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动物RNA病毒感染性cdna的研究进展

动物医学进展 2006年第8期27卷 28-32页

作者：曾江勇郭建宏刘在新中国农业科学院兰州兽医研究所

RNA病毒不仅对各国畜牧业的发展带来了严重的破坏,而且影响着畜产品进出口。感染性cdna的研究虽然起步晚,但发展迅速。文章探讨了构建感染性cdna的主要策略,并对正、负链RNA病毒感染性cD-NA的研究现状、国内外研究进展和应用情况,如基... 详细信息

RNA病毒不仅对各国畜牧业的发展带来了严重的破坏,而且影响着畜产品进出口。感染性cdna的研究虽然起步晚,但发展迅速。文章探讨了构建感染性cdna的主要策略,并对正、负链RNA病毒感染性cD-NA的研究现状、国内外研究进展和应用情况,如基因组功能、研制标记疫苗和基因工程疫苗等做了综述,认为在此病毒上构建感染性cdna有着广阔的前景,值得作进一步的探索,这对预防和控制RNA病毒引起的疾病将起重要的作用。

关键词： RNA病毒感染性cdna 基因组功能疫苗

细胞嗜性差异的2株柯萨奇病毒A10型的构建与拯救

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中国生物制品学杂志 2022年第12期35卷 1437-1442页

作者：裴捷杨祥汪梦俊刘睿伦周金戈吕诗韵王文辉郭靖孟胜利申硕武汉生物制品研究所有限责任公司病毒性疫苗研究一室国家联合疫苗工程技术研究中心湖北省疫苗技术创新中心湖北武汉430207

目的以Vero细胞及人横纹肌肉瘤(rhabdomyosarcoma,RD)细胞嗜性差异的柯萨奇病毒A10型(Coxsackievirus A10,CV-A10)2个毒株为模板,分别构建感染性克隆,并完成病毒拯救,为CV-A10毒株的细胞嗜性研究奠定基础。方法分别扩增Vero^(+)/RD+及Ve... 详细信息

目的以Vero细胞及人横纹肌肉瘤(rhabdomyosarcoma,RD)细胞嗜性差异的柯萨奇病毒A10型(Coxsackievirus A10,CV-A10)2个毒株为模板,分别构建感染性克隆,并完成病毒拯救,为CV-A10毒株的细胞嗜性研究奠定基础。方法分别扩增Vero^(+)/RD+及Vero^(-)/RD+细胞嗜性差异的CV-A10毒株基因组,在5′端引入T7启动子序列,3′端引入polyA尾及NotⅠ酶切位点。将扩增得到的基因组序列与线性化pBR322载体以无缝连接技术连接得到全长质粒,经线性化后分别与T7-RNA聚合酶表达质粒共转染RD细胞完成病毒拯救。通过病毒感染后细胞形态观察及间接免疫荧光试验,比较拯救毒株对Vero细胞嗜性的差异。结果成功构建了Vero细胞嗜性差异的CV-A10毒株2种感染性克隆,并在RD细胞内完成病毒拯救,序列测定结果表明拯救毒株与亲本毒株序列一致。拯救毒株rCV-A10-010195能够有效感染Vero细胞并形成典型的细胞病变(cytopathic effect,CPE),而rCV-A10-3482无法有效感染Vero细胞。结论建立了2株Vero细胞嗜性差异的CV-A10毒株反向遗传操作系统,为CV-A10毒株细胞嗜性的研究奠定了基础。

关键词： Vero细胞柯萨奇病毒A10型感染性cdna 病毒拯救细胞嗜性

猪繁殖与呼吸综合征病毒HuN4-F112弱毒株NSP2区表达猪瘟病毒E2基因表位的研究

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病毒学报 2013年第1期29卷 17-25页

作者：徐彦召周艳君童武李玲姜一峰童光志中国农业科学院上海兽医研究所上海200241 河南科技学院动物科学学院新乡453003

建立共表达猪瘟病毒(Classic swine fever virus,CSFV)E2蛋白主要中和性抗原表位基因的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)反向遗传操作平台,为进一步研究PRRSV作为病毒载体提供实验数据。本研究在PRRSVHuN4-F112疫苗株感染性分子克隆的基础... 详细信息

