注射DOX方式构建DCM小鼠模型，并每周进行动态观察。在此基础上，60只C57BL/6小鼠随机分为6组(n=10)：空白组，模型组，KXD低、中、高剂量组及卡托普利组。造模成功后应用KXD及阳性对照药卡托普利连续灌胃28天。采用心脏超声检测小鼠心功能，HE染色、Masson染色观察心脏病理形态学改变，Whole-mount免疫荧光染色检测心外膜淋巴管LYVE-1、Podoplanin表达，Western blot检测VEGFR-3蛋白表达，qPCR检测VEGFR-3 mRNA表达。结果 DOX诱导DCM小鼠自造模第3周(DOX:15 mg·kg-1)心功能降低明显，第5周(DOX:25 mg·kg-1)心肌纤维化程度明显(P心外膜淋巴管密度自第四周(DOX:20 mg·kg-1)降低明显(P心功能改善，心肌纤维化程度减轻，心外膜淋巴管密度升高，VEGFR-3蛋白及mRNA表达水平呈剂量依赖性上升(P心脏淋巴管生成不足，心肌纤维化严重，心脏功能减弱，且随造模时间延长、剂量的累积而逐渐加重；中药扩心方可促进DOX诱导DCM小鼠心脏淋巴管生成，改善心功能，其机制可能与上调VEGFR-3的表达有关。

关键词：扩张型心肌病淋巴管新生扩心方阿霉素心功能

阿霉素诱导扩张型心肌病模型小鼠心脏淋巴管生成障碍及扩心方干预作用的研究

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世界科学技术-中医药现代化 2023年第10期25卷 3293-3303页

作者：董艺丹马梦娇彭珑萍周茂琳梁倩倩吴琼王延文王佑华上海中医药大学附属龙华医院上海200032

目的观察阿霉素(Doxorubicin,DOX)诱导扩张型心肌病(Dilated cardiomyopathy,DCM)模型小鼠心脏淋巴管生成的动态变化,并研究中药扩心方(KXD)对心脏淋巴管生成的干预作用。方法应用每周腹腔注射DOX方式构建DCM小鼠模型,并每周进行动态观... 详细信息

目的观察阿霉素(Doxorubicin,DOX)诱导扩张型心肌病(Dilated cardiomyopathy,DCM)模型小鼠心脏淋巴管生成的动态变化,并研究中药扩心方(KXD)对心脏淋巴管生成的干预作用。方法应用每周腹腔注射DOX方式构建DCM小鼠模型,并每周进行动态观察。在此基础上,60只C57BL/6小鼠随机分为6组(n=10):空白组,模型组,KXD低、中、高剂量组及卡托普利组。造模成功后应用KXD及阳性对照药卡托普利连续灌胃28天。采用心脏超声检测小鼠心功能,HE染色、Masson染色观察心脏病理形态学改变,Whole-mount免疫荧光染色检测心外膜淋巴管LYVE-1、Podoplanin表达,Western blot检测VEGFR-3蛋白表达,qPCR检测VEGFR-3 mRNA表达。结果DOX诱导DCM小鼠自造模第3周(DOX:15 mg·kg^(-1))心功能降低明显,第5周(DOX:25 mg·kg^(-1))心肌纤维化程度明显(P心外膜淋巴管密度自第四周(DOX:20 mg·kg^(-1))降低明显(P心功能改善,心肌纤维化程度减轻,心外膜淋巴管密度升高,VEGFR-3蛋白及mRNA表达水平呈剂量依赖性上升(P心脏淋巴管生成不足,心肌纤维化严重,心脏功能减弱,且随造模时间延长、剂量的累积而逐渐加重;中药扩心方可促进DOX诱导DCM小鼠心脏淋巴管生成,改善心功能,其机制可能与上调VEGFR-3的表达有关。

关键词：扩张型心肌病淋巴管新生扩心方阿霉素心功能

扩心方对tnnt2a基因突变斑马鱼心脏保护作用的研究

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上海中医药杂志 2019年第2期53卷 72-76页

作者：赵慧刘恋费飞王蕾周端王旭王佑华上海中医药大学附属龙华医院心内科上海200032 复旦大学附属儿科医院心内科上海201102 复旦大学基础医学院生物化学与分子生物学系上海200032

