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两面神激酶2/信号传导及转录激活因子3信号通路在地塞米松诱导成骨细胞MC3T3-E1凋亡中的作用

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中华实验外科杂志 2021年第12期38卷 2448-2451页

作者：江泽文彭普基魏思行曹家睿彭昊武汉大学人民医院骨科 430060

目的探讨两面神激酶2/信号传导及转录激活因子3(JAK2/StAt3)信号通路在地塞米松(DeX)诱导成骨细胞MC3T3-E1凋亡中作用机制。方法将成骨细胞MC3T3-E1分为3组,分别为对照组、DeX组、DeX+AG490组。对照组只加入正常培养基,DeX组加入200μmo... 详细信息

目的探讨两面神激酶2/信号传导及转录激活因子3(JAK2/StAt3)信号通路在地塞米松(DeX)诱导成骨细胞MC3T3-E1凋亡中作用机制。方法将成骨细胞MC3T3-E1分为3组,分别为对照组、DeX组、DeX+AG490组。对照组只加入正常培养基,DeX组加入200μmol/L的DeX培养,DeX+AG490组预先给予50μmol/L的AG490处理后加入200μmol/L的DeX培养。采用细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡率,蛋白印迹法检测通路蛋白及凋亡蛋白的表达。组间比较采用t检验。结果对照组、DeX组、DeX+12.5、25、50、75μmol/L的AG490的细胞存活率分别为(97.74±1.45)%、(52.05±5.50)%、(54.98±3.77)%、(70.99±4.15)%、(81.53±6.43)%、(79.16±7.35)%。表明DeX明显使成骨细胞MC3T3-E1活力降低(t=11.364,PtAt3通路抑制剂(AG490)明显抑制了DeX对成骨细胞MC3T3-E1活力的降低作用(t=4.928,PeX组、DeX+AG490组的细胞凋亡率分别为(6.067±0.545)%、(26.233±2.631)%和(8.463±1.179)%。表明DeX明显诱导成骨细胞MC3T3-E1凋亡(t=12.999,PeX诱导的成骨细胞MC3T3-E1凋亡明显受到抑制(t=10.675,Pestern blot)检测正常组、DeX组、DeX+AG490组p-JAK2蛋白表达分别为1.000±0.323、2.839±0.640、0.286±0.068,p-StAt3蛋白表达分别为1.000±0.245、3.471±0.157、0.618±0.078,bax蛋白表达分别为1.000±0.083、6.571±0.405、3.048±0.905,bcl-2蛋白表达分别为1.000±0.086、0.207±0.040、0.563±0.083,cleaved Caspase-3蛋白表达分别为1.000±0.192、5.685±0.699、3.411±0.247。DeX组较对照组p-JAK2、p-StAt3、cleaved Caspase-3、bax的表达明显增加,bcl-2的表达明显减少(t=4.429、14.912、11.100、23.561、14.565,PeX组较DeX组p-JAK2、p-StAt3、cleaved Caspase-3、bax的表达明显减少,bcl-2的表达明显增加(t=6.860、28.404、5.262、6.185、6.721,PeX通过JAK2/StAt3信号通路,调节cleaved Caspase-3、bax、bcl-2的表达,诱导成骨细胞MC3T3-E1凋亡。

关键词：两面神激酶2/信号传导及转录激活因子3信号通路地塞米松成骨细胞MC3T3-E1 凋亡

丹参酮ⅡA对成骨细胞mc3 t3-e1增殖、凋亡以及细胞周期分布的影响

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中华实验外科杂志 2019年第1期36卷 21-23页

作者：王刚刘宏建李振伟程田马炳全张彤郑州大学第一附属医院康复医学科 450052 郑州大学第一附属医院骨科 450052

目的观察丹参酮ⅡA对成骨细胞MC3T3-E1增殖、凋亡以及细胞周期分布的影响。方法将成骨细胞MC3T3-E1分为4组,分别为空白对照组、低浓度组(5×10^-3 mg/L)、中浓度组(5×10^-2 mg/L)与高浓度组(5×10^-1 mg/L)。空白对照组不加任何药物... 详细信息

