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碱性成纤维细胞生长因子对犬牙周成纤维细胞样细胞增殖影响的体内研究

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华西口腔医学杂志 2004年第1期22卷 59-61页

作者：杨丕山孙钦峰宋爱梅葛少华山东大学口腔医院口腔内科山东大学第二医院口腔科山东济南250012

目的　观察碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)对犬牙周成纤维细胞样细胞增殖的影响。方法　选用 4只成年杂种犬 ,将其上颌两侧的前磨牙 (P1_3)、第一磨牙 (M1 )、下颌两侧的前磨牙 (P2_4 )、第一磨牙 (M1 )作为实验牙。在每个象限 4个实验... 详细信息

目的　观察碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)对犬牙周成纤维细胞样细胞增殖的影响。方法　选用 4只成年杂种犬 ,将其上颌两侧的前磨牙 (P1_3)、第一磨牙 (M1 )、下颌两侧的前磨牙 (P2_4 )、第一磨牙 (M1 )作为实验牙。在每个象限 4个实验牙的近中根颊侧人工制备“U”形骨缺损 ,并设计为 4组 ,即对照组、bFGF组、ePTFE组、bFGF +ePTFE组。每周手术 1次 ,每次手术做 1个象限的 4个牙位 ,连续 4次。完成 4次手术后 1周处死动物。动物处死前 1h注射尿嘧啶脱氧核苷 (BrdU) ,标本行免疫组化染色 ,显微镜下计数BrdU标记的成纤维细胞样细胞。结果　各组中BrdU+ 细胞数均于术后 2周最多 ,术后 3、4周显著减少。术后 1、2周 ,bFGF组和bFGF +ePTFE组的BrdU+ 细胞明显多于对照组和ePTFE组。结论　牙周术后 2周是牙周功能细胞增殖的活跃期 ,bFGF的局部应用可明显促进牙周愈合早期牙周功能细胞的增殖。

关键词：碱性成纤维细胞生长因子 bFGF 犬牙周成纤维细胞样细胞细胞增殖免疫组化

与颞下颌关节盘细胞共培养诱导骨髓间充质干细胞向成纤维细胞样细胞分化的研究

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与颞下颌关节盘细胞共培养诱导骨髓间充质干细胞向成纤维细胞样细...

