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复合新型骨基质材料体内外成骨能力的组织工程研究

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解放军医学杂志 2002年第7期27卷 612-614,I003页

作者：郑磊王前裴国献马建标王亦农第一军医大学南方医院南开大学高分子研究所

为评价一种新型无机有机复合骨基质材料 (newbone matrixmaterial,NBM)的体内外成骨能力 ,取骨髓基质干细胞来源的成骨细胞与材料进行体外复合培养 ,复合体再行肌内植入 ,通过相差显微镜、扫描电镜以及组织学观察体内外成骨情况。结果... 详细信息

为评价一种新型无机有机复合骨基质材料 (newbone matrixmaterial,NBM)的体内外成骨能力 ,取骨髓基质干细胞来源的成骨细胞与材料进行体外复合培养 ,复合体再行肌内植入 ,通过相差显微镜、扫描电镜以及组织学观察体内外成骨情况。结果发现 ,体外培养时成骨细胞与材料可发生良好的粘附、增殖 ,并分泌大量细胞外基质成分 ,而细胞材料复合体肌内植入后 4周可见大量淋巴细胞和巨噬细胞浸润 ,8周仍未见新生骨组织生成。作者认为NBM的这种体内外成骨能力的差异可能与NBM具有免疫原性 ,引起宿主免疫反应。

关键词：骨基质材料成骨能力组织工程生物医学工程生物相容性材料移植免疫学

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骨髓基质细胞体外培养成骨能力的实验研究

中华外科杂志 2003年第10期41卷 798-799页

作者：曾岩马庆军郭昭庆党耕町王志国张慧珠北京大学第三医院骨科 100083

骨髓基质细胞具有良好的成骨性能。我们采用细胞培养和原位杂交的方法，对骨髓基质细胞体外培养的增殖活性和成骨表型的表达进行研究，以期为筛选具有较强增殖活性和成骨能力的细胞作移植打下基础。

关键词：骨髓基质细胞成骨能力增殖活性体外培养实验研究表型细胞培养筛选表达

碱性成纤维细胞生长因子增强重组人骨形态发生蛋白-2诱导成骨能力的剂量依赖性

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中华骨科杂志 2002年第8期22卷 496-499页

作者：杜俊杰罗卓荆胡蕴玉袁志吕荣曹艳杰第四军医大学西京医院全军骨科研究所西安710032 心血管内科实验室

目的对碱性成纤维细胞生长因子（basic　fibroblast growth factor,bFGF）增强重组人骨形态发生蛋白-2（recombinant human bone　morphogenetic protein-2,rhBMP-2）诱导成骨能力的剂量依赖性进行研究。方法280只BALB/c小鼠随机分为8组,每组35只,实验组rhBMP-2的剂量均为0.5mg,bFGF的剂量分别为0、2、10、40、80、300、500活性单位（IU）;设立单纯牛松质骨载体组为对照组。按实验设计,分别将rhBMP-2混悬液及bFGF-PVP溶液与牛松质骨载体充分混匀,负压下真空抽吸,冻干。将复合植骨材料植入小鼠右侧股部肌袋内,各组分别于术后第3、5、7、9、14、21d六个时间点取材,进行组织学、X线分析以及钙含量测定,观察各组的诱导成骨情况。结果（1）bFGF剂量为10～80IU时,间充质细胞增殖、分化,软骨细胞及新生骨形成均早于其它各组,成骨量多于其它各组,组织钙含量明显高于其它各组（P成骨能力明显增强。（2）bFGF剂量为0.2、300 IU时,各组在间充质细胞增殖、分化,软骨细胞及新生骨形成以及组织钙含量方面差异均无显著性意义（P>0.05）,提示此剂量bhBMP-2的诱导成骨能力无明显影响。（3）bFGF剂量为500IU时,术后第21d,仅1例标本可见散在的极少量新骨形成。