目的观察丹参酮ⅡA对成骨细胞MC3T3-E1增殖、凋亡以及细胞周期分布的影响。方法将成骨细胞MC3T3-E1分为4组,分别为空白对照组、低浓度组(5×10^-3 mg/L)、中浓度组(5×10^-2 mg/L)与高浓度组(5×10^-1 mg/L)。空白对照组不加任何药物,只使用常规细胞培养液;低浓度组、中浓度组、高浓度组分别加入相应浓度比例的丹参酮ⅡA进行细胞培养,噻唑蓝(Mtt)法检测甲状腺癌细胞增殖能力,流式细胞仪检测细胞周期及凋亡。结果低、中、高浓度组在不同时间段成骨细胞MC3T3-E1的增殖率显著高于空白对照组,高浓度组在不同时间段成骨细胞MC3T3-E1的增殖率显著高于低浓度组(F=2.140、2.130、3.120,P成骨细胞MC3T3-E1的凋亡率显著低于空白对照组,高浓度组在不同时间段成骨细胞MC3T3-E1的凋亡率显著低于低浓度组(F=2.390、2.990、3.020,P细胞比例显著高于空白对照组,处于S期与G2/M期的细胞比例显著低于空白对照组,高浓度组在不同时间段的处于G0/G1期的细胞比例显著高于低浓度组和中浓度组,且处于S期与G2/M期的细胞比例显著低于低浓度组和中浓度组(F=2.310、2.700、2.340、2.170、4.920、4.420、2.840、2.120、4.180,P成骨细胞MC3T3-E1的增殖,抑制成骨细胞MC3T3-E1的凋亡,可明显改善成骨细胞MC3T3-E1的周期分布。

关键词：丹参酮ⅡA 成骨细胞MC3T3-E1 增殖凋亡

原子力显微镜研究成骨细胞MC3T3-E1的生物力学属性

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原子力显微镜研究成骨细胞MC3T3-E1的生物力学属性

作者：张小爽天津理工大学

学位级别：硕士

细胞生物力学属性的探索具有重要的病理与生理学相关性,细胞对外力的反应在包括癌症转移和糖尿病在内的众多临床问题的发展中起重要作用。原子力显微镜被广泛用作定量纳米级生物识别工具,用于表征细胞的形态和力学属性。本论文将活的小... 详细信息

细胞生物力学属性的探索具有重要的病理与生理学相关性,细胞对外力的反应在包括癌症转移和糖尿病在内的众多临床问题的发展中起重要作用。原子力显微镜被广泛用作定量纳米级生物识别工具,用于表征细胞的形态和力学属性。本论文将活的小鼠成骨细胞MC3T3-E1作为生物力学分析体系,利用原子力显微镜(Atomic force microscopy,AFM)表征了其表面的超精细形貌,并研究了其弹性和粘弹性力学特性。我们的发现和结果为成骨细胞的生物力学功能提供了新的视角,并为理解其他生物力学子系统中不同长度尺度的结构-功能相关性提供了类似策略。具体研究内容涵盖以下几方面:对小鼠成骨细胞MC3T3-E1进行形貌成像,获得了超高分辨率的成骨细胞完整形态及亚细胞结构图像,为细胞由结构到功能的探索奠定基础。AFM扫描图像显示在聚苯乙烯涂覆的塑料培养皿上生长的成骨细胞平均高度为2.57±1.73?m,具有呈多边形外观,细胞核、细胞质以及细胞边缘可以被清楚的观察到。图像还展现出肌动蛋白细胞骨架及丝状伪足的精细细节。结果表明肌动蛋白微丝呈束状结构并沿着多边形内对角线方向平行排列,且不同亚细胞区域的细胞骨架排列有所差异。利用AFM表征了成骨细胞MC3T3-E1在完整结构区域上的弹性力学属性,提供了活的成骨细胞瞬时弹性的测定方法以及适当的理论力学模型。根据Hertz模型获得了成骨细胞不同亚细胞区域(包括细胞核、细胞质和细胞边缘)的弹性模量,结果表明细胞核处最软,弹性模量为1.8±0.3k Pa,随后是细胞质,弹性模量为2.6±0.4k Pa,最后是细胞边缘,弹性模量为10.9±0.6k Pa。利用AFM表征了成骨细胞MC3T3-E1在完整结构区域上的粘弹性力学属性,提供了活的成骨细胞粘弹性的测定方法以及适当的粘弹性力学模型。采用接近-保持-退回的方法研究了细胞的应力松弛过程和应变蠕变过程,通过广义Maxwell力学模型诠释这种具有时间依赖性的力学行为。提取了包括松弛特征时间?和?、蠕变特征时间x和x、瞬时响应y及力衰减振幅A+A在内的粘弹性特征参数。结果表明随着时间的变化,成骨细胞粘弹性存在明显的快速和慢速力学响应,细胞核处的粘弹性力学属性比核周更加显著,反映在细胞核的力松弛幅度和变形幅度最大,达到稳态的时间最长,瞬时响应最弱。实验结果为细胞骨架功能与细胞延迟性力学行为之间的关系提供了重要的参考。

