检索结果-南通市图书馆

作者：勾晓辉武汉大学

学位级别：硕士

牙本质涎磷蛋白(DSPP),由成牙本质细胞合成,合成后很快就被酶切为C端的牙本质磷蛋白(DPP)和N端的牙本质涎蛋白(DSP),且此酶切过程对其生物学功能的获得十分重要。牙本质涎蛋白,可被其他的蛋白酶进一步被酶切成小分子蛋白片段,并且其N端... 详细信息

牙本质涎磷蛋白(DSPP),由成牙本质细胞合成,合成后很快就被酶切为C端的牙本质磷蛋白(DPP)和N端的牙本质涎蛋白(DSP),且此酶切过程对其生物学功能的获得十分重要。牙本质涎蛋白,可被其他的蛋白酶进一步被酶切成小分子蛋白片段,并且其N端和C端片段在牙本质中的分布模式不同。在成牙本质细胞系MO6-G3的细胞裂解液中,不仅存在牙本质涎蛋白的全长形式,而且还有分子量处于25-65kDa之间的多种牙本质涎蛋白片段存在。明胶酶(包括基质金属蛋白酶9和2),属于基质金属蛋白酶家族,在许多生理和病理活动中发挥重要作用。以非活性酶原形式分泌到细胞外的明胶酶被其他蛋白酶激活后获得酶切活性,然后活性明胶酶通过降解某些细胞外基质成分来发挥作用。近来有文献报道,活性明胶酶能够酶切某些细胞内底物蛋白。那么,成牙本质细胞内内存在活性基质金属蛋白酶9(MMP9)的机制是什么?弗林蛋白酶(FURIN),前体蛋白转化酶家族的成员之一,广泛存在于包括成牙本质细胞在内的机体多种类型细胞内,在胚胎发育过程中作用十分关键。弗林蛋白酶可识别前体蛋白的(K/R)-(X)n-(K/R)(X是除精氨酸外的其他任何氨基酸,n=0,2,4,6)序列并酶切,从而通过激活或者失活下游的前体蛋白来发挥作用。对基质金属蛋白酶9(MMP9)的前体蛋白进行氨基酸序列分析后发现,在其前肽和活性酶结构域间存在着弗林蛋白酶的识别序列(K/R)-(X)n-(K/R),且基质金属蛋白酶9与弗林蛋白酶在成牙本质细胞内存在相互结合。在此论文中,将会探索成牙本质细胞内牙本质涎蛋白被活性明胶酶酶切及成牙本质细胞内存在活性MMP9的机制。第一部分:成牙本质细胞内牙本质涎蛋白被活性明胶酶酶切的研究目的:证明在成牙本质细胞内,牙本质涎蛋白可被活性明胶酶酶切。材料与方法:1.取新生小鼠的磨牙牙乳头细胞培养,矿化诱导液诱导分化为成牙本质细胞。2.分离出生后1天、3天、7天小鼠下颌组织,固定、脱矿、石蜡包埋后切片。对小鼠下颌组织切片及爬片上生长的成牙本质细胞进行免疫荧光实验,确定牙本质涎蛋白和明胶酶在成牙本质细胞内的表达模式,以及探索二者是否在细胞内存在共定位。3.原位邻接技术检测成牙本质细胞内牙本质涎蛋白和明胶酶的结合情况。4.明胶酶谱实验和原位明胶酶谱实验检测成牙本质细胞内明胶酶的表达情况。5.将生长密度相同的成牙本质细胞随机分成四组,在各组培养液中分别加入DMSO、MMP9抑制剂、基质金属蛋白酶2(MMP2)抑制剂及广谱基质金属蛋白酶抑制剂,置于培养箱中培养8h。相同生长密度的Mmp9-/-小鼠成牙本质细胞在相同条件下培养相同时间,然后分别收集以上各组细胞的胞内总蛋白,Western Blot技术检测成牙本质细胞内牙本质涎蛋白的表达变化。结果:1.在小鼠下颌组织中,明胶酶广泛表达于成牙本质细胞层,牙乳头细胞及周围的牙槽骨中。2.牙本质涎蛋白分别与MMP9或MMP2在成牙本质细胞内存在共定位。3.成牙本质细胞内,牙本质涎蛋白与明胶酶存在结合。4.成牙本质细胞内有明胶酶表达,且细胞内的明胶酶有活性蛋白酶和非活性酶原两种形式。5.培养液中加入不同抑制剂培养后,成牙本质细胞内的牙本质涎蛋白表达模式不同。在Mmp9-/-小鼠的成牙本质细胞内,以及加入MMP9抑制剂、MMP2抑制剂、广谱基质金属蛋白酶抑制剂培养的野生型小鼠的成牙本质细胞内,高分子量(>100kDa)牙本质涎蛋白的含量增加,且高分子量DSP蛋白(100kDa)/低分子量蛋白(成牙本质细胞组。结论:成牙本质细胞内存在活性的MMP9和MMP2蛋白酶,且二者参与了成牙本质细胞内牙本质涎蛋白的酶切。第二部分:成牙本质细胞内存在活性MMP9的机制初步探究目的:探究成牙本质细胞内存在活性基质金属蛋白酶9的机制材料与方法:1.免疫组化实验检测弗林蛋白酶(FURIN)在出生后1天和7天小鼠磨牙组织中的表达情况。2.免疫荧光实验检测成牙本质细胞内FURIN与MMP9的共定位情况。3.免疫共沉淀实验检测成牙本质细胞内FURIN与MMP9的结合情况。4.将RVKR抑制剂加入至培养基中,用于抑制成牙本质细胞内的FURIN活性,Western Blot实验检测成牙本质细胞内MMP9的变化情况。结果:1.FURIN恒定广泛的表达于成牙本质细胞层、牙囊细胞、牙乳头细胞及周围的牙槽骨中,但其在成牙本质细胞内的表达水平高于其他部位。2.成牙本质细胞内,FURIN与MMP9的表达部位存在重合。3.成牙本质细胞内,FURIN与MMP9存在结合。4.RVKR抑制FURIN活性后,成牙本质细胞内活性MMP9蛋白酶的表达量降低,且MMP9酶原/活性MMP9蛋白酶的比值增加。结论:FURIN参与了成牙本质细胞内MMP9酶原的活化