作者：张玲兰州大学

学位级别：硕士

目的:探讨直接接触共培养法和Transwell间接接触共培养法诱导山羊骨髓间充质干细胞(Goat bone marrow mesenchymal stem cells,gBMSCs)向山羊颞下颌关节盘细胞(Temporomandibular joint disc cells,TMJ disc cells)中成纤维细胞样细胞分化的可行性及共培养最佳比例,为颞下颌关节盘组织工程的种子细胞来源提供理论依据。方法:***的提取培养和鉴定——提取培养原代BMSCs并传代;流式细胞仪检测BMSCs表面标志物;10μg/L bFGF的成纤维软骨诱导液诱导的BMSCs;甲苯胺蓝染色、天狼猩红染色、番红O染色、Ⅰ型胶原免疫组织化学染色分别检测生长因子诱导后的BMSCs成纤维细胞样分化的潜能。*** disc cells的原代、传代培养并鉴定其特异性——提取并培养原代山羊颞下颌关节盘细胞;CCK8法检测细胞的增殖活性;甲苯胺蓝和天狼猩红染色鉴定TMJ disc cells;免疫组织化学染色检测Ⅰ、Ⅱ型胶原的分布;Elisa试剂盒检测糖胺聚糖(Glycosaminoglycan,GAG)表达水平。***和TMJ disc cells共培养——在直接共培养体系和Transwell共培养体系中,均按1:2、1:1、2:1的比例(BMSCS:TMJ disc cells)对BMSCs和TMJ disc cells进行共培养,同时设置相同浓度的BMSCs在DMEM/F12培养液中培养为阴性对照组,10μg/L bFGF的成纤维软骨诱导液诱导的BMSCs为阳性对照组,分别观察共培养前后细胞的形态与增殖情况;共培养21d时,定性检测——用甲苯胺蓝、天狼猩红、番红O以及免疫荧光染色技术分别检测Ⅰ型胶原、Ⅱ型胶原和GAG含量分布;定量检测——对各组细胞爬片进行GAG,Ⅰ型胶原和Ⅱ型胶原含量检测;分子水平检测——实时荧光定量PCR检测Ⅰ型胶原和Ⅱ型胶原mRNA的表达。蛋白水平检测——Western blot检测细胞Ⅰ型胶原、Ⅱ型胶原蛋白表达水平。结果:1.山羊BMSCs表达特异性抗原CD44,而低表达造血干细胞标志抗原CD34和CD45;10μg/L bFGF的成纤维软骨诱导液诱导BMSCs,早期细胞形态未见明显变化,10d后以类似于颞下颌关节盘纤维软骨样细胞的长三角形、长梭形细胞为主;诱导后BMSCs的甲苯胺蓝、天狼猩红的组织学染色和I型胶原免疫组化染色均呈阳性,表明BMSCs具有向关节盘细胞诱导分化的能力。2.山羊颞下颌关节盘细胞的甲苯胺蓝染色和天狼猩红染色均呈阳性,说明分离提取得到的是关节盘细胞;检测P1到P5代关节盘细胞的生长曲线图,P1,P2和P3山羊颞下颌关节盘细胞生长曲线图相似,P4开始增殖能力下降;同时从分子水平检测Ⅰ型胶原和GAG的表达,从第4代起Ⅰ型胶原和GAG表达逐渐减少,说明关节盘细胞中成纤维细胞样细胞数量减少,而且合成Ⅰ型胶原和GAG的能力下降。3.在共培养实验中,CCK8法检测各组细胞的生长曲线的对比分析发现:共培养组的增长速度对比关节盘细胞对照组相对较高,而BMSCs组增长速度最慢,且增长速度最高的是直接共培养组1:2(BMSCs:TMJ disc cells),因此共培养组的细胞增长相对于Transwell间接培养体系和BMSCs诱导组生长增值能力更强;直接接触组的GAG、Ⅰ型胶原的合成和基因表达明显高于Transwell共培养组和BMSCs诱导组,且在直接共培养组的1:2(BMSCs:TMJ disc cells)表达量最高。GAG和Ⅰ型胶原是成纤维细胞样细胞特异性细胞外基质,两者的存在说明有成纤维细胞样细胞的产生;而Ⅱ型胶原合成及其基因表达在Transwell共培养组中较高,Ⅱ型胶原是软骨样细胞的特异性细胞外基质,在Transwell间接培养组中的含量表达明显,表明Transwell培养体系诱导BMSCs向软骨样细胞分化。结论:1.10μg/LbFGF诱导后的BMSCs具有向成纤维细胞样细胞分化增殖的能力2.取生长良好、I型胶原和GAG表达量居多的P2或P3关节盘细胞进行研究。3.在细胞直接接触共培养体系和Transwell间接接触共培养体系中,直接共培养法对BMSCs向成纤维细胞样细胞分化的影响大于Transwell共培养体系和BMSCs诱导组,且直接共培养最佳比例为1:2(BMSCs:TMJ disc cells)。

关键词：颞下颌关节盘骨髓间充质干细胞共培养成纤维细胞样细胞

山羊颞下颌关节盘细胞类型及分布表征在组织构建中的设计意义：

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中国组织工程研究与临床康复 2009年第46期13卷 9022-9026页

作者：舒维娜康宏张卫平李欣包广洁兰州市口腔医院修复科兰州大学口腔医学院甘肃省兰州市730000 兰州大学口腔医学院修复科兰州大学口腔医院甘肃省兰州市730000

背景:颞下颌关节盘的细胞分型分布尚无定论,对细胞的描述使用的名称也不统一。目的:表征山羊颞下颌关节盘中细胞的分型及分布。设计、时间及地点:单一样本观察,于2007-03/05在兰州大学细胞与分子生物学实验中心、电镜中心完成。材料:颞... 详细信息

