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RPL38通过调控成肌细胞增殖影响狮头鹅肌肉发育进程

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中国家禽 2022年第8期44卷 9-15页

作者：陈家辉张帅邓先旗张丹璐陈庚华温华强殷允谦林泽桐张细权罗文华南农业大学动物科学学院广东广州510642 广东省农业动物基因组学与分子育种重点实验室广东广州510642

试验旨在探究RPL38基因对狮头鹅肌肉发育进程的影响。选取15胚龄狮头鹅胚胎,分离出腿肌中的成肌细胞,并进行相关分子试验验证。采用RACE试验扩增出狮头鹅肌肉组织RPL38基因的全长mRNA,并参考mRNA序列克隆出表达载体。利用细胞周期检测... 详细信息

试验旨在探究RPL38基因对狮头鹅肌肉发育进程的影响。选取15胚龄狮头鹅胚胎,分离出腿肌中的成肌细胞,并进行相关分子试验验证。采用RACE试验扩增出狮头鹅肌肉组织RPL38基因的全长mRNA,并参考mRNA序列克隆出表达载体。利用细胞周期检测试验和EDU增殖试验检测成肌细胞增殖,利用qRT-PCR检测肌肉分化相关基因的表达。结果发现RPL38蛋白的进化保守程度极高,但mRNA序列则保守程度很低。RPL38基因在狮头鹅成肌细胞增殖期高表达,而在分化中表达显著下调,通过在狮头鹅成肌细胞中过表达和干扰RPL38基因,发现RPL38会促进成肌细胞的增殖,但不影响成肌细胞分化。结果表明,RPL38可通过调控鹅成肌细胞增殖,影响鹅肌肉的生长发育。

关键词：狮头鹅 RPL38基因成肌细胞增殖分化

巴戟天寡糖对成肌细胞增殖及向心肌样细胞分化的影响

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中国药理通讯 2009年第2期26卷 42-43页

作者：吴瑶冯国清胡香杰郑州大学基础医学院药理教研室郑州450001

目的：研究巴戟天寡糖（Morinda officinalis How oligosaccha rides，MOO）诱导成肌细胞增殖、分化的机制并观察其是否可诱导心肌细胞标志物的表达，为临床探索运用心脏组织工程学治疗心肌梗死提供更有效的依据。方法：采用出生1～3d... 详细信息

目的：研究巴戟天寡糖（Morinda officinalis How oligosaccha rides，MOO）诱导成肌细胞增殖、分化的机制并观察其是否可诱导心肌细胞标志物的表达，为临床探索运用心脏组织工程学治疗心肌梗死提供更有效的依据。方法：采用出生1～3d的SD大鼠乳离体差速贴壁法纯化培养双侧后肢骨骼肌成肌细胞的方法，用24h后的原代成肌细胞进行试验。实验分5组：空白对照组、5-氮杂胞苷（10μmol／ml）阳性药对照组、MOO各剂量（100gg／ml、300gg／ml、500μg／m1）组。分别检测以下指标：（1）观察加药前后成肌细胞形态学改变。（2）Desmin（结蛋白）鉴定。（3）加药前后成肌细胞对异丙肾上腺素（Isoprenaline，IP）的反应。（4）采用RT-PCR法检测成肌细胞中TGF-β1、GATA-4mRNA的表达。结果：（1）与空白对照组相比，MOO诱导48h后成肌细胞生长密集，胞浆丰富，增殖明显，具有较好的折光性。并呈一定方向性的长轴平行排列，细胞融合的肌管增多，分化良好，有明显自发性搏动的收缩现象，生长状态明显好于空白对照组。（2）与空白对照组相比，IP对阳性药对照组和MOO小剂量组成肌细胞正性变时作用不明显（P〉0．05）；而IP对MOO中剂量组和大剂量组成肌细胞正性变时作用显著（P〈0．05）。

关键词：心肌样细胞分化成肌细胞增殖巴戟天寡糖 PCR法检测心脏组织工程学骨骼肌成肌细胞细胞形态学改变对异丙肾上腺素

碱性成纤维生长因子和神经生长因子对骨骼肌成肌细胞增殖作用的研究

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解放军医学杂志 1999年第3期24卷 210-212页

作者：马焰沈定国赵民江波柳川解放军北京医学高等专科学校解放军总医院军事医学科学院

生长因子，因其与多种病理生理状态有关，已受到国内外学者的普遍重视，但多关注于对神经系统发育和再生的研究。有关生长因子对肌细胞生长发育作用的研究，国内尚未见报道。作者应用肌细胞无血清培养技术，观察了碱性成纤维生长因子（... 详细信息

生长因子，因其与多种病理生理状态有关，已受到国内外学者的普遍重视，但多关注于对神经系统发育和再生的研究。有关生长因子对肌细胞生长发育作用的研究，国内尚未见报道。作者应用肌细胞无血清培养技术，观察了碱性成纤维生长因子（ｂＦＧＦ）和神经生长因子（ＮＧＦ）...