关键词：牙本质涎蛋白明胶酶弗林蛋白酶成牙本质细胞牙本质生成

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ACVR1对成牙本质细胞极性及牙本质形成的作用

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中国医科大学学报 2022年第3期51卷 193-198页

作者：王爽爽史册刘苍维胡月周怡君闫广兴孙宏晨中国医科大学口腔医学院·附属口腔医院口腔病理科辽宁省口腔疾病重点实验室沈阳110002 吉林大学口腔医院病理科长春130021 中国医科大学口腔医学院·附属口腔医院口腔修复科辽宁省口腔疾病重点实验室沈阳110002 吉林大学口腔医院修复科长春130021

目的研究Ⅰ型骨形态发生蛋白(BMP)受体活化素A受体1(ACVR1)调节小鼠成牙本质细胞极性及促进牙本质形成的作用机制。方法通过Cre-loxP系统,以Osterix为启动子激活Cre重组酶,敲除小鼠牙源性间充质细胞的Acvr1基因。于小鼠出生后21 d收集标... 详细信息

目的研究Ⅰ型骨形态发生蛋白(BMP)受体活化素A受体1(ACVR1)调节小鼠成牙本质细胞极性及促进牙本质形成的作用机制。方法通过Cre-loxP系统,以Osterix为启动子激活Cre重组酶,敲除小鼠牙源性间充质细胞的Acvr1基因。于小鼠出生后21 d收集标本,观察成牙本质细胞形态、排列及牙本质的形态;免疫荧光染色检测小鼠极性相关标记物及高尔基体的定位;天狼星红染色评价牙本质的胶原形成。结果Acvr1基因敲除后,矿化牙本质和前期牙本质之间以及前期牙本质和成牙本质细胞层之间的分界线曲折不平,牙尖处有骨样牙本质形成;成牙本质细胞高柱状形态丧失,细胞间紧密连接和顶端极性相关蛋白定位异常,高尔基体与细胞核的相对位置改变,牙本质胶原排列不规则,胶原成熟度降低。结论小鼠牙源性间充质中的ACVR1通过促进成牙本质细胞的极性,进而促进牙本质的形成。