关键词：碱性成纤维细胞生长因子成骨能力剂量依赖性骨形态发生蛋白质类骨生成骨组织工程

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辛伐他汀对成骨细胞成骨能力的影响

中国老年学杂志 2004年第12期24卷 1108-1109页

作者：杨建辉刘淼黄茹申晓东西安交通大学第一医院疼痛科陕西西安710061

目的　研究辛伐他汀促进成骨作用的机制及量效关系。方法　取成人的髂骨松质骨 ,采用胶原胰蛋白酶消化 ,获得松质骨中的成骨细胞 ,进行纯化和培养。在此基础上添加不同浓度的辛伐他汀 ( 1× 1 0 - 1 1 、1× 1 0 - 9、1× 1 0 - 7、1... 详细信息

目的　研究辛伐他汀促进成骨作用的机制及量效关系。方法　取成人的髂骨松质骨 ,采用胶原胰蛋白酶消化 ,获得松质骨中的成骨细胞 ,进行纯化和培养。在此基础上添加不同浓度的辛伐他汀 ( 1× 1 0 - 1 1 、1× 1 0 - 9、1× 1 0 - 7、1× 1 0 - 6、1× 1 0 - 5、5× 1 0 - 5 mol/L)并进行培养。用生化法测定细胞碱性磷酸酶 (ALP)活性 ,用放射免疫法测定细胞培养液中骨钙素 (OC)和细胞间质含钙量。结果　辛伐他汀对成骨细胞ALP活性和骨钙素分泌的影响均呈正相关 ,即各浓度辛伐他汀对ALP活性、骨钙素的分泌和成骨细胞的成骨能力均有刺激作用 ,并与辛伐他汀剂量呈正相关。结论　辛伐他汀能增加成骨细胞的ALP活性和骨钙素的产生 ,提高成骨细胞的成骨能力。

关键词：辛伐他汀成骨细胞碱性磷酸酶骨钙素成骨能力

骨髓间充质干细胞与同种异体骨复合修复犬下颌骨缺损:成骨能力检测

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中国组织工程研究 2015年第14期19卷 2138-2143页

作者：景彩霞刘昌奎谭新颖罗金超胡敏延安大学医学院病原生物学教研室陕西省延安市716000 解放军总医院口腔科北京市100853

背景:同种异体骨与自体骨有相似解剖外形和生物学特性,是较佳的生物支架材料。自体骨髓来源的间充质干细胞具有多分化潜能,能向成骨、成软骨细胞分化,加速骨组织及软骨组织的形成。目的:探讨同种异体骨支架复合自体骨髓间充质干细胞促... 详细信息

背景:同种异体骨与自体骨有相似解剖外形和生物学特性,是较佳的生物支架材料。自体骨髓来源的间充质干细胞具有多分化潜能,能向成骨、成软骨细胞分化,加速骨组织及软骨组织的形成。目的:探讨同种异体骨支架复合自体骨髓间充质干细胞促进犬下颌骨半侧缺损的新骨成骨能力。方法:拔出24只比格犬左侧下颌牙,伤口愈合后2个月,人为造成犬下颌骨缺损,对照组用单纯冻干同种异体骨修复,实验组用同种异体冻干骨加自体骨髓间充质干细胞修复。术后4,12,24周对下颌骨体部进行骨密度扫描以及Micro-CT检查。结果与结论:实验组移植后12周开始,下颌骨的骨密度显著高于对照组(P<0.05),随着时间推移,实验组和对照组骨密度均增高,但实验组增高明显高于对照组。随时间推移,实验组骨结构参数成阶梯式递增或递减,对照组虽也有递增或递减,但不明显。术后24周实验组感兴趣区骨小梁分离度大于对照组(P<0.05),骨体积分数、骨小梁数量、骨小梁厚度小于对照组(P<0.05)。结果表明骨髓间充质干细胞能加速同种异体骨的骨改建速度。

关键词：干细胞骨髓干细胞骨髓间充质干细胞同种异体骨下颌骨修复重建成骨能力明胶海绵骨密度国家自然科学基金

SiRNA沉默HLA-A2表达的人骨髓间充质干细胞对人异体T淋巴细胞分泌功能及其诱导成骨能力的影响

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解剖学杂志 2012年第2期35卷 145-148,F0002页

