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咯菌睛对指状青霉菌和意大利青霉菌的抑制作用研究

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咯菌睛对指状青霉菌和意大利青霉菌的抑制作用研究

作者：苏欣华中农业大学

学位级别：硕士

指状青霉菌(Penicillium digitatum)引起的柑橘绿霉病和意大利青霉菌(Penicillium italicum)引起的柑橘青霉病是柑橘采后最为严重的两种病害。在我国,登记用于防治柑橘绿霉病和青霉病的14α-脱甲基酶抑制剂(DMI)类杀菌剂咪鲜胺和抑霉唑... 详细信息

指状青霉菌(Penicillium digitatum)引起的柑橘绿霉病和意大利青霉菌(Penicillium italicum)引起的柑橘青霉病是柑橘采后最为严重的两种病害。在我国,登记用于防治柑橘绿霉病和青霉病的14α-脱甲基酶抑制剂(DMI)类杀菌剂咪鲜胺和抑霉唑的抗药性越来越严重,因此研究不同作用机制的杀菌剂对指状青霉菌和意大利青霉菌的生物活性对柑橘采后病害的可持续治理具有重要的意义。本课题组前期试验发现苯基吡咯类杀菌剂咯菌腈对指状青霉菌有较好的生物活性。基于此,本文研究了咯菌腈对指状青霉菌和意大利青霉菌的抑制作用,评估了指状青霉菌和意大利青霉菌对咯菌腈的抗药性风险,初步探究其抗药性机制,主要结果如下:1.2020-2021年从五个地区柑橘园采集分离到81株指状青霉菌和89株意大利青霉菌,测定咯菌腈对病原菌菌丝生长抑制的有效中浓度(EC50),建立了指状青霉菌和意大利青霉菌对咯菌腈的敏感性基线。咯菌腈对81株指状青霉菌EC50值的范围为0.0052-0.0336μg/m L,EC50平均值为0.0127μg/m L±0.0066(SD);对89株意大利青霉菌的EC50值的范围为0.0075-0.0486μg/m L,EC50平均值为0.0216μg/m L±0.0084(SD)。2.200μg/m L咯菌腈对柑橘绿霉病和青霉病的保护作用防效分别为46.3%和54.1%,显著低于同等浓度下咪鲜胺对柑橘绿霉病和青霉病的防效。200μg/m L咯菌腈对咪鲜胺指状青霉菌和意大利青霉菌抗性菌株室内防效分为26.5%和51.5%,均高于咪鲜胺的防治效果,表明咯菌腈可用于防治咪鲜胺抗性菌株。3.室内药剂和紫外结合连续诱导三或四代获得了指状青霉菌和意大利青霉菌的抗性突变体,抗性倍数RF>9000。意大利青霉菌突变体的抗性能稳定遗传,但突变体的菌丝生长量、产孢量及致病力显著下降。指状青霉菌抗性突变体的产孢量、致病力同样显著下降。指状青霉菌和意大利青霉菌对咯菌腈和唑类杀菌剂咪鲜胺没有交互抗性(指状青霉菌R=0.222,P=0.159),和二甲酰亚胺类杀菌剂菌核净具有交互抗性(指状青霉菌R=0.993,P青霉菌和意大利青霉菌的抗性突变体对NaCl、葡萄糖和山梨醇耐受力显著低于亲本菌株。无药剂处理时,抗性突变体的细胞内甘油含量显著高于敏感菌株。4.对指状青霉菌双组份信号系统上四个关键激酶基因双组分组氨酸蛋白激酶基因PdHK、促分裂原活化蛋白激酶基因PdHog1、促分裂原活化蛋白激酶激酶基因PdPbs2和促分裂原活化蛋白激酶激酶激酶基因PdSsk2进行PCR扩增比对,与敏感菌株相比,8株指状青霉菌抗性突变体的PdHK基因发生了点突变,其中7株氨基酸突变位点(N501I、T508I、N546I、N546H和L691P)均位于HAMP(Histidine kinases Adenylyl cyclases Methyl-accepting chemotaxis proteins and Phosphatases)结构域,1株氨基酸突变位点(S955L)位于HATPase(Histidine kinase-like ATPase catalytic domain)结构域上。1株抗性突变体PdHog1基因发生了一处核苷酸点突变,为同义突变。8株咯菌腈抗性突变体的PdPbs2基因和PdSsk2基因均为未发生突变。因此推测指状青霉菌对咯菌腈的高水平抗性可能与双组份组氨酸蛋白激酶的氨基酸突变有关。5.利用qRT-PCR测定了咯菌腈处理前后3株指状青霉菌抗性突变体及其亲本敏感菌株四个关键激酶基因PdHK、PdHog1、PdPbs2和PdSsk2的相对表达量。与敏感菌株相比,抗性突变体20HB-WH-Pd19-BR上述四个基因表达量均升高,而其余两株突变体的表达量无显著变化。这些基因表达和突变实验结果表明不同突变体的抗性机理有所不同。