关键词：活化素A受体1 成牙本质细胞细胞极性牙本质形成

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HDAC5对成牙本质细胞增殖和分化影响的研究

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实用口腔医学杂志 2022年第6期38卷 737-742页

作者：白玉柳鑫程小刚郭倩何文喜余擎军事口腔医学国家重点实验室口腔疾病国家临床医学研究中心陕西省口腔医学重点实验室空军军医大学第三附属医院牙体牙髓病科西安710032 空军军医大学空军特色医学中心口腔科

目的:研究组蛋白去乙酰化酶(HDAC5)对成牙本质细胞增殖及成牙/成骨分化的影响。方法:收集临床因治疗拔除的健康和牙髓炎状态的第三磨牙进行免疫荧光染色观察HDAC5在牙髓中的表达情况,慢病毒载体转染成牙本质细胞系(OLCs),建立过表达HDAC... 详细信息

目的:研究组蛋白去乙酰化酶(HDAC5)对成牙本质细胞增殖及成牙/成骨分化的影响。方法:收集临床因治疗拔除的健康和牙髓炎状态的第三磨牙进行免疫荧光染色观察HDAC5在牙髓中的表达情况,慢病毒载体转染成牙本质细胞系(OLCs),建立过表达HDAC5的OLCs,CCK8实验检测细胞增殖,碱性磷酸酶(ALP)染色及活性检测、茜素红染色观察矿化能力,Western blot检测I型胶原(COL1α)、牙本质涎磷蛋白(DSPP)、Runt相关转录因子2(Runx2)、骨钙蛋白(OCN)、骨涎蛋白(BSP)、牙本质基质蛋白1(DMP-1)的蛋白表达。结果:与健康牙髓组织相比,炎症牙髓成牙本质细胞层见高表达的HDAC5,过表达HDAC5后OLCs增殖活力抑制,ALP活性降低,矿化结节形成减少,成牙/成骨相关蛋白表达均降低(P成牙本质细胞层高表达且抑制OLCs的增殖和成牙/成骨向分化。

关键词：成牙本质细胞表观遗传学组蛋白去乙酰化酶5 成骨/成牙本质向分化细胞增殖

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成牙本质细胞表达相关蛋白作用的研究进展

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口腔医学研究 2016年第8期32卷 886-889页

作者：徐高祥张琦张鲁鲁于士洋姜秋盖立婷吉林大学口腔医院儿童口腔科吉林长春130021

成牙本质细胞分泌的蛋白质、基质、生长因子等在牙齿发育和牙髓损伤修复中都起着重要的调节作用。牙本质基质蛋白(DMP1)、牙本质涎蛋白(DSP)、牙本质磷蛋白(DPP)、巢蛋白、clock蛋白、骨黏附蛋白聚糖(OSAD)等在牙本质形成、矿化及牙本... 详细信息

成牙本质细胞分泌的蛋白质、基质、生长因子等在牙齿发育和牙髓损伤修复中都起着重要的调节作用。牙本质基质蛋白(DMP1)、牙本质涎蛋白(DSP)、牙本质磷蛋白(DPP)、巢蛋白、clock蛋白、骨黏附蛋白聚糖(OSAD)等在牙本质形成、矿化及牙本质修复等过程中发挥着各自的作用。此外,其中某些蛋白对常染色体隐性低血磷性佝偻病、非矿化组织疾病发病机制的研究具有重要意义。本文就成牙本质细胞表达相关蛋白在牙发育及损伤修复中的作用机制做一综述。

关键词：成牙本质细胞牙齿发育牙髓损伤修复

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Par3在成牙本质细胞胞间连接及其生物学功能中的作用研究

