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按摩动态力学刺激防治肥胖对成熟脂肪细胞凋亡和分泌功能的影响及机制研究

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按摩动态力学刺激防治肥胖对成熟脂肪细胞凋亡和分泌功能的影响及...

作者：刘鲲贵阳中医学院

学位级别：硕士

目的：探讨动态力学刺激对成熟脂肪细胞凋亡(PCD,Programmed cell death)及脂联素(APN,Adiponectin)及其结合受体(AdipoR1、AdipoR2)、内脂素(Visfatin)mRNA表达影响的研究,为推拿按摩防治单纯性肥胖提供理论及实验依据。方法： 1、以2... 详细信息

目的：探讨动态力学刺激对成熟脂肪细胞凋亡(PCD,Programmed cell death)及脂联素(APN,Adiponectin)及其结合受体(AdipoR1、AdipoR2)、内脂素(Visfatin)mRNA表达影响的研究,为推拿按摩防治单纯性肥胖提供理论及实验依据。方法： 1、以28日龄雄性SD大鼠(Sprague Dawley Rat)为实验材料,无菌采集附睾周围的脂肪组织,采用酶消化法分离培养成熟脂肪细胞,通过形态学观察、油红O染色法及RT-PCR方法检测成熟脂肪细胞标志性基因脂联素APN mRNA表达对原代细胞进行鉴定,并配合恒温振荡培养装置对细胞加载动态力学刺激;2、消化分离30只雄性SD大鼠附睾周围脂肪组织原代培养得到的成熟脂肪细胞并随机分为五组,OR组、60R组、90R组、120R组、150R组。经24h培养同步化后,根据相应的组别加载力不同强度的刺激,每日刺激2次,每次时长30min,间隔时间为12h,连续3日,总计刺激6次。刺激结束后,收集细胞提取DNA、总RNA,分别使用DNA凝胶电泳检测DNA Ladder的产生,观察细胞凋亡现象,RT-PCR半定量分析Bax、Bcl-2基因mRNA表达的变化。 3、按照第二部分的实验方法,获取大鼠的成熟脂肪细胞并随机分组,24h培养同步化后,根据相应的组别加载力不同强度的刺激,刺激结束后,收集细胞提总RNA,使用RT-PCR半定量分析Adiponectin及其结合受体(AdipoR1、 Adipo2)和Visfatin基因mRNA表达的变化。结果： 1、成功分离及在体外培养成熟脂肪细胞,油红O染色结果呈阳性、RT-PCR法检测脂肪细胞特异性表达基因也为阳性,且表达的量稳定。 2、DNA凝胶电泳观察到DNA Ladder现象的产生,且具有有明显的强度依赖性,刺激强度越大凋亡现象越明显;RT-PCR半定量分析各转速组别间的Bax、 Bcl-2基因mRNA表达水平的变化,Bax基因mRNA表达水平随刺激强度的增强不断上升,且组间差异非常显著(P0.05);3、 RT-PCR半定量分析各转速组别间的APN、AdipoR1、AdipoR2、Visfatin基因mRNA表达水平的变化,①APN基因mRNA的表达：与OR组相比,60R组与90R组APN的表达水平高于OR组,有及显著差异(P0.05),90R组高于OR组,有显著差异(P0.05),90R组高于OR组,有极显著差异(P成熟脂肪细胞在体内受力环境,成功建立了模拟推拿力学作用机制的模型,为从成熟脂肪细胞角度探讨单纯性肥胖病症防治奠定了基础。 2、体外模拟推拿按摩动态力学刺激能促进成熟脂肪细胞的凋亡,动态力学刺激通过改变Bax和Bcl-2这对凋亡基因的表达水平来调控成熟脂肪细胞的凋亡是推拿能防治单纯性肥胖病症的重要机制之一。 3、通常肥胖患者通常伴有严重的胰岛素抵抗(IR),适当强度按摩动态力学刺激可通过上调脂联素及其受体、内脂素的表达水平来降低肥胖患者的胰岛素抵抗,从而达到肥胖病症的治疗作用。 4、高强度的按摩动态力学刺激使得脂联素及其受体和内脂素的表达水平降低,提示强刺激可激活某种负反馈调节机制,抑制脂联素及其受体和内脂素的表达水平,但具体机制还有待进一步研究。