建立共表达猪瘟病毒(Classic swine fever virus,CSFV)E2蛋白主要中和性抗原表位基因的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)反向遗传操作平台,为进一步研究PRRSV作为病毒载体提供实验数据。本研究在PRRSVHuN4-F112疫苗株感染性分子克隆的基础上,采用突变PCR技术将CSFV E2蛋白的主要中和性抗原表位基因插入HuN4-F112弱毒株PRRSV已鉴定出的两个NSP2蛋白的复制非必需区,经基因片段的克隆、拼接,构建了两株含有CSFV E2蛋白的主要中和性抗原表位基因的感染性PRRSV cdna克隆psk-HuN4-F112-Δ508-532+E2和psk-HuN4-F112-Δ480-532+E2。用限制性内切酶SwaΙ分别将两株共表达的感染性克隆线性化,之后通过细胞外转录获得病毒RNA,用脂质体法分别将病毒RNA转染BHK-21细胞包装出病毒粒子,再分别将其转接到MARC-145细胞传代拯救出两株病毒。分别对两株拯救病毒进行RT-PCR扩增、酶切和序列分析鉴定。结果表明,两株拯救病毒含有不同于亲本病毒的分子标记(拯救病毒基因组的14 667位因同义突变产生的MluⅠ酶切位点)和插入基因序列。间接免疫荧光试验表明,CSFV E2蛋白主要中和性抗原表位基因均能在两株拯救的PRRSV中表达,且能够在其传代过程中稳定遗传。病毒生长特性结果比较显示两株拯救病毒与亲本病毒在MARC-145细胞上具有相似的增殖特性。本研究构建了两株共表达CSFV E2蛋白主要中和性抗原表位基因的PRRSV感染性克隆并获得了拯救病毒,且外源基因能在拯救病毒中稳定表达,为进一步开发新型PRRSV二联疫苗提供了有效的反向遗传操作平台。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒感染性cdna 拯救病毒病毒载体

表达外源基因的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染性克隆的构建及病毒拯救

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农业生物技术学报 2012年第5期20卷 473-480页

作者：徐彦召周艳君童武李玲姜一峰童光志中国农业科学院上海兽医研究所

为建立表达标记基因的重组猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)反向遗传操作平台,本研究在PRRSV HuN4-F112疫苗株感染性分子克隆的基础上,采用突变PCR技术将新城疫病毒(NDV)NP蛋白末端优势抗原区插入PRRSV NSP2蛋白的复制非必须区,经基因片... 详细信息

为建立表达标记基因的重组猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)反向遗传操作平台,本研究在PRRSV HuN4-F112疫苗株感染性分子克隆的基础上,采用突变PCR技术将新城疫病毒(NDV)NP蛋白末端优势抗原区插入PRRSV NSP2蛋白的复制非必须区,经基因片段的克隆、拼接,构建了含有外源标记基因的感染性的PRRSV cdna克隆psk-HuN4-F112-Δ52+NP49。用限制性内切酶SwaΙ将psk-HuN4-F112-Δ52+NP49线性化后通过细胞外转录获得病毒RNA,用脂质体法将病毒RNA转染叙利亚仓鼠肾细胞(BHK-21)包装出病毒粒子,再转接到猴胚胎肾上皮细胞(MACR-145)传代拯救病毒。对拯救的病毒进行RT-PCR扩增、酶切和序列分析鉴定。结果表明,拯救病毒含有不同于亲本病毒的分子标记(病毒基因组14667位人工产生的MluⅠ酶切位点)和插入的标记基因序列。间接免疫荧光试验表明,外源基因NP49在拯救的PRRSV中表达,且能够在PRRSV传代过程中稳定遗传。病毒生长特性比较显示,拯救病毒与亲本病毒在MARC-145细胞上具有相似的增殖特性。本研究构建了含有标记基因PRRSV的感染性克隆并获得了拯救病毒,为进一步开发新型PRRS疫苗提供了有效的反向遗传操作平台。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV) 感染性cdna 标记基因拯救病毒