目的观察扩心方对与扩张型心肌病相似表型的tnnt2a突变斑马鱼模型的心脏保护作用,并探讨其可能的作用机制。方法以正常野生型斑马鱼作为对照组,tnnt2a突变斑马鱼作为模型组,tnnt2a突变斑马鱼给予5μg/ml的扩心方进行干预作为扩心方组。... 详细信息

目的观察扩心方对与扩张型心肌病相似表型的tnnt2a突变斑马鱼模型的心脏保护作用,并探讨其可能的作用机制。方法以正常野生型斑马鱼作为对照组,tnnt2a突变斑马鱼作为模型组,tnnt2a突变斑马鱼给予5μg/ml的扩心方进行干预作为扩心方组。研究扩心方对tnnt2a突变斑马鱼的作用,观察生存率、静脉窦-动脉球(SV-BA)距离、病理切片HE染色、ATP含量、凋亡相关基因bcl-2/bax的表达情况。结果与模型组比较,扩心方对tnnt2a突变斑马鱼的心脏具有保护作用,可以提高模型组斑马鱼的生存率,增加ATP的含量,增加bcl-2/bax基因的表达(P扩心方对于tnnt2a突变斑马鱼模型具有心脏保护作用,其机制可能与改善能量代谢和减少心肌细胞的凋亡有关。

关键词：扩张型心肌病斑马鱼扩心方心脏保护

扩心方通过调节TGF-β1/Smad2通路改善扩张型心肌病大鼠心肌纤维化

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世界科学技术-中医药现代化 2022年第1期24卷 243-251页

作者：吴琼董艺丹王佑华彭珑萍王延文魏易洪王怿周嫦马梦娇周茂琳周端上海中医药大学附属龙华医院上海200032

目的观察扩心方对阿霉素诱导扩张型心肌病(DCM)大鼠心肌纤维化的改善作用并探究其作用机制。方法选取Wistar大鼠68只,设8只为空白对照组(Con组),余60只以腹腔注射阿霉素建立DCM模型后随机分为模型组(Dox组),扩心方低(KXF-L组)、扩心方中... 详细信息

目的观察扩心方对阿霉素诱导扩张型心肌病(DCM)大鼠心肌纤维化的改善作用并探究其作用机制。方法选取Wistar大鼠68只,设8只为空白对照组(Con组),余60只以腹腔注射阿霉素建立DCM模型后随机分为模型组(Dox组),扩心方低(KXF-L组)、扩心方中(KXF-M组)、扩心方高(KXF-H组)剂量组、卡扩普利组(Cap组),每组12只,连续灌胃4周。治疗结束后,行心脏超声检查测左室结构及心功能变化;Masson染色观察心肌组织形态学改变;免疫组化观察心肌组织Ⅰ型胶原(简称ColI)、Ⅲ型胶原(简称ColⅢ)表达;蛋白芯片检测TGF-β1相关通路中各蛋白表达情况;蛋白印迹法(Western blot)测心肌TGF-β1、Smad2蛋白表达。结果(1)心超:与Con组相比,Dox组LVEDD、LVESD明显增加(P心肌重塑明显,而经过扩心方干预后,LVEDD、LVESD、LVEF、LVFS明显改善(P心肌细胞肥大,间质增生,细胞排列紊乱,经扩心方干预后上述病理改变明显改善(P扩心方治疗后有明显减少(P扩心方干预后Smad2表达下调0.81倍、TGFBR2表达下调0.77倍,差异有统计学意义(P扩心方干预后,各剂量组TGF-β1表达均明显降低(P扩心方可改善阿霉素诱导的DCM大鼠心肌纤维化,其机制可能与抑制TGF-β1/Smad2信号通路有关。

关键词：扩心方扩张型心肌病心肌纤维化 TGF-β1/Smad2

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扩心方治疗慢性心力衰竭临床观察

辽宁中医杂志 2024年第1期51卷 106-109页

作者：吴琼王佑华李广浩马梦娇周茂琳安世英毛美娇曹敏周端上海中医药大学附属龙华医院上海200032

目的观察扩心方对慢性心力衰竭(chronic heart failure,CHF)患者心衰症状、心脏功能、心室重构及炎症因子的影响。方法纳入120例CHF患者,随机分为规范化西药治疗组(对照组)和扩心方联合规范化西药组(观察组),两组各60例,治疗12周,观察... 详细信息