关键词：成骨细胞MC3T3-E1 细胞骨架弹性粘弹性原子力显微镜

地佐辛对成骨细胞MC3T3-E1增殖、分化及对Wnt/β-catenin信号通路的影响

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中国医院用药评价与分析 2022年第8期22卷 939-943页

作者：宋琳琳孙娜王震生魏新运衡水市第二人民医院麻醉科河北衡水053000 衡水市第二人民医院骨科河北衡水053000

目的:探讨地佐辛对成骨细胞MC3T3-E1增殖、分化及对Wnt/β-catenin信号通路的影响。方法:使用质量浓度为0、5、10、20、40和80μg/mL的地佐辛处理mc3t3-e1细胞48 h后,采用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)检测细胞存活率,计算半数抑制浓度(IC)。... 详细信息

目的:探讨地佐辛对成骨细胞MC3T3-E1增殖、分化及对Wnt/β-catenin信号通路的影响。方法:使用质量浓度为0、5、10、20、40和80μg/mL的地佐辛处理mc3t3-e1细胞48 h后,采用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)检测细胞存活率,计算半数抑制浓度(IC)。将mc3t3-e1细胞分为对照组、地佐辛低浓度组(10μg/mL)、地佐辛中浓度组(20μg/mL)、地佐辛高浓度组(40μg/mL)和地佐辛高浓度+氯化锂(LiCl)组(40μg/mL+20μmol/L),采用CCK-8检测细胞存活率;碱性磷酸酶(ALP)检测试剂盒检测细胞ALP活性;茜素红染色检测细胞钙化结节;蛋白质印迹法检测细胞中成骨分化相关蛋白[Runt相关转录因子2(RUNX2)、骨桥蛋白(OPN)和骨钙素(OCN)]及Wnt/β-catenin信号通路蛋白(Wnt3a、β-catenin)表达水平。结果:mc3t3-e1细胞对地佐辛的IC约为20μg/mL;与对照组比较,地佐辛低、中及高浓度组细胞存活率、ALP活性和钙化结节数目,RUNX2、OPN、OCN、Wnt3a和β-catenin蛋白表达水平依次降低,差异均有统计学意义(P细胞存活率、ALP活性和钙化结节数目,RUNX2、OPN、OCN、Wnt3a和β-catenin蛋白表达水平明显升高,差异均有统计学意义(Pt/β-catenin信号通路来抑制成骨细胞MC3T3-E1的增殖、分化。

关键词：地佐辛成骨细胞MC3T3-E1 增殖分化 Wnt/β-catenin信号通路

姜黄素对2型糖尿病小鼠成骨及高糖环境下mc3t3-e1细胞增殖、凋亡和成骨表达的影响

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姜黄素对2型糖尿病小鼠成骨及高糖环境下MC3T3-E1细胞增殖、凋亡...

作者：杨晓丰中国医科大学

学位级别：硕士

目的:本课题旨在观察姜黄素对2型糖尿病模型小鼠下颌骨成骨情况的影响,探讨姜黄素对高糖环境下成骨细胞MC3T3-E1增殖、凋亡和成骨表达的作用。材料方法:1、10周龄SPF级BLKS/Jdb/m雄性小鼠5只作为对照组,从SPF级2型糖尿病模型BLKS/Jdb/d... 详细信息