关键词：骨骼肌成肌细胞增殖 bFGF NGF Myoblast

干扰Sema7A抑制C2C12成肌细胞的增殖和分化

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中国生物化学与分子生物学报 2014年第2期30卷 170-178页

作者：贾龙李岳峰吴国芳路宏朝杨公社史新娥西北农林科技大学动物脂肪沉积与肌肉发育实验室陕西杨凌712100

为研究脑信号蛋白家族(Semaphorins)成员Sema7A对成肌细胞增殖和分化的影响,本文设计并合成了Sema7A基因的小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA),用此siRNA转染C2C12成肌细胞.通过Hoechst核染和流式细胞术检测细胞增殖情况,免疫荧光... 详细信息

为研究脑信号蛋白家族(Semaphorins)成员Sema7A对成肌细胞增殖和分化的影响,本文设计并合成了Sema7A基因的小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA),用此siRNA转染C2C12成肌细胞.通过Hoechst核染和流式细胞术检测细胞增殖情况,免疫荧光检测肌管的形成情况,realtime qPCR和Western印迹技术检测成肌标记基因的变化.结果显示,干扰Sema7A后,C2C12成肌细胞增殖减慢,处在G2和S期的细胞所占的比例明显下降,而G1期细胞的比例升高.免疫荧光检测结果显示,干扰Sema7A后,肌管的直径及MyHC+细胞所占比例均显著降低.Real-time qPCR和Western印迹结果也显示,肌肉分化标志基因MyoD、MyoG、MyHC的mRNA及蛋白质表达均下降.进一步检测Sema7A受体下游信号通路发现,干扰Sema7A后,其下游信号分子PI3K和AKT的磷酸化水平被下调.以上结果表明,Sema7A可以调节C2C12成肌细胞的增殖和分化,可能是通过其受体作用于PI3K/AKT信号通路实现的,这为进一步研究Sema7A在骨骼肌发育中的作用提供实验基础.

关键词： Sema7A C2C12 成肌分化成肌细胞增殖

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巴戟天寡糖对成肌细胞增殖及分化的影响

中国药理通讯 2009年第2期26卷 43-43页

作者：王奎鹏冯国清胡香杰郑州大学基础医学院药理教研室郑州450001

目的：观察巴戟天寡糖（Morinda Officinalis How Oligosacchalide，MOO）对成肌细胞增殖分化的影响。方法：采用离体纯化培养乳鼠双侧后肢骨骼肌成肌细胞的方法，制成浓度为1×10^5／mm3的成肌细胞悬液，接种到25ml培养瓶中培养。实验... 详细信息

目的：观察巴戟天寡糖（Morinda Officinalis How Oligosacchalide，MOO）对成肌细胞增殖分化的影响。方法：采用离体纯化培养乳鼠双侧后肢骨骼肌成肌细胞的方法，制成浓度为1×10^5／mm3的成肌细胞悬液，接种到25ml培养瓶中培养。实验分为5组：空白对照组5．氮杂胞苷（5-Aza）（10μmol／mL）对照组；MOO小、中、大剂量（100μg／ml、300μg／ml、500μg／m1）组；并检测以下指标：1．成肌细胞形态学变化。2．免疫细胞化学法鉴定结蛋白（Desmin）。3．免疫细胞化学法测定转化生长因子β1（TGF—β1）和增殖细胞核抗原（PCNA）。4．四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测巴戟天寡糖对成肌细胞增殖的影响。5．绘制生长曲线。结果：1．倒置显微镜下，成肌细胞培养24h后，可见大量折光率强的圆形细胞贴壁，且有极少量细胞有小突起；48h后，细胞呈梭形并出现单个细胞核；72h后，成肌细胞变得细长，并相互拉网，从单核期进入合体细胞阶段；继续培养，成肌细胞相互融合，形成多核性长管状初生肌管；培养第5天后，可观察到分化状态较好的肌管有自发性搏动的收缩；用desmin抗体对分裂增殖4～5天的成肌细胞进行间接免疫酶染色，细胞核外周及胞浆呈棕黄色的desmin阳性反应，表明培养的细胞为成肌细胞；成肌细胞生长曲线显示原代成肌细胞生长培养48h后开始增生，早期增殖较快，倍增时间为5d，6～7d进入平稳期。