关键词：推拿按摩动态力学刺激单纯性肥胖成熟脂肪细胞凋亡 Bax Bcl-2 Adiponectin AdipoR1 Adipo2 Visfatin

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前脂肪细胞分化为成熟脂肪细胞后的再增殖

基础医学与临床 2003年第6期23卷 608-611页

作者：卢慧玲王宏伟林汉华华中科技大学同济医学院同济医院儿科武汉430032

用经典的的激素鸡尾酒诱导法诱导 3T3 L1前脂肪细胞分化 ,观察并比较诱导分化过程中 3T3 L1细胞的形态学变化 ;流式细胞仪分析细胞周期的构成细胞增殖的情况。结果发现诱导分化第 4天 ,3T3 L1细胞中出现脂滴 ,此时可见较多细胞具有双核 ... 详细信息

用经典的的激素鸡尾酒诱导法诱导 3T3 L1前脂肪细胞分化 ,观察并比较诱导分化过程中 3T3 L1细胞的形态学变化 ;流式细胞仪分析细胞周期的构成细胞增殖的情况。结果发现诱导分化第 4天 ,3T3 L1细胞中出现脂滴 ,此时可见较多细胞具有双核 ;诱导分化第 8天 ,90 %的 3T3 L1细胞分化 ,胞浆中含有大量的脂滴 ,脂滴聚集于核周 ,形成典型的“戒环样”结构 ,此时仍有许多含有大量脂滴的细胞具有双核 ,并观察到正在分裂成为两个细胞的脂肪细胞 ;流式细胞仪分析的结果显示 ,给予分化刺激后第 4天 ,第 8天时 ,脂肪细胞仍处于增殖期。说明来源于 3T3

关键词：前脂肪细胞成熟脂肪细胞细胞再增殖细胞分化流式细胞仪检测

用成熟脂肪建立一种新的猪前体脂肪细胞培养模型

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中国生物化学与分子生物学报 2009年第3期25卷 270-275页

作者：李惠侠罗肖刘荣鑫杨公社西北农林科技大学动物科技学院动物脂肪沉积与肌肉发育实验室陕西杨凌712100 南京农业大学动物科技学院南京210095

用去分化的成熟脂肪细胞建立一种新的具有再增殖和再分化能力的猪前体脂肪细胞模型.用"天花板"培养法分离、培养1～3日龄仔猪皮下成熟脂肪细胞,显微镜下观察细胞形态变化并计数,流式细胞术检测细胞周期;油红O染色法检测脂肪细胞分化率,R... 详细信息

用去分化的成熟脂肪细胞建立一种新的具有再增殖和再分化能力的猪前体脂肪细胞模型.用"天花板"培养法分离、培养1～3日龄仔猪皮下成熟脂肪细胞,显微镜下观察细胞形态变化并计数,流式细胞术检测细胞周期;油红O染色法检测脂肪细胞分化率,RT-PCR分析前体脂肪细胞标志基因Pref-1及成熟脂肪细胞关键转录因子PPARγ和C/EBPα等mRNA表达情况.发现刚贴壁的细胞为单室脂滴成熟脂肪细胞,油红O染色完全阳性;14d后这种成熟脂肪细胞完全去分化为无脂滴的纤维状细胞,并表达前体脂肪细胞标志基因Pref-1,油红O染色阴性.这种去分化的前体脂肪细胞在成脂诱导剂作用下,可重新分化为成熟的脂肪细胞.结果证实,成熟脂肪细胞去分化后的前体脂肪细胞可重新增殖、分化为成熟脂肪细胞,是一种新的有效的前体脂肪细胞模型.