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口腔医学研究 2022年第4期38卷 350-356页

作者：王珏钰肖敏白玉程小刚吴昊泽况金鑫余擎军事口腔医学国家重点实验室国家口腔疾病临床医学研究中心陕西省口腔疾病重点实验室第四军医大学口腔医院牙体牙髓病科陕西西安710032

目的:通过下调分离缺陷基因3(partitioning defective-3,Par3)的表达探究其对小鼠成牙本质细胞系细胞(odontoblast lineage cells,OLCs)胞间连接的调控作用及相关生物学影响。方法:通过免疫荧光实验分别观察Par3在大鼠牙髓组织及小鼠成... 详细信息

目的:通过下调分离缺陷基因3(partitioning defective-3,Par3)的表达探究其对小鼠成牙本质细胞系细胞(odontoblast lineage cells,OLCs)胞间连接的调控作用及相关生物学影响。方法:通过免疫荧光实验分别观察Par3在大鼠牙髓组织及小鼠成牙本质细胞中的表达及分布;利用Western blot检测炎症状态下成牙本质细胞Par3的表达情况;利用小干扰RNA(siRNA)敲低成牙本质细胞Par3的表达后,通过透射电镜观察Par3表达下调前后小鼠成牙本质细胞胞间连接结构的变化;利用Western blot及细胞免疫荧光技术检测Par3表达下调前后细胞紧密连接相关分子ZO-1(zonula occludens-1)的表达及分布情况;最后,通过EdU(5-ethynyl-2’-deoxyuridine)、Transwell及流式细胞术等检测Par3表达下调对成牙本质细胞增殖、迁移及凋亡等生物学功能的影响。结果:Par3在大鼠牙髓组织中与成牙本质细胞分布一致。体外条件下Par3表达于成牙本质细胞胞质内,且在炎症状态下表达水平下降。Par3表达下调后小鼠成牙本质细胞胞间连接不连续,紧密连接相关蛋白ZO-1表达下调且其分布由细胞膜转移至细胞质;Par3表达下调组与对照组相比,细胞增殖、迁移能力增强,凋亡能力受抑制。结论:Par3表达下调可通过影响ZO-1的表达/分布破坏小鼠成牙本质细胞胞间连接,同时通过促进细胞增殖及迁移等能力增强了细胞的修复能力。

关键词：成牙本质细胞细胞连接 Par3 反应性牙本质

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骨形态发生蛋白-2、-4、-6、-7和-9差异性介导永生化成牙本质细胞成骨分化

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上海口腔医学 2020年第3期29卷 242-249页

作者：李静张艺王金华重庆医科大学附属口腔医院儿童口腔科重庆400015 口腔疾病与生物医学重庆市重点实验室重庆401120 重庆市高校市级口腔生物医学工程重点实验室重庆401120

目的:研究永生化成牙本质细胞(immortalized odontoblasts,iODs)的间充质干细胞表型和骨形态发生蛋白(bone morphogenetic protein,BMP)-2、-4、-6、-7和-9差异介导iODs成骨分化的作用.方法:使用SV40 T抗原永生化成牙本质细胞(odontoblasts),建立iOD细胞株,并连续检测BMP的内源性表达.使用Ad-Easy技术合成表达BMP和GFP的重组腺病毒,使用MTT试剂盒检测iOD的增殖能力.通过免疫荧光检测iOD的间充质干细胞表面标志物.在体外,使用半定量RT-PCR、碱性磷酸酶活性、茜素红染色及油红0染色检测iOD的成骨和成脂分化能力.最后,使用micro-CT和组织学分析评估体内形成的异位矿化组织的体积和密度.采用SPSS 21.0软件包中的单因素方差分析和Scheffe的多重比较检验对结果进行分析.结果:SV40T抗原有效地永生化OD.iOD细胞株保持良好的增殖活性,表达间充质干细胞表面标志物并具有多向分化能力.相比BMP-4、-6和-7,BMP-2和BMP-9具有更强的介导iOD的成骨分化作用.结论:ODs和成骨生长因子(如BMP-2和BMP-9)可用作骨组织生物工程的有效策略.