作者：单伟包翠芬郑仕杰刘雷王岩秦书俭辽宁医学院解剖学教研室锦州121001 辽宁医学院科学实验中心锦州121001 锦州市妇婴医院不孕不育科锦州121001 辽宁辽河油田中心医院放射科盘锦124000

目的：探讨应用RNAi技术沉默HLA-A2表达的人骨髓间充质干细胞（hBMSCs）对人异体T淋巴细胞分泌功能的调节作用及诱导成骨能力的影响。方法：用siRNA转染至第3代hBMSCs将转染前、后各组的hBMSCs与PHA刺激的人异体T淋巴细胞共同培养，用EL... 详细信息

目的：探讨应用RNAi技术沉默HLA-A2表达的人骨髓间充质干细胞（hBMSCs）对人异体T淋巴细胞分泌功能的调节作用及诱导成骨能力的影响。方法：用siRNA转染至第3代hBMSCs将转染前、后各组的hBMSCs与PHA刺激的人异体T淋巴细胞共同培养，用ELISA检测各培养组上清液γ干扰素（IFN-γ）、白细胞介素2（IL-2）的水平；对2组细胞进行成骨诱导分化培养，观察细胞形态变化；碱性磷酸酶染色、计数和Von-Kossa染色、计数检测成骨能力。结果：hBMSCs表面抗原CD44、CDl66阳性。转染前hBMSCs的HLA-A2表达为阳性，转染后hBMSCs的HLA-A2表达为弱阳性；转染前hBMSCs的HLA-A2蛋白表达量高于转染后的HLA-A2蛋白表达量。转染前、后的hBMSCs均能抑制人T淋巴细胞分泌IFN-γ、IL-2，转染前、后比较有差异。ALP染色显示转染前、后的hBMSCs均出现胞质呈棕黑色的阳性反应，ALP活性检测结果显示2组之间无差异。Von-Kossa染色显示转染前、后的hBMSCs均有钙结节形成，统计2组之间无差异。结论：应用RNAi技术沉默HLA-A2表达的hBMSCs可以抑制PHA刺激人T淋巴细胞分泌因子IFN-γ、IL-2的水平，转染后的hBMSCs比未转染的hBMSCs抑制作用更强。应用RNAi技术沉默HLA-A2表达的hBMSCs，不影响其成骨能力。

关键词：骨髓间充质干细胞 RNAi技术 T淋巴细胞分泌功能成骨能力

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异种脱钙骨兔体内成骨能力的实验研究

现代口腔医学杂志 2007年第4期21卷 385-388页

作者：张保卫李静胥春孙健傅远飞上海交通大学医学院口腔医学院附属第九人民医院口腔修复科.上海市口腔医学研究所 200011

目的制备猪脱钙骨,将兔骨髓间质干细胞与猪脱钙骨支架形成细胞-生物材料复合物,回植入兔皮下观察该材料体内成骨能力。方法梯度离心法分离兔骨髓基质干细胞,向成骨细胞方向诱导培养。将猪颅骨用氯仿丙酮及过氧化氢处理后冻干保存,钴60... 详细信息

目的制备猪脱钙骨,将兔骨髓间质干细胞与猪脱钙骨支架形成细胞-生物材料复合物,回植入兔皮下观察该材料体内成骨能力。方法梯度离心法分离兔骨髓基质干细胞,向成骨细胞方向诱导培养。将猪颅骨用氯仿丙酮及过氧化氢处理后冻干保存,钴60照射消毒待用。制备细胞-生物材料复合物后植入兔皮下,分别在4w,8w,12w取材,同期大体观察及组织学检测,切片HE染色。结果倒置相差显微镜下见细胞在材料孔隙间大量生长增殖、交叠覆盖;扫描电镜观察细胞贴附于材料表面并向孔隙内生长。组织学检测4w实验组见多数骨小梁表面有细胞被覆,有较多小血管形成。8w、12w实验组见新生骨小梁有新生骨组织形成,见成骨细胞和破骨细胞并存。结论兔骨髓间质干细胞与猪脱钙骨有良好的生物相容性,在该支架材料上细胞增殖分化并具有一定的体内成骨能力。

