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石蒜SRAP-PCR扩增体系的建立与优化

植物资源与环境学报 2007年第4期16卷 1-6页

作者：袁菊红权俊萍胡绵好孙视彭峰夏冰江苏省.中国科学院植物研究所(南京中山植物园) 上海交通大学农业与生物学院上海201101

以陕西产野生石蒜〔Lycorisradiata (L’Hr.)Herb.〕为材料,通过单因子实验分别研究了模板DNA、Mg2+、dNTPs、引物浓度及Taq DNA聚合酶用量对石蒜SRAP分子标记扩增体系的影响,并对扩增体系进行了优化。优化后的反应体系总体积为10μL,... 详细信息

以陕西产野生石蒜〔Lycorisradiata (L’Hr.)Herb.〕为材料,通过单因子实验分别研究了模板DNA、Mg2+、dNTPs、引物浓度及Taq DNA聚合酶用量对石蒜SRAP分子标记扩增体系的影响,并对扩增体系进行了优化。优化后的反应体系总体积为10μL,含20ng模板DNA、3.0mmol·L-1Mg2+、0.20mmol·L-1dNTPs、0.4μmol·L-1引物和0.50UTaq DNA聚合酶。运用优化体系对9个石蒜居群的基因组DNA进行扩增,获得的DNA条带清晰,多态性比较丰富。说明SRAP-PCR可用于石蒜属植物的亲缘关系、系统演化、物种鉴别和遗传多样性等领域的研究。

关键词：石蒜 SRAP—PCR 扩增体系优化遗传多样性

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香菇SRAP扩增体系的建立与优化

食用菌学报 2006年第4期13卷 10-20页

作者：付立忠魏海龙李海波吴庆其吴大丰吴学谦浙江省林业科学研究院生物技术研究所杭州310023 丽水市食用菌研究开发中心

为了建立稳定的香菇(Lentinula edodes)SRAP(sequence-related amplified polymorphis m,相关序列扩增多态性)分子标记技术体系,以香菇(Lentinula edodes)为材料,采用SDS-CTAB(sodium dodecyl sulfate-cetylri methylammoniumbromide)法提取菌丝体基因组DNA,用琼脂糖检测扩增产物,筛选优化了SRAP扩增条件。可用于香菇SRAP分析的最佳PCR条件为20μL PCR反应体系中,模板DNA25ng,Buffer l×,Mg2+2.5mmol/L,dNTP Mixture0.2mmol/L,引物0.4μmol/L,Taq DNA聚合酶1.5U。优化后的SRAP体系目标条带增多,重现性好。

关键词：香菇分子标记扩增体系优化 SRAP

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怀地黄SRAP扩增体系的建立与引物的筛选

广西植物 2010年第2期30卷 256-260,273页

作者：周春娥谷凤平路淑霞段红英周延清河南师范大学生命科学学院河南新乡453007

为建立适合怀地黄SRAP-PCR分子标记技术体系,通过单因子实验分别研究了DNA模板浓度、TaqDNA聚合酶浓度、Mg2+浓度、引物浓度以及dNTP浓度对怀地黄SRAP扩增反应的影响,确立了适合怀地黄SRAP最佳反应体系为:在25μL的反应体系中,模板DNA量... 详细信息

为建立适合怀地黄SRAP-PCR分子标记技术体系,通过单因子实验分别研究了DNA模板浓度、TaqDNA聚合酶浓度、Mg2+浓度、引物浓度以及dNTP浓度对怀地黄SRAP扩增反应的影响,确立了适合怀地黄SRAP最佳反应体系为:在25μL的反应体系中,模板DNA量20ng/25μL、2.5mmol/LMg2+、0.32μmol/L的上下游引物、0.30μmol/L的dNTP以及2.5UTaq酶,并利用确定的体系从88个引物组合中筛选出12对适合怀地黄SRAP-PCR反应的引物。

关键词：怀地黄分子标记扩增体系优化 SRAP 引物的筛选

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分蘖洋葱ISSR-PCR扩增体系的建立

东北农业大学学报 2012年第10期43卷 130-135页

作者：刘淑芹吴凤芝刘守伟潘凯东北农业大学园艺学院哈尔滨150030

以分蘖洋葱幼嫩叶片DNA为试材,采用单因素试验,对ISSR-PCR扩增体系中的退火温度、模板DNA量、Mg2+浓度、dNTP浓度、Taq酶含量以及引物浓度等各因素进行优化。结果表明,在反应体系为25μL反应液中,包含DNA模板40 ng(2μL),10×PCR Buffe... 详细信息

以分蘖洋葱幼嫩叶片DNA为试材,采用单因素试验,对ISSR-PCR扩增体系中的退火温度、模板DNA量、Mg2+浓度、dNTP浓度、Taq酶含量以及引物浓度等各因素进行优化。结果表明,在反应体系为25μL反应液中,包含DNA模板40 ng(2μL),10×PCR Buffer 3μL,Mg2(+2.5 mmol.L-1)2μL,dNTPs(2.5 mmol.L-1)3μL,引物(5 mmol.L-1)3μL,Taq酶(5 U.μL-1)0.4μL,退火温度为56℃时,分蘖洋葱ISSR-PCR扩增获得最佳效果,初步建立分蘖洋葱叶片最佳ISSR-PCR扩增体系,为ISSR分子标记技术应用于分蘖洋葱种群遗传多样性分析、遗传图谱构建、核心种质资源保存利用等奠定分子生物学的理论基础和技术支撑。