关键词：骨形态发生蛋白成牙本质细胞永生化成骨分化

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成釉细胞和成牙本质细胞的极性及其相关调控分子

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华西口腔医学杂志 2019年第3期37卷 309-313页

作者：周怡君闫广兴刘苍维张雪胡月郝新青赵欢史册孙宏晨吉林大学口腔医院病理科吉林省牙发育及颌骨重塑与再生重点实验室

成釉细胞和成牙本质细胞极性的形成,对二者的分化及功能至关重要,而极性相关分子在这一过程中发挥着不容忽视的作用。本文就成釉细胞和成牙本质细胞的极性形成过程及其相关调控分子的作用作一综述。

关键词：成釉细胞成牙本质细胞细胞极性

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层粘连蛋白受体在牙胚中的表达及其在成牙本质细胞分化中的作用研究

层粘连蛋白受体在牙胚中的表达及其在成牙本质细胞分化中的作用研...

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作者：郑赫南吉林大学

学位级别：硕士

背景:龋病、牙本质发育不全等疾病是口腔常见病、多发病,可造成牙体缺损、牙列缺损甚至牙列缺失,影响咀嚼、发音和美观。因此,研究牙本质的形成过程对于牙的再生有着重要的意义。牙本质和釉质分别由成熟的成牙本质细胞和成釉细胞分泌有... 详细信息

背景:龋病、牙本质发育不全等疾病是口腔常见病、多发病,可造成牙体缺损、牙列缺损甚至牙列缺失,影响咀嚼、发音和美观。因此,研究牙本质的形成过程对于牙的再生有着重要的意义。牙本质和釉质分别由成熟的成牙本质细胞和成釉细胞分泌有机基质并矿化形成,在牙胚发育的过程中,随着成釉细胞和成牙本质细胞分化,细胞形态逐渐从立方状转变为高柱状,细胞器重新定位,细胞核逐渐移至远离基底膜,这种细胞功能和形态上的不对称性称为细胞的极性,成牙本质细胞和成釉细胞的分泌功能都依赖着细胞极性的建立和维持。已有研究表明,基底膜的主要成分层粘连蛋白及其受体整合素β1和层粘连蛋白受体1（laminin receptor 1,LAMR1）在细胞极性的建立中起着至关重要的作用。牙发育过程中,成釉细胞与牙乳头之间也存在基底膜,然而,关于基底膜在成釉细胞和成牙本质细胞极性中的作用还有待进一步研究。目的:本实验通过探讨基底膜中主要成分层粘连蛋白的受体整合素β1和LAMR1在牙发育过程中的时空表达及其在成牙本质细胞分化中的作用,为成釉细胞和成牙本质细胞的极性研究提供理论依据。方法:取胚胎期第13.5天（embryonic day 13.5,E13.5）、E14.5、E16.5、E18.5和出生后5天（postnatal day 5,PN5）的小鼠,制备下颌第一磨牙近远中方向切片,HE染色观察牙胚组织形态,免疫组织化学染色观察整合素β1和LAMR1在小鼠下颌第一磨牙牙胚发育过程中的表达模式。通过实时荧光定量PCR（q RT-PCR）和Western blot分析整合素β1在人牙髓干细胞（dental pulp stem cells,DPSCs）体外分化过程中的表达;用si RNA基因沉默的方法抑制DPSCs中整合素β1的表达,对DPSCs进行体外成骨诱导,q RT-PCR检测DPSCs在诱导第7天和第14天成骨相关基因的表达;在诱导第7天和第14天进行ALP染色,第14天进行茜素红染色,分析整合素β1在DPSCs分化中的作用。结果:HE染色结果显示E13.5、E14.5、E16.5、E18.5、PN5分别对应小鼠牙胚的蕾状期、帽状期、钟状早期、钟状晚期和牙冠发育完成时期;免疫组化染色结果显示整合素β1和LAMR1在小鼠磨牙发育过程中的上皮和牙乳头均有表达,且其表达强度随细胞分化程度呈逐渐增强的趋势,在PN5,二者在成牙本质细胞和成釉细胞的分泌端呈强表达。q RT-PCR和Western bolt分析均显示整合素β1在DPSCs分化过程中第0、3、7、10、14天的表达逐渐增强,整合素β1的m RNA表达水平在诱导第10天和第14天时显著高于第0天（分别为P＜0.05和P＜0.01）,整合素β1的蛋白表达水平在诱导第10天和第14天时均显著高于第0天（P＜0.01）。在si RNA抑制DPSCs中整合素β1的表达条件下对DPSCs进行体外成骨诱导,q RT-PCR结果显示ALP和DSPP在诱导第7天时实验组和对照组的表达无统计学差异,在第14天时实验组低于对照组（P＜0.05）;RUNX2在诱导第7天和第14天时实验组的表达明显低于对照组(分别为P＜0.01和P＜0.05;BMP2在诱导第7天和第14天的两组无统计学差异。ALP染色结果显示在诱导第7天时和第14天时实验组染色明显弱于对照组,茜素红染色结果显示在诱导第14天时实验组较对照组钙结节形成量明显减少（P＜0.01）。结论:1、整合素β1和LAMR1表达于小鼠磨牙胚发育过程中（前）成牙本质细胞、（前）成釉细胞和基底膜中,二者可能参与细胞和细胞外基质之间信号的转导,并在成牙本质细胞和成釉细胞的分化和极性形成的过程中起到重要作用。2、整合素β1在DPSCs分化的过程中发挥重要的作用。