关键词：成肌细胞增殖细胞增殖分化巴戟天寡糖增殖细胞核抗原免疫细胞化学法细胞生长曲线 desmin 骨骼肌成肌细胞

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miRNA调控成肌分化的研究进展

中国生物工程杂志 2017年第10期37卷 103-110页

作者：汤志雄苟德明深圳大学生命与海洋科学学院深圳518060

成肌分化过程包括成肌细胞的增殖,然后分化为肌细胞,最后融合形成肌管;microRNA(miRNA)是一类在转录后水平调控基因表达的微小非编码RNA,它通过靶向靶基因mRNA的3'UTR,抑制其翻译或诱导其降解。已有研究表明,miRNA在成肌分化中起重要调... 详细信息

成肌分化过程包括成肌细胞的增殖,然后分化为肌细胞,最后融合形成肌管;microRNA(miRNA)是一类在转录后水平调控基因表达的微小非编码RNA,它通过靶向靶基因mRNA的3'UTR,抑制其翻译或诱导其降解。已有研究表明,miRNA在成肌分化中起重要调控作用。根据表达方式的不同,分为肌肉特异表达的miRNA,有miR-1,miR-133,miR-206,miR-208,miR-499和miR-486;和非肌肉特异表达的miRNA,其中miR-27,miR-29,miR-128,miR-199a和miR-431在成肌分化过程中具有重要的调控功能。另外,阐述了几个与miRNA相互作用从而调控成肌分化的lncRNA的功能。通过介绍两类miRNA的靶基因及调控机制,阐述了最新的研究进展。

关键词：成肌分化 miRNA 成肌细胞增殖

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重组人胰岛素样生长因子1的制备

天津医药 2005年第7期33卷 434-436页

作者：梁东春左爱军吴亚锋郭刚张镜宇天津市内分泌研究所 300070

目的:建立人胰岛素样生长因子1(IGF-1)基因大肠杆菌高效表达系统及rhIGF-1的初步纯化方法。方法:将人IGF-1基因克隆入原核表达质粒载体pBV220,重组质粒转化大肠杆菌DH5α,温度诱导表达,WesternBlot对表达产物进行鉴定。超滤离心纯化rhIG... 详细信息

目的:建立人胰岛素样生长因子1(IGF-1)基因大肠杆菌高效表达系统及rhIGF-1的初步纯化方法。方法:将人IGF-1基因克隆入原核表达质粒载体pBV220,重组质粒转化大肠杆菌DH5α,温度诱导表达,WesternBlot对表达产物进行鉴定。超滤离心纯化rhIGF-1,纯化产物行高效液相色谱分析。H3-TdR掺入法测定所制备rhIGF-1的促细胞增殖活性。结果:成功构建了重组质粒pBV-IGF-1,聚丙烯酰胺凝胶电泳可见与预期7.5ku大小相符的蛋白条带,WesternBlot证实该条带即为rhIGF-1。超滤离心一步纯化后rhIGF-1纯度即可达95%以上。H3-TdR结果显示,所制备的rhIGF-1可促进体外培养成肌细胞增殖。结论:成功建立了rhIGF-1的制备及纯化方法,表达产物经体外试验证实具有促细胞增殖的生物活性。

关键词：人胰岛素样生长因子1 制备 Western rhIGF-1 聚丙烯酰胺凝胶电泳高效液相色谱分析 pBV220 温度诱导表达细胞增殖活性成肌细胞增殖纯化方法大肠杆菌表达产物 Blot 表达系统质粒载体原核表达 DH5α 质粒转化纯化产物

成肌因子介导microRNA表达的力学信号调控

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成肌因子介导microRNA表达的力学信号调控

作者：张马辉南方医科大学

学位级别：硕士

研究背景： MicroRNA是一类高度保守的小分子的非编码RNAs,通过与靶基因mRNA分子3’末端非翻译区域特异性结合,负性调控转录后的基因表达。已证实miRNA广泛存在于各种真核细胞中,参与生命过程的一系列过程,包括细胞生长发育,细胞增殖、... 详细信息