背景:颞下颌关节盘的细胞分型分布尚无定论,对细胞的描述使用的名称也不统一。目的:表征山羊颞下颌关节盘中细胞的分型及分布。设计、时间及地点:单一样本观察,于2007-03/05在兰州大学细胞与分子生物学实验中心、电镜中心完成。材料:颞下颌关节盘取自两只新鲜屠宰的1月龄健康山羊。方法:完整切取山羊双侧颞下颌关节盘,按长轴(内外侧向)及短轴(前后向)分别等分为3部分和两部分,将关节盘分为6份。标记后用体积分数为10%中性甲醛固定24h,石蜡包埋。主要观察指标:苏木精-伊红染色观察关节盘各带细胞类型及数目的不同,甲苯胺蓝染色,Ⅰ型胶原免疫组织化学检测胶原的分布,透射电镜观察细胞超微结构。结果:颞下颌关节盘由不均分布的细胞和胶原纤维组成。胶原几乎都为Ⅰ型,胶原纤维一般表现为波浪形或卷曲状,纤维大致平行,而细胞散在胶原纤维基质中。细胞有成纤维细胞样细胞和软骨细胞样细胞两种,其中前者占优势,两者比例约为2.05∶1。细胞类型和分布在各区没有显著性差异。电镜超微结构显示成纤维细胞样细胞核大,梭形或不规则形,细胞器很少。软骨细胞样细胞胞核圆形或椭圆形,周围有电子透射区,细胞囊不明显,伪足少见。结论:1月龄山羊颞下颌关节盘内各个区域的细胞类型、数目与排列差异没有显著性意义。其中成纤维细胞样细胞较软骨细胞样略占优势。

关键词： 1月龄山羊颞下颌关节盘成纤维细胞样细胞软骨细胞样细胞组织工程

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山羊颞下颌关节盘细胞透射电镜观察

现代口腔医学杂志 2008年第6期22卷 612-614页

作者：舒维娜康宏甘肃兰州大学口腔医学院 730000 兰州市口腔医院修复科

目的用透射电镜的方法对两只1月龄健康山羊四只颞下颌关节盘的细胞及胶原结构进行了观察。方法切取山羊双侧颞下颌关节盘,经组织学处理后行透射电镜观察细胞和胶原超微结构特征。结果颞下颌关节盘由不均分布的细胞和胶原纤维组成,细胞... 详细信息

目的用透射电镜的方法对两只1月龄健康山羊四只颞下颌关节盘的细胞及胶原结构进行了观察。方法切取山羊双侧颞下颌关节盘,经组织学处理后行透射电镜观察细胞和胶原超微结构特征。结果颞下颌关节盘由不均分布的细胞和胶原纤维组成,细胞有成纤维细胞样细胞和软骨细胞样细胞两种,其中成纤维细胞样细胞较软骨细胞样细胞占优势。成纤维细胞样细胞表现有细长的突起,核大,梭形或不规则形,细胞器较少。软骨细胞样细胞胞核呈圆形或椭圆形,周围少有电子透射区,细胞膜不明显,胞突少见。胶原纤维由平行排列的有周期性横纹特征的胶原原纤维组成。结论颞下颌关节盘细胞有成纤维细胞样和软骨细胞样细胞两种,前者占优势,胶原原纤维表现有周期性横纹特征。这为颞下颌关节盘组织工程研究中细胞来源及表型分析奠定了一定基础。

关键词： 1月龄山羊颞下颌关节盘透射电镜成纤维细胞样细胞软骨细胞样细胞

脂肪干细胞多向分化潜能及其在美容外科的应用前景

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中华医学美学美容杂志 2011年第4期17卷 318-320页

作者：胡晓根马海欢卫生部中日友好医院整形外科北京100029

2001年Zuk等首次报道，脂肪组织中存在与成纤维细胞样细胞和骨髓间充质干细胞形态相似的多能干细胞，称之为脂肪源性干细胞（adipose—derived stem cells，ADSC）。目前已经证实，从人、兔、猪及鼠等不同物种脂肪组织中均可获得这种细胞。