目的:本课题旨在观察姜黄素对2型糖尿病模型小鼠下颌骨成骨情况的影响,探讨姜黄素对高糖环境下成骨细胞MC3T3-E1增殖、凋亡和成骨表达的作用。材料方法:1、10周龄SPF级BLKS/Jdb/m雄性小鼠5只作为对照组,从SPF级2型糖尿病模型BLKS/Jdb/db雄性小鼠10只中随机选取5只作为糖尿病组,其余5只作为姜黄素治疗组。治疗组姜黄素以100mg/kg/d剂量灌胃,对照组和糖尿病组给予等量生理盐水(含0.1%DMSO助溶),治疗10周。在取材前7天和3天,分别对各组小鼠肌肉注射钙黄绿素(20mg/kg)和四环素(30mg/kg),取材并制作下颌骨组织切片,荧光显微镜下观察皮质骨连续性,Masson染色观察松质骨密度、成骨情况等;2、选取3组糖浓度(5.5mmol/L、11mmol/L和16.5mmol/L)和2组姜黄素浓度(5μmol/L和10μmol/L),设置对照组、中糖组、高糖组、中糖低药组、中糖高药组、高糖低药组和高糖高药组7个分组分别培养mc3t3-e1成骨细胞。(1)培养24h、48h和72h,CCK-8比色法检测三个时间点成骨细胞增殖情况;(2)培养48h,Annexin V/PI双染色法检测成骨细胞早期凋亡率;(3)分别培养72h,实时荧光定量PCR检测细胞成骨相关标志物(Runx2、OPN、Col-1)的表达水平。结果:1、四环素-钙黄绿素荧光标记显示与对照组相比,糖尿病组小鼠下颌骨骨皮质处荧光带厚度和荧光带亮度均下降,荧光条带不连续,而姜黄素治疗后小鼠骨皮质处荧光带厚度、亮度和连续性均明显提高;2、Masson染色显示与对照组相比,糖尿病组小鼠下颌骨骨松质内出现大量白色空泡,骨组织密度低、矿化程度低,姜黄素治疗后小鼠骨松质密度和矿化程度较糖尿病组明显改善;3、CCK-8比色法显示24h各组OD值无统计学差异(P>0.05),在48h和72h,与对照组相比,中糖组和高糖组OD值均有明显降低(P0.05);4、Annexin V/PI双染色法显示,培养48h,与对照组相比中糖组和高糖组细胞早期凋亡率明显升高(P细胞早期凋亡率均降低(P0.05),与高糖组相比,高糖低药组和高糖高药组细胞早期凋亡率明显降低(P细胞早期凋亡率降低(P细胞OPN的表达无明显差异(P>0.05);与中糖组相比,中糖低药组和中糖高药组细胞Runx2和COL-1基因的表达量升高(P细胞Runx2和COL-1基因的表达量升高,且高糖高药组Runx2和COL-1基因的表达量高于高糖低药组(P3、姜黄素能促进高糖环境下成骨细胞MC3T3-E1的增殖,并且在一定程度上具有时间依赖性;4、姜黄素能抑制高糖环境下成骨细胞MC3T3-E1的凋亡,并且在一定程度上具有药物浓度的依赖性;5、姜黄素能促进高糖状态下mc3t3-e1细胞Runx2、OPN和COL-1基因的表达。

关键词：姜黄素 2型糖尿病小鼠成骨细胞MC3T3-E1 增殖凋亡成骨表达

成骨细胞诱导乳腺癌侧群细胞获得骨模拟特性的研究

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第三军医大学学报 2013年第11期35卷 1102-1106页

作者：杨晓宁周艳齐晓伟王明浩范林军姜军第三军医大学西南医院乳腺疾病中心重庆400038

目的以乳腺癌细胞株MDA-MB231和成骨细胞株mc3t3-e1为对象,研究在共培养条件下乳腺癌侧群细胞向成骨细胞转化的能力。方法通过流式细胞技术分选出MDA-MB231乳腺癌侧群细胞,将其与成骨细胞株mc3t3-e1按照1∶1的细胞比例分别置于transwel... 详细信息

目的以乳腺癌细胞株MDA-MB231和成骨细胞株mc3t3-e1为对象,研究在共培养条件下乳腺癌侧群细胞向成骨细胞转化的能力。方法通过流式细胞技术分选出MDA-MB231乳腺癌侧群细胞,将其与成骨细胞株mc3t3-e1按照1∶1的细胞比例分别置于transwell间接共培养体系的上、下小室中(实验组),设置相同密度的单纯乳腺癌侧群细胞为对照组,观察侧群细胞的形态变化。通过细胞免疫荧光技术及Western blot,比较2组侧群细胞中OPN、Runx2、Wnt-1表达水平的改变。结果实验组细胞分化明显,细胞免疫荧光技术检测实验组侧群细胞中OPN、Runx2、Wnt-1表达水平明显高于对照组。Western blot检测表明实验组侧群细胞中OPN(5.15±0.35)、Runx2(6.22±0.36)、Wnt-1(9.30±0.28)的蛋白表达水平均高于对照组OPN(1.00±0.15)、Runx2(1.00±0.14)、Wnt-1(1.00±0.13),差异具有统计学意义(P成骨细胞株共培养后,乳腺癌侧群细胞获得成骨细胞相关生物学特性。

关键词：乳腺癌侧群细胞 MDA—MB231 成骨细胞MC3T3-E1

林蛙油提取物对过氧化氢诱导mc3t3-e1损伤的保护

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食品安全质量检测学报 2019年第19期10卷 6630-6636页