关键词：整合素β1 层粘连蛋白受体1 成牙本质细胞基底膜牙胚发育

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成牙本质细胞分化信号通路研究进展

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口腔医学 2020年第9期40卷 847-850页

作者：田子璐刘艺萍王珏朱松孙宏晨倪世磊吉林大学口腔医院修复科吉林长春130021

成牙本质细胞由牙髓干细胞分化而来。大量实验表明,在牙髓干细胞向成牙本质细胞分化过程中多种生物因子可激活Smad、MAPK、Wnt、Notch信号通路继而影响成牙本质细胞分化。而成牙本质细胞分化是成牙本质细胞有序排列并形成正常牙本质的... 详细信息

成牙本质细胞由牙髓干细胞分化而来。大量实验表明,在牙髓干细胞向成牙本质细胞分化过程中多种生物因子可激活Smad、MAPK、Wnt、Notch信号通路继而影响成牙本质细胞分化。而成牙本质细胞分化是成牙本质细胞有序排列并形成正常牙本质的重要前提。该文就近年来对成牙本质细胞分化信号通路的研究进展进行阐述。

关键词：成牙本质细胞 Smad MAPK Wnt Notch

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成牙本质细胞极性相关蛋白cdc42和E-cadherin的表达及功能

成牙本质细胞极性相关蛋白cdc42和E-cadherin的表达及功能

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作者：李明伟第四军医大学

学位级别：硕士

成牙本质细胞是位于牙髓组织最外层的高柱状细胞，顶端能够分泌牙本质基质，底端位于牙髓组织内，是一种典型的极性化细胞。在成牙本质细胞的发生过程中，经历了从无极性化细胞分化发育成为极性化细胞的过程。该过程的进行同时也伴随着... 详细信息