目的观察扩心方对慢性心力衰竭(chronic heart failure,CHF)患者心衰症状、心脏功能、心室重构及炎症因子的影响。方法纳入120例CHF患者,随机分为规范化西药治疗组(对照组)和扩心方联合规范化西药组(观察组),两组各60例,治疗12周,观察两组患者治疗前后心衰症状及心功能改善情况、明尼苏达心力衰竭生活质量量表(MLHFQ)评分、六分钟步行试验(6MWT)、心超、血清脑钠肽(BNP)、白细胞介素-2(IL-2)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、转化生长因子-β(TGF-β)、血管内皮生长因子(VEGF)水平变化。结果①治疗后,对照组、观察组临床总有效率分别为56.7%、83.3%,观察组改善优于对照组(P0.05)。④治疗后,观察组在血清IL-6、TNF-α、TGF-β、VEGF水平低于对照组(P0.05)。结论扩心方可改善CHF患者临床症状,提高心功能,其机制可能与改善心室重构、抑制炎性细胞因子相关。

关键词：慢性心力衰竭扩心方临床疗效心室重构炎症因子

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扩心方治疗急性心肌梗死后患者心室重构的临床观察

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时珍国医国药 2024年第12期35卷 2816-2820页

作者：周尹轶凡吴琼王佑华李睿智王浩曹敏邓兵周端上海中医药大学附属龙华医院上海200032

目的观察扩心方联合西医标准治疗对急性心肌梗死后患者心室重构的临床疗效。方法纳入100例患者随机分为对照组和观察组,每组50例,对照组给予西医标准治疗,观察组在此基础上加用扩心方,疗程12周。检测治疗前后临床疗效、心超指标(LVEF,LV... 详细信息

目的观察扩心方联合西医标准治疗对急性心肌梗死后患者心室重构的临床疗效。方法纳入100例患者随机分为对照组和观察组,每组50例,对照组给予西医标准治疗,观察组在此基础上加用扩心方,疗程12周。检测治疗前后临床疗效、心超指标(LVEF,LVEDD,LVESD,IVS,LVPWT),血清NT-proBNP,ST-2,Galectin-3,MMP-9,PICP,IL-6,VEGF以及MLHFQ评分、Lee氏心衰评分、主要心血管不良事件、安全性指标变化。结果观察组总有效率高于对照组(P扩心方联合西医标准治疗可安全有效地缓解心肌梗死后患者临床症状,改善心室重构。

关键词：扩心方急性心肌梗死心室重构气阴两虚兼血瘀证

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扩心方治疗扩张型心肌病的临床疗效观察

上海中医药杂志 2017年第6期51卷 60-62页

作者：王佑华林赟霄苑素云曹敏杨爱玲樊华周端上海中医药大学附属龙华医院心内科上海200032 上海中医药大学附属岳阳中西医结合医院义乌医院内科浙江义乌322000

目的观察扩心方治疗扩张型心肌病的临床疗效。方法将88例扩张型心肌病患者随机分为治疗组(43例)和对照组(45例)。两组均采用常规西药治疗,治疗组加用中药扩心方口服。两组疗程均为6个月,观察临床疗效,比较心功能分级、心脏超声相关指标... 详细信息

目的观察扩心方治疗扩张型心肌病的临床疗效。方法将88例扩张型心肌病患者随机分为治疗组(43例)和对照组(45例)。两组均采用常规西药治疗,治疗组加用中药扩心方口服。两组疗程均为6个月,观察临床疗效,比较心功能分级、心脏超声相关指标及血清脑钠肽水平的变化情况。结果 (1)治疗组、对照组临床总有效率分别为90.70%、73.33%;组间临床疗效比较,治疗组明显优于对照组(P心功能分级比较,治疗组明显优于对照组(P心输出量(CO)、心脏指数(CI)、左心室射血分数(LVEF)水平明显高于对照组(P心室舒张末期内径(LVEDd)、血清脑钠肽(BNP)水平明显低于对照组(P扩心方治疗扩张型心肌病,可明显改善心功能及临床症状,提高患者生活质量。

关键词：扩张型心肌病心胀扩心方本虚标实