作者：兰兴成曲晓波罗从雷陈锡俊曹占鸿王继凤修志儒阚默杨擎李娜石晓征韩冬李晓华长春中医药大学长春130017 临沂市质量监督信息所临沂276000

目的研究林蛙油提取物(ranaoilextract,ROe)对过氧化氢致小鼠成骨细胞(mc3t3-e1)损伤的保护作用。方法采用Mtt方法检测细胞活力,筛选林蛙油提取物促mc3t3-e1细胞生长的最佳给药浓度和时间,Western blotting法检测骨形态发生蛋白-2(BMP2... 详细信息

目的研究林蛙油提取物(ranaoilextract,ROe)对过氧化氢致小鼠成骨细胞(mc3t3-e1)损伤的保护作用。方法采用Mtt方法检测细胞活力,筛选林蛙油提取物促mc3t3-e1细胞生长的最佳给药浓度和时间,Western blotting法检测骨形态发生蛋白-2(BMP2)、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase, ALP)、骨钙素(osteocalcin)、Runt相关转录因子2(Runx2)蛋白表达。应用逆转录-聚合酶链反应(reversetranscription-polymerasechain reaction, Rt-PCR)检测骨生长相关基因的表达。结果经过Mtt法筛选, 400μg/mL、24 h为ROe的最佳给药浓度及时间,与空白对照组比较,模型对照组mc3t3-e1细胞ALP蛋白表达水平降低(Pteocalcin表达明显降低(Pe给药组中ALP、BMP2蛋白表达水平升高(Pteocalcin、Runx2蛋白表达水平明显升高(Pteocalcin显著下调(Pe给药组ALP、Runx2基因表达均上调(Pteocalcin基因表达显著下调(Pe可以调控骨代谢基因和蛋白的表达水平,对H2O2损伤的mc3t3-e1老年型骨质疏松模型有一定的保护作用。

关键词：林蛙油提取物成骨细胞MC3T3-E1 骨质疏松过氧化氢

竹叶总黄酮通过抑制Nox4减轻H_2O_2诱导的成骨细胞氧化损伤

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实用药物与临床 2018年第3期21卷 246-251页

作者：季泽娟张春旭郭占豪刘方娜刘鑫郑州儿童医院骨科郑州450000

目的探究抑制烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶4(Nox4)表达后竹叶总黄酮对H2O2诱导的成骨细胞氧化损伤的减轻作用。方法 M3t3-e1成骨细胞培养后分为5组,正常组、损伤组、药物处理组、空白转染组、Nox4转染组。收集细胞上清液,采用酶联免... 详细信息

目的探究抑制烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶4(Nox4)表达后竹叶总黄酮对H2O2诱导的成骨细胞氧化损伤的减轻作用。方法 M3t3-e1成骨细胞培养后分为5组,正常组、损伤组、药物处理组、空白转染组、Nox4转染组。收集细胞上清液,采用酶联免疫法测定超氧化物歧化酶(SOD)、乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)含量,DCFH-DA荧光探针法检测活性氧(ROS)含量。钙结节染色、碱性磷酸酶(ALP)染色观察细胞成骨能力;Mtt法检测M3t3-e1细胞活力;流式细胞仪检测M3t3-e1细胞凋亡情况;Western blot检测Nox4蛋白的表达。结果与正常组、药物处理组、NOX4转染组比较,损伤组、空白转染组SOD含量降低,MDA、LDH、ROS含量升高。ALP染色显示,损伤组成骨细胞大量损伤,数量明显减少,药物处理组、NOX4转染组细胞损伤程度明显降低,数量有所增加。茜红素染色显示,损伤组细胞钙结节数量减少,药物处理组、NOX4转染组细胞钙结节数量增多。与损伤组、空白转染组比较,药物组、NOX4转染组ALP活性升高。Mtt显示,损伤组细胞活力明显降低,药物处理组、NOX4转染组细胞活力升高。流式细胞仪结果显示,损伤组、空白转染组细胞出现大量凋亡,药物处理组、NOX4转染组凋亡程度较轻。Western blot显示,药物处理组、Nox4转染组M3t3-e1细胞Nox4蛋白相对表达量明显降低。结论竹叶总黄酮对H_2O_2诱导的成骨细胞氧化损伤具有一定的保护作用,其机制可能与抑制Nox4蛋白表达有关。

关键词：竹叶总黄酮烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶4 成骨细胞MC3T3-E1 氧化损伤