成牙本质细胞是位于牙髓组织最外层的高柱状细胞，顶端能够分泌牙本质基质，底端位于牙髓组织内，是一种典型的极性化细胞。在成牙本质细胞的发生过程中，经历了从无极性化细胞分化发育成为极性化细胞的过程。该过程的进行同时也伴随着成牙本质细胞的成熟与牙本质基质的分泌。在细胞顶底极性建立过程中，细胞连接的形成和极性蛋白复合物的定位是两个必要的细胞生物学行为。细胞连接作为相邻细胞间的锚定结构，起到阻隔外来物质通透细胞层的作用，同时作为细胞膜分隔条带，将细胞膜区域分为顶端和底端。细胞连接的建立也为细胞极性复合物在细胞膜上的定位提供了锚定结构，是细胞极性形成的前提。细胞极性复合物的发生及其在细胞膜特定区域的定位则是细胞极性形成的分子基础。极性分子在细胞膜的定位决定了细胞膜相应区域的功能。同时，细胞连接的建立和极性分子的定位也可以影响细胞器在胞浆内的分布。发育成熟的成牙本质细胞，其细胞核位于细胞的底端，内质网、高尔基体等细胞器则朝向细胞的分泌端，即细胞顶端。这种细胞形态的形成正是其细胞极性化分泌功能的形态学基础。本课题采用多种分子生物学方法证实了与成牙本质细胞极性建立密切相关的部分蛋白的表达，并对其功能进行了初步探讨，以期为相关研究提供一定的基础。 1．成牙本质细胞部分极性蛋白的表达提取小鼠牙髓组织和OLCs细胞的总RNA和总蛋白后，用PCR检测cdc42、ZO-1、occludin、claudin-1、E-cadherin mRNA的表达，用western blot检测cdc42蛋白的表达。OLCs细胞经固定、脱水、通透后，用细胞免疫荧光检测cdc42在OLCs中的表达定位。出生后2周小鼠及出生前14天、16天、18天胚胎小鼠经固定、脱水、浸蜡、包埋、切片后，用组织免疫荧光检测cdc42在牙胚发育过程中的表达。结果显示，cdc42、ZO-1、occludin、claudin-1、E-cadherin mRNA及cdc42蛋白在牙髓组织和OLCs中皆有表达。在OLCs细胞膜和细胞浆中，cdc42皆有表达并且在细胞核周围表达量明显高于其他部位。在牙胚发育过程中，cdc42参与了成牙本质细胞极性化的发生过程。 2．成牙本质细胞细胞连接的体外建立及其与LPS的关系 OLCs接种于含有α-MEM培养液的transwell小室中培养两周后，通过扫描电镜观察细胞排列状态，通过透射电镜观察细胞间连接的建立。OLCs接种于6孔板中，各组培养液中加入不同浓度LPS（10ng/ml、100ng/ml、和1000ng/ml），以条件培养液（10ng/ml LPS）中同时加入NF-κB抑制剂PDTC和LPS组作为对照;分别培养0.5h、1h、2h、6h，各时间点采用Western blot观察细胞连接蛋白E-cadherin在蛋白水平的变化;以实时定量PCR观察细胞连接蛋白ZO-1、occludin、claudin-1和E-cadherin在mRNA水平的改变。结果显示，经过立体培养的OLCs细胞间形成了明显的细胞连接。经过LPS处理后，ZO-1、occludin、claudin-1和E-cadherin的mRNA表达水平明显降低，且在一定的作用时间范围内呈明显的时间依赖性，但与浓度（10-1000ng/ml）无明显依赖性。同时，E-cadherin在蛋白水平随着LPS作用时间的延长其表达水平逐渐降低，而NF-κB抑制剂PDTC时能够抑制这种效应。 3．cdc42与牙源性细胞矿化的关系 OLCs细胞接种培养至融合80%后，实验组分别更换为矿化诱导液、含10ng/mlLPS的α-MEM培养液和含10ng/ml LPS矿化诱导液经一定时间培养后，通过westernblot测定其中cdc42含量的变化;矿化诱导液组和含ML141的矿化诱导液组培养一定时间后，通过茜素红染色观察矿化结节形成情况并进行定量分析。HDPSCs在含不同浓度LPS的矿化诱导液和含不同浓度ML141的矿化诱导液中培养一定时间后，通过茜素红染色观察矿化结节形成并定量分析。Western blot结果显示，OLCs中cdc42的表达在矿化诱导液的作用下未发生明显改变，在LPS作用下明显上调。茜素红染色结果显示，OLCs矿化结节的形成量与时间正相关，与ML141的浓度呈负相关;HDPSCs矿化结节的形成与LPS浓度正相关，与ML141浓度负相关。

关键词：成牙本质细胞细胞极性细胞连接细胞分裂周期蛋白42

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