关键词：多向分化潜能脂肪干细胞美容外科成纤维细胞样细胞脂肪源性干细胞应用脂肪组织多能干细胞

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幼年性透明蛋白纤维瘤病一例

中华皮肤科杂志 2011年第7期44卷 514-516页

作者：董翠香祝仁霞王华章山东省淄博市临淄区人民医院儿 255400 黄岛出入境检验检疫局

报道1例幼年性透明蛋白纤维瘤病的临床表现及实验室特点。患儿1岁起病，以皮肤多发纤维瘤及牙龈增生为特征，智力发育正常。皮损组织病理检查显示表皮正常，结节由纺缍状成纤维细胞样细胞和细胞外均一性玻璃样物质混合构成，正常组织结... 详细信息

报道1例幼年性透明蛋白纤维瘤病的临床表现及实验室特点。患儿1岁起病，以皮肤多发纤维瘤及牙龈增生为特征，智力发育正常。皮损组织病理检查显示表皮正常，结节由纺缍状成纤维细胞样细胞和细胞外均一性玻璃样物质混合构成，正常组织结构破坏。玻璃样物为非纤维性，嗜酸性，成纤维细胞胞质透明，可见模糊的束状排列，无细胞异形性和坏死。PCR扩增毛细血管形态发生因子－2基因17个外显子并测序显示：14号外显子发生纯合的剪接突变IVSl4＋1c→T，其父母均为该突变的携带者，符合常染色体隐性遗传方式。

关键词：纤维瘤病透明蛋白幼年性成纤维细胞样细胞组织病理检查常染色体隐性实验室特点 PCR扩增

Pax7表达细胞通过β连环蛋白通路促进创面修复并调节瘢痕大小

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中华烧伤杂志 2011年第6期27卷 426-426页

作者：王耘川（编译）

创面愈合过程中，成纤维细胞样细胞参与皮肤缺损区的真皮组织结构重建，其中一个亚群的β连环蛋白／T淋巴细胞因子（TCF）信号的转录在创面修复增生期较为活跃。β连环蛋白的活化强度调控真皮Fb数量，最终决定瘢痕形成的大小。该研究通... 详细信息

创面愈合过程中，成纤维细胞样细胞参与皮肤缺损区的真皮组织结构重建，其中一个亚群的β连环蛋白／T淋巴细胞因子（TCF）信号的转录在创面修复增生期较为活跃。β连环蛋白的活化强度调控真皮Fb数量，最终决定瘢痕形成的大小。该研究通过细胞谱系分析，揭示创面修复过程中B连环蛋白活化细胞的来源。通过基因报告小鼠观察到，

关键词： β连环蛋白创面修复表达细胞瘢痕形成成纤维细胞样细胞 T淋巴细胞因子调节通路

结缔组织生长因子——新发现的致肝纤维化因子

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中西医结合肝病杂志 2005年第2期15卷 122-124页

作者：黄晓丽唐望先但自立华中科技大学同济医学院附属同济医院消化内科湖北武汉430030

近年来,随着细胞生物学和分子生物学的发展,肝纤维化的发生机制已从过去病理组织学研究发展到现在细胞分子学研究,在肝纤维化的发生发展中储脂细胞激活为肌成纤维细胞样细胞和成纤维细胞,因而其激活过程已成为肝纤维化发生机制研究的热... 详细信息

近年来,随着细胞生物学和分子生物学的发展,肝纤维化的发生机制已从过去病理组织学研究发展到现在细胞分子学研究,在肝纤维化的发生发展中储脂细胞激活为肌成纤维细胞样细胞和成纤维细胞,因而其激活过程已成为肝纤维化发生机制研究的热点之一.调节储脂细胞的因子分为可溶和不可溶两类:前者为各种细胞外基质,后者包括各种生长因子和细胞因子.

关键词：结缔组织生长因子纤维化因子成纤维细胞样细胞新发肝纤维化分子生物学细胞生物学分子学研究病理组织学细胞外基质研究发展发生机制细胞激活发生发展机制研究激活过程储脂细胞细胞因子因子分