关键词：分蘖洋葱 ISSR-PCR 扩增体系优化

油莎豆SRAP-PCR体系优化及遗传多样性分析

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山东农业科学 2022年第8期54卷 31-38页

作者：赵琦琦郭玉静于梦斐王颖高文伟张斌新疆农业大学农学院新疆乌鲁木齐830000 山东省农业科学院农作物种质资源研究所山东济南250100 湖南大学研究生院隆平分院湖南长沙410125 曲阜师范大学生命科学学院山东曲阜273165

以16份油莎豆种质资源为材料,用改良的CTAB法提取基因组DNA,利用单因素试验和正交试验研究引物浓度、混合酶体积和DNA模板含量3个因素对油莎豆SRAP-PCR扩增结果的影响,以优化其SRAP-PCR体系,并对供试油莎豆种质材料的遗传多样性进行分... 详细信息

以16份油莎豆种质资源为材料,用改良的CTAB法提取基因组DNA,利用单因素试验和正交试验研究引物浓度、混合酶体积和DNA模板含量3个因素对油莎豆SRAP-PCR扩增结果的影响,以优化其SRAP-PCR体系,并对供试油莎豆种质材料的遗传多样性进行分析。结果表明,混合酶体积对SRAP-PCR反应体系影响最大,引物浓度影响最小;油莎豆SRAP-PCR总体系为15μL时,引物浓度为0.5μmol/L、混合酶体积为10.5μmol/L、DNA模板含量为80 ng的扩增效果最佳。利用最佳扩增体系,从102对引物组合中筛选出30对多态性引物,共扩增出289个多态性位点,平均多态性比率为92.82%。进一步对16份油莎豆种质的遗传多样性进行分析,结果显示其遗传一致度范围为0.60~0.93,遗传距离范围为0.07~0.40,表明供试油莎豆种质资源的遗传背景差异较小;UPGMA聚类结果表明,油莎豆种质资源亲缘关系受油莎豆品种特性和地域的影响。本研究结果可为油莎豆种质资源的多样性评价及鉴定提供方法和技术,并为其遗传育种提供依据。

关键词：油莎豆 SRAP-PCR 扩增体系优化遗传多样性

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怀地黄SRAP分子标记优化体系的建立

湖北农业科学 2009年第3期48卷 536-540页

作者：周春娥谷凤平路淑霞段红英周延清河南师范大学生命科学学院河南新乡453007

为了建立适宜怀地黄的SRAP反应体系,以22个不同类型的怀地黄品种为材料,研究了PCR反应体系的主要成分对SRAP扩增结果的影响。对SRAP反应体系中的DNA模板浓度、TaqDNA聚合酶浓度、Mg2+浓度、引物浓度以及dNTP浓度进行了探索,确立的适合... 详细信息

为了建立适宜怀地黄的SRAP反应体系,以22个不同类型的怀地黄品种为材料,研究了PCR反应体系的主要成分对SRAP扩增结果的影响。对SRAP反应体系中的DNA模板浓度、TaqDNA聚合酶浓度、Mg2+浓度、引物浓度以及dNTP浓度进行了探索,确立的适合怀地黄SRAP反应的体系为:在25μL的反应体系中,模板DNA20ng、2.5mmol·L-1Mg2+、0.32μmol·L-1的上下游引物、0.30mmol·L-1的dNTPs以及2.5UTaq酶。并利用该反应体系对怀地黄22个不同品种进行了SRAP反应,发现不同品种间的DNA谱带多态性丰富,证实该体系稳定可靠,可以用于怀地黄的分子标记研究。

关键词：怀地黄相关序列扩增多态性分子标记扩增体系优化

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八仙花SRAP反应体系的建立与优化

湖南农业科学 2008年第6期 14-16,45页

作者：李艳香李达李炎林彭尽晖朱霁琪湖南农业大学园艺园林学院湖南长沙410128

为建立适合八仙花SRAP-PCR分子标记技术体系,以八仙花栽培品种***‘Lavbla’为材料,通过单因子实验分别研究了模板DNA、dNTPs、Mg2+、Taq酶浓度和引物用量对八仙花SRAP扩增反应的影响,确立了八仙花SRAP分析的最佳反应体系为25μl:模板DN... 详细信息

为建立适合八仙花SRAP-PCR分子标记技术体系,以八仙花栽培品种***‘Lavbla’为材料,通过单因子实验分别研究了模板DNA、dNTPs、Mg2+、Taq酶浓度和引物用量对八仙花SRAP扩增反应的影响,确立了八仙花SRAP分析的最佳反应体系为25μl:模板DNA60ng、Mg2+2.0mmol/L、dNTPs0.7mmol/L、Taq酶0.5U、引物0.7μmol/L×2、10×PCRBuffer2.5μl,该反应条件下八仙花SRAP扩增条带清晰,多态性丰富。

关键词：八仙花 SRAP 扩增体系优化