关键词：成熟脂肪细胞 “天花板”培养增殖分化前体脂肪细胞

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颅内磷酸盐尿性间叶性肿瘤1例

中华病理学杂志 2023年第12期52卷 1293-1296页

作者：韩银程胜君苏旭杨帆成都市第五人民医院(成都中医药大学附属第五人民医院/第二临床医学院)病理科成都市肿瘤防治所成都611137

磷酸盐尿性间叶性肿瘤是一种罕见的间叶性肿瘤,患者常伴有肿瘤相关性骨软化症,严重者可致残疾,绝大部分患者肿瘤完整切除后可治愈。该病镜下组织形态多样,可与多种间叶性肿瘤重叠,极易误诊。本文报道1例罕见的原发于颅内的磷酸盐尿性间... 详细信息

磷酸盐尿性间叶性肿瘤是一种罕见的间叶性肿瘤,患者常伴有肿瘤相关性骨软化症,严重者可致残疾,绝大部分患者肿瘤完整切除后可治愈。该病镜下组织形态多样,可与多种间叶性肿瘤重叠,极易误诊。本文报道1例罕见的原发于颅内的磷酸盐尿性间叶性肿瘤,患者伴有低磷血症及骨软化症,镜下主要由温和的短梭形及卵圆形细胞组成,间质内见大量增生的毛细血管及散在厚壁血管,可见散在成熟脂肪细胞小灶。本例经过充分取材,并未发现特征性絮状钙化及破骨样巨细胞。

关键词：骨软化症间叶性肿瘤成熟脂肪细胞卵圆形细胞厚壁血管低磷血症完整切除毛细血管

鸽脂肪前体细胞的分离培养及成脂诱导分化研究

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畜牧兽医学报 2024年

作者：梁小娟李雨爽付周唐铎李莹莹王守伟中国肉类食品综合研究中心北京食品科学研究院

旨在建立鸽脂肪前体细胞的体外分离、培养、鉴定和成脂诱导分化的方法。本研究采集3只健康的1日龄银王鸽皮下脂肪组织，利用I型胶原酶进行消化以分离脂肪前体细胞，在脂肪前体细胞常规分离法基础上进行分离方法改良，对获得的脂肪前体... 详细信息

旨在建立鸽脂肪前体细胞的体外分离、培养、鉴定和成脂诱导分化的方法。本研究采集3只健康的1日龄银王鸽皮下脂肪组织，利用I型胶原酶进行消化以分离脂肪前体细胞，在脂肪前体细胞常规分离法基础上进行分离方法改良，对获得的脂肪前体细胞进行原代和传代培养，并观察细胞形态，通过免疫荧光鉴定特异性标记DLK1，确认脂肪前体细胞。通过在培养基中添加胰岛素和油酸钠进行成脂诱导分化，使用BODIPY493/503染色观察细胞中的脂滴分布情况，通过甘油三酯测定试剂盒检测细胞中甘油三酯的含量，采用实时荧光定量PCR和Western blot技术检测脂肪前体细胞成脂分化过程中分化相关基因的表达。研究结果表明，鸽脂肪前体细胞呈梭形，改良分离法比常规分离法能够获得更多的脂肪前体细胞；与37 ℃相比，在41 ℃培养温度下，获得的脂肪前体细胞数目显著增加（P脂肪前体细胞。BODIPY493/503染色结果显示，分化6 d的细胞中产生大量的脂滴。且随着分化时间的增加，细胞中甘油三酯的相对含量也显著增加（P脂肪前体细胞常规分离法，成功分离获得鸽脂肪前体细胞，且筛选出最适培养温度。获得的鸽脂肪前体细胞经胰岛素和油酸钠诱导后能高效地分化为成熟的脂肪细胞。本研究为鸽脂肪代谢分子调控机制的研究提供了良好的细胞模型，同时也为鸽生物培育肉的制备提供种子细胞和技术指导。

关键词：鸽脂肪前体细胞成脂分化成熟脂肪细胞细胞培育肉

北京黑猪脂肪前体细胞的分离培养及成脂诱导分化研究

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畜牧兽医学报 2024年

作者：梁小娟李雨爽李莹莹王守伟中国肉类食品综合研究中心北京食品科学研究院中国肉类食品综合研究中心北京食品科学研究院

旨在建立北京黑猪脂肪前体细胞的分离及成脂诱导分化培养体系，为研究猪脂肪沉积的分子机制提供试验材料，为生物培育肉的制备提供技术指导。本研究采集1头7日龄健康的雄性北京黑猪的颈部皮下脂肪组织，使用机械法联合I型胶原酶消化法... 详细信息