研究背景： MicroRNA是一类高度保守的小分子的非编码RNAs,通过与靶基因mRNA分子3’末端非翻译区域特异性结合,负性调控转录后的基因表达。已证实miRNA广泛存在于各种真核细胞中,参与生命过程的一系列过程,包括细胞生长发育,细胞增殖、分化,细胞凋亡等。其中miR-1, miR-133和miR-206被证实主要作用在肌原细胞或成肌细胞增殖、分化为成熟肌管的过程中。骨骼肌是人体最大的组织,它的收缩和舒张活动是人体各种运动的基础。各种外界刺激可能引起骨骼肌细胞细微损伤、凋亡以及坏死等,与此同时骨骼肌也可不断地进行修复和再生。骨骼肌的再生修复过程主要是由外部力学因素和内部细胞因素两者共同协调完成的一个非常复杂且呈多阶段的过程。然而骨骼肌自身修复的能力有限,严重的骨骼肌损伤恢复不佳会极大的影响人们的运动能力和生活质量,并且随着骨骼肌损伤的发病率越来越高,有关骨骼肌损伤后修复、再生和重建的细胞、分子以及力学水平的机制研究日益受到研究者们的重视,一种结合细胞分子水平和力学刺激治疗骨骼肌损伤的新方法殛待被发现。 1993年,Lee RC等在秀丽新小杆线虫c.elegans中意外地发现了一种定时调控胚胎后期发育的miRNA-lin4,它是一种非编码RNA,长度为22nt。2000年,miRNA-let7的发现掀起了寻找miRNA的热潮。近几年,随着生物信息学的发展,分子克隆技术的改进和模式物种cDNA文库的建立,相继又在线虫、果蝇、Hela细胞等许多真核模式生物和细胞中找到了数百种相似的小分子RNA,并将其称为miRNA (microRNA)。MicroRNA是小分子的进化上高度保守的非编码RNAs,其由RNA聚合酶Ⅱ转录作为编码一个或多个miRNAs的长前体miRNAs。大部分miRNA作为独立的转录本被转录,但大约有1/3嵌在蛋白编码基因的内含子中,被前信使RNAs剪接。Pri-miRNAs在胞核中经蛋白质Drosha和DGCR8剪切,产生一个60～70bp的具有发夹样结构的RNA,称为前体miRNA(precursor miRNA, pre-miRNA),Exprotin-5将其由胞核运至胞质,在胞质中Dicer酶将其剪切成为21～25bp的双链RNA。这个双链RNA由Dicer酶上释放,在解螺旋酶作用下分离,其中一条单链与RNA诱导沉默复合体(RNA-induced silencingcomplex, RISC)结合,与目标mRNAs互补,发挥miRNA功能,另一条立即被降解。miRNAs通过与靶mRNA3’UTRs序列特异性互补,调节基因表达,导致翻译抑制或使mRNA失去稳定性。对靶mRNA结合特异性互补的主要决定因素是由miRNA5’末端Watson-Crick2-8个碱基配对核苷酸决定,称为“种子序列”。然而,这个区域外的核苷酸作为mRNA3’UTR序列环绕区域的二级结构,同样影响mRNA抑制,且其miRNA的靶向定位与开放读框有关。microRNA与其靶基因的互补程度决定其作用模式：1、microRNA与靶mRNA完全互补结合,切割靶mRNA。2、microRNA与靶mRNA不完全互补结合,抑制靶蛋白翻译而不影响mRNA稳定性。3、同时具有以上两种作用模式。肌组织特异表达的三种miRs:即miR-1, miR-133和miR-206,它们被证实主要作用在肌原细胞或成肌细胞增殖、分化为成熟肌管的过程中。体外组织培养细胞可模拟体内肌肉增殖分化过程。使用C2C12细胞模型系统,过表达和敲除实验已应用于研究肌肉miRNA的功能。在C2C12成肌细胞中过表达的miR-1和miR-206可促进细胞分化,而过表达的miR-133可促进细胞增殖,抑制其分化。相反,抑制内源性的miR-1/206和miR-133,可导致对成肌细胞增殖、分化相反的影响。miR-1和miR-133源于相同的miRNA多顺反子,并一起转录,但miR-1和miR-133具有相反的作用。进一步研究证明miRNA可能在细胞增殖和分化的平衡中起着重要作用,miR-1和miR-133在小鼠骨骼肌肥大模型中表达水平均下降,这种表达改变是对骨骼肌超载的适应性反应。miR-206是在骨骼肌组织中表达含量最多的,且是目前所知唯一一个由骨骼肌特异表达的micorRNA,miR-206对早期肌卫星细胞的迁移也有一定的作用。由于miR-206在肌萎缩侧索硬化症中的有益作用,被称为是骨骼肌纤维和神经双向信号传导的关键调节者,它可通过感应运动神经元损伤,促进神经肌肉突触的代偿性再生。最近的研究表明miR-1, miR-133和miR-206可促进骨骼肌损伤后的修复,在小鼠撕裂的胫前肌部位局部注射miR-1, miR-133和miR-206的混合物,1周后与对照组比较可在形态和功能上显著地增强骨骼肌的重建,因此,局部加强miR-1,133和206的含量或表达在骨骼肌损伤方面可能成为