关键词：异种脱钙骨成骨能力增殖分化

hBMP2修饰的β-TCP/胶原支架对MC3T3-E1细胞成骨能力的影响

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实用口腔医学杂志 2017年第5期33卷 598-602页

作者：赵刚曾娟李德超丁元圣朱旭佳宋天喜佳木斯大学口腔医学院正畸科 154007

目的:构建含hBMP2(human bone morphogenetic proteins 2)质粒DNA的β-TCP/胶原(β-tricalcium phosphate/collagen)支架材料,并研究其对MC3T3-E1细胞成骨能力的影响。方法:制备纳米级多孔β-TCP/胶原支架并负载含hBMP2目的 DNA基因及对照质粒形成基因修饰的支架材料。建立MC3T3-E1细胞株与复合支架的体外培养体系。将其分为支架组hBMP2组(Z)对照质粒组(Z0),平皿hBMP2组(M)和对照质粒组(M0)。复合培养后取样通过扫描电镜观察支架表面形态,成骨诱导1、3、7、14 d检测不同浓度BMP2支架组和非支架组细胞碱性磷酸酶(ALP)的活性,并在成骨诱导的不同时间点采用实时荧光定量PCR的方法检测Runx2、OCN、ALP、OPN等成骨相关标志基因表达。检测结果进行统计学分析。结果:含hBMP2为目的基因的质粒DNA修饰纳米β-TCP/I型胶原溶液复合材料表面呈多孔样结构;支架组和平皿组中加入hBMP2质粒DNA都能提高ALP的活性以及成骨相关标志基因的表达;支架组对MC3T3-E1细胞成骨促进能力优于平皿组。结论:负载hBMP2基因修饰的β-TCP/胶原支架材料具有良好的骨诱导性。

关键词： BMP2 β-TCP/胶原成骨能力骨缺损

低细胞密度状态下的人骨髓间质干细胞成骨能力研究

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现代口腔医学杂志 2005年第3期19卷 277-280页

作者：王衣祥李盛琳武登诚章魁华北京大学口腔医学院 100081

目的　研究低密度人骨髓间质干细胞(Humanbonemarrow -derivedmesenchymalstemcells,hMSCs)体内成骨能力及影响因素。方法　从人髂骨骨髓分离培养hMSCs。以不同细胞密度与块状和颗粒型磷酸钙陶瓷(HA/TCP)载体混合,移植于裸小鼠体内,分... 详细信息

目的　研究低密度人骨髓间质干细胞(Humanbonemarrow -derivedmesenchymalstemcells,hMSCs)体内成骨能力及影响因素。方法　从人髂骨骨髓分离培养hMSCs。以不同细胞密度与块状和颗粒型磷酸钙陶瓷(HA/TCP)载体混合,移植于裸小鼠体内,分别观察2和3个月,组织学评价研究hMSCs异体体内成骨的最小细胞密度。按3.3×1 0 6个细胞/cm3 载体的比例混合细胞与载体(HA/TCP和鼠尾胶原包被的HA/TCP) ,体外共培养一周后移植裸鼠皮下,3个月后,组织学评价细胞载体体系体外培养和胶原包被载体对hMSCs体内成骨能力的影响。结果　只有以3.3×1 0 6个细胞/cm3 载体在体内移植3个月后可观察到在块状和颗粒HA/TCP表面有骨组织生成。用鼠尾胶原包被的颗粒HA/TCP和细胞与载体体外共培养并无明显促进骨组织生成作用。结论　保证hMSCs异体成骨的最小细胞密度为3.3×1 0 6个细胞/cm3 载体。在低密度hMSCs状态下,鼠尾胶原和细胞与载体体外共培养并不能提高hMSCs的成骨能力。

关键词：人骨髓间质干细胞成骨能力细胞密度状态 HA/TCP hMSCs 体外共培养组织学评价鼠尾胶原 cells 磷酸钙陶瓷分离培养体内成骨混合细胞包被载体细胞载体体内移植生成作用骨组织颗粒型裸小鼠块状异体