旨在建立北京黑猪脂肪前体细胞的分离及成脂诱导分化培养体系，为研究猪脂肪沉积的分子机制提供试验材料，为生物培育肉的制备提供技术指导。本研究采集1头7日龄健康的雄性北京黑猪的颈部皮下脂肪组织，使用机械法联合I型胶原酶消化法分离脂肪前体细胞。对获得的脂肪前体细胞进行形态观察、生长曲线绘制、免疫荧光鉴定、成脂诱导分化、油红O染色、BODIPY染色、甘油三酯含量测定及使用实时荧光定量PCR和Western blot技术检测成脂分化相关基因的表达。结果表明，分离的北京黑猪脂肪前体细胞贴壁后呈长梭形，细胞生长曲线呈S型。免疫荧光结果表明，PREF1表达为阳性，表明分离的细胞确为脂肪前体细胞。在相同的诱导试剂组合条件下，使用10% FBS比2% FBS成脂诱导分化效果更好。在相同血清浓度的情况下，鸡尾酒法与油酸钠、罗格列酮共同联用的细胞分化效果较好。分化8 d的细胞中出现大量的脂滴，脂滴经油红O染色呈红色，经BODIPY染色呈绿色。且分化8 d的细胞中甘油三酯的含量显著升高（P细胞分化过程中表达逐渐上调。PREF1在细胞分化过程中表达逐渐下调。在三维培养情况下，使用10% FBS，鸡尾酒法与油酸钠、罗格列酮共同联用也能使脂肪前体细胞分化为成熟的脂肪细胞，分化8 d的细胞中脂滴经BODIPY和油红O染色后分别呈绿色和红色，且PPARγ、CEBPα、ACCα、LPL、SCD和FABP4在分化8 d的细胞中的表达量显著上调（P脂肪前体细胞的分离与培养体系，并筛选出适合二维和三维培养的成脂诱导分化方法，为进一步研究猪脂肪沉积的分子机制和改善肉品质奠定基础，也为细胞培育肉的制备提供技术指导。

关键词：北京黑猪脂肪前体细胞成脂诱导分化成熟脂肪细胞三维培养细胞培育肉

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纵隔髓脂肪瘤四例临床病理学分析

中华病理学杂志 2020年第6期49卷 613-615页

作者：饶洁袁静萍胡劲松武汉大学人民医院病理科 430060 湖北省孝感市云梦县人民医院病理科 432500

发生于纵隔的髓脂肪瘤罕见,该文收集4例患者资料并进行文献复习。肿瘤大体常有包膜,切面因脂肪组织与骨髓造血组织比例的不同而呈现灰黄色或暗红色;镜下可见成熟脂肪细胞与骨髓造血组织呈不同比例混合,造血细胞成巢状或片状分布,各阶段... 详细信息

发生于纵隔的髓脂肪瘤罕见,该文收集4例患者资料并进行文献复习。肿瘤大体常有包膜,切面因脂肪组织与骨髓造血组织比例的不同而呈现灰黄色或暗红色;镜下可见成熟脂肪细胞与骨髓造血组织呈不同比例混合,造血细胞成巢状或片状分布,各阶段三系细胞均可见。最终诊断为纵隔髓脂肪瘤,需与霍奇金淋巴瘤、Rosai-Dorfman病、朗格汉斯细胞组织细胞增生症、髓外造血等病相鉴别。

关键词：骨髓造血组织朗格汉斯细胞组织细胞增生症髓外造血霍奇金淋巴瘤成熟脂肪细胞髓脂肪瘤造血细胞脂肪组织

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脂肪分泌物对脂肪间充质干细胞的诱导研究

四川大学学报（医学版） 2012年第4期43卷 488-492页

作者：廖菊容李杰黄科李锋李昆郭维华于湄郭聪田卫东四川大学生命科学学院成都610064 四川大学口腔医学技术研究中心成都610041 四川大学口腔疾病研究国家重点实验室成都610041