关键词： microRNA成肌因子力学拉伸信号调控成肌细胞增殖

miR-34b在成肌分化过程中的功能及作用机制研究

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miR-34b在成肌分化过程中的功能及作用机制研究

作者：汤志雄深圳大学

学位级别：硕士

背景:成肌分化过程包括成肌细胞的增殖,然后分化为成肌细胞,最后融合形成肌管。小鼠C2C12细胞是常用的研究成肌分化的细胞模型。microRNA(miRNA)是一类通过靶向靶基因mRNA的3′UTR,抑制其翻译或诱导其降解,在转录后水平调控基因表达的... 详细信息

背景:成肌分化过程包括成肌细胞的增殖,然后分化为成肌细胞,最后融合形成肌管。小鼠C2C12细胞是常用的研究成肌分化的细胞模型。microRNA(miRNA)是一类通过靶向靶基因mRNA的3′UTR,抑制其翻译或诱导其降解,在转录后水平调控基因表达的微小非编码RNA。已有研究表明,miRNA在成肌分化中起重要调控作用。最近,本研究鉴定了39个新的与成肌分化相关的miRNA,其中包括miR-34b。miR-34b是miR-34家族成员(包括miR-34a、miR-34b和miR-34c)之一,已有文献表明miR-34参与和促进多种细胞的分化,但其在成肌分化中的功能尚不清楚。目的:探究miR-34b在成肌分化过程中的功能及其调控机制。方法与结果:利用本实验室建立的S-Poly(T)Plus miRNA检测技术,发现miR-34b在成肌分化和肌肉损伤后再生过程中表达上调。在C2C12细胞中转染化学合成的miRNA类似物或抑制剂,发现miR-34b具有抑制成肌细胞增殖并促进成肌分化的功能。为探讨miR-34b调控成肌细胞增殖分化的分子机制,本研究利用isobaric tags for relative and absolute quantitation(iTRAQ)技术,在蛋白质水平定量分析了受miR-34b调控的基因,并构建了成肌细胞受miR-34b调控的网络图。在过表达miR-34b后下调的97个蛋白中,Ywhag、Ahcy和Ncl为miR-34b潜在的靶基因(生物信息学预测),并通过了3′UTR荧光素酶报告载体的验证。其中,NUCL蛋白的表达趋势与细胞分化状态密切相关。通过免疫染色和Western Blot检测,发现NUCL的表达和细胞内定位在成肌分化过程中呈现动态变化。利用慢病毒介导的shRNA技术感染C2C12细胞,发现干扰Ncl表达后能明显抑制成肌细胞增殖和成肌分化。为进一步验证Ncl在成肌分化中的作用,在C2C12细胞转染了多种靶向Ncl的siRNA,分析了nucleolin表达水平与myogenin之间的关系;结果表明,Ncl既可能促进肌肉分化,也可能抑制肌肉分化,具体功能依赖于Ncl的蛋白表达水平。另外,本研究还发现miR-34b在成肌分化过程中的显著上调受甲基化调控。结论:miR-34b在成肌过程中上调,抑制细胞增殖并促进成肌分化,该调控作用通过靶向一系列基因(包括Ywhag、Ahcy和Ncl)而实现。miR-34b-Ncl轴在成肌分化调控过程中扮演重要功能。Ncl以剂量依赖性的方式调节成肌分化,而miR-34b正是以微调的方式调控Ncl在成肌分化过程中的表达水平。

关键词： miR-34b NUCL 成肌细胞增殖成肌分化骨骼肌