目的研究脂肪分泌物对脂肪间充质干细胞(ADSCs)的诱导作用,探讨脂肪再生机制。方法利用组织块贴壁法和细胞流式技术分离、鉴定ADSCs,收集含有脂肪分泌物的培养基(CM)作为条件培养基并用来诱导ADSCs(CM诱导组),化学培养基诱导组作为阳性... 详细信息

目的研究脂肪分泌物对脂肪间充质干细胞(ADSCs)的诱导作用,探讨脂肪再生机制。方法利用组织块贴壁法和细胞流式技术分离、鉴定ADSCs,收集含有脂肪分泌物的培养基(CM)作为条件培养基并用来诱导ADSCs(CM诱导组),化学培养基诱导组作为阳性对照组,用普通培养基组作为空白对照组,通过细胞形态学观察脂滴的形成和Real-time PCR技术在基因水平上对其可靠性进行体外验证。用可溶性明胶海绵作为ADSCs的支架来研究脂肪分泌物在体内对ADSCs的诱导作用,并作HE切片观察。结果流式细胞术证实所培养的细胞为ADSCs。在体外实验中,CM诱导4d时,CM诱导组中的ADSCs胞浆内出现了明显的脂滴,Real-time PCR显示,与空白对照组比较,相关的成脂基因mRNA表达量也明显增加(P脂肪组织分泌物中可能含有能诱导ADSCs分化形成成熟脂肪细胞以及血管化的目标因子。

关键词：脂肪干细胞分泌蛋白明胶海绵成熟脂肪细胞

猪DFAT细胞成脂再分化过程中KLF2和PPARγ的表达

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畜牧兽医学报 2017年第1期48卷 68-74页

作者：高霞李方正郇延军刘志敏李秀姜忠玲牛德勋宋学雄青岛农业大学动物科技学院青岛266109

旨在探讨猪去分化脂肪细胞(DFAT)再分化过程中Krüppel样因子2(KLF2)和过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)的表达模式,为揭示猪DFAT细胞再分化机制奠定基础。采集猪成熟脂肪细胞,经"天花板"培养法获得DFAT细胞,用流式细胞仪检测表面... 详细信息

旨在探讨猪去分化脂肪细胞(DFAT)再分化过程中Krüppel样因子2(KLF2)和过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)的表达模式,为揭示猪DFAT细胞再分化机制奠定基础。采集猪成熟脂肪细胞,经"天花板"培养法获得DFAT细胞,用流式细胞仪检测表面抗原,形态学和油红O染色提取法检测成脂分化程度,Real-time PCR检测KLF2和PPARγmRNA的表达。结果表明,猪成熟脂肪细胞接种第3天,可见明显的去分化迹象,即细胞形成犄角状突起,大脂滴分解成小脂滴并向细胞外排出脂滴,接种至第9天脂滴基本排出完毕,接种至第12天原代细胞长满底壁;间充质干细胞表面抗原CD29、CD44和CD105的阳性表达率分别达到99.0%、97.8%和99.5%,而造血干细胞表面抗原CD45和CD34的表达仅为3.55%和4.55%;将F3代细胞成脂诱导3d,胞质中出现脂滴,并随诱导时间增加,脂滴数量增多,体积增大,诱导至12d诱导率达80%以上;成脂诱导2、5、10和15d时,KLF2mRNA的相对表达量分别为0.47±0.02、0.35±0.07、0.31±0.09和0.11±0.07,PPARγmRNA的相对表达量分别为1.62±0.01、2.03±0.04、3.22±0.04和3.49±0.06。本研究成功获得高纯度的DFAT细胞,具有间充质干细胞特性和成脂再分化能力;KLF2 mRNA的表达在成脂分化过程中随诱导时间的增加而减少,而PPARγmRNA的表达量随诱导时间的延长逐步增加;表明KLF2在DFAT细胞的成脂再分化过程中可能发挥抑制作用,而PPARγ可能会发挥促进作用。

关键词：猪成熟脂肪细胞去分化再分化 KLF2 PPARγ