关键词：指状青霉菌意大利青霉菌咯菌腈抗性风险评估抗性机制

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反式肉桂醛对意大利青霉菌的抑制机理研究

反式肉桂醛对意大利青霉菌的抑制机理研究

作者：黄飞江南大学

学位级别：硕士

植物源精油是一种新型抑菌剂,但是它的抑菌机理研究尚且停留在表层。本文研究了肉桂精油的主要成分反式肉桂醛的抑真菌机理。结果发现反式肉桂醛的抑真菌机理是通过破坏细胞膜进而抑制菌丝体生长,同时它还能破坏线粒体的功能,引发线粒... 详细信息

植物源精油是一种新型抑菌剂,但是它的抑菌机理研究尚且停留在表层。本文研究了肉桂精油的主要成分反式肉桂醛的抑真菌机理。结果发现反式肉桂醛的抑真菌机理是通过破坏细胞膜进而抑制菌丝体生长,同时它还能破坏线粒体的功能,引发线粒体介导的细胞凋亡。另外,作为全新的高灵敏度指纹性分析手段,拉曼光谱技术被运用到了精油的抑真菌机理分析上。抑菌机理的研究有助于更好的开发出高效的天然抑菌剂。具体研究结果如下:首先,反式肉桂醛通过膜损伤机制发挥抑制菌丝体生长的功效。反式肉桂醛可以改变细胞膜的通透性导致细胞内容物质的泄漏,比如核酸、蛋白质、钾离子等物质。细胞可以被碘化丙啶染成红色,表明细胞膜的整体性下降,最低由100.0±1%降至12.1±3%。同时,扫描电镜结果显示处理后的菌丝表面出现凹凸不平的褶皱,细胞的形态学特征发生改变。然后,反式肉桂醛破坏了线粒体的正常功能并引发线粒体介导的细胞凋亡。通过改变三羧酸循环的相关酶活使三羧酸循环失调,具体表现为柠檬酸的含量先上升后下降,琥珀酸脱氢酶的活力下降,由107.8±2.2 U最低降至52.7±5.3 U,苹果酸脱氢酶的活力上升,由4.8±0.5 U最高上升至15.2±0.9 U。线粒体内部呼吸链的电子大量泄漏,细胞内部活性氧水平急剧升高,氧化还原水平失调。反式肉桂醛通过破坏线粒体膜整体性,引发线粒体膜电位的崩塌,导致细胞色素c泄漏,从而引发了凋亡蛋白酶的活化,具体表征为Caspase-3的活力由3.6±0.6 U上升至8.8±1.1 U,而后凋亡反应级联放大,细胞凋亡。最后,将灵敏度高、能提供指纹信息的拉曼光谱技术引入到精油抑真菌机理研究过程中。拉曼光谱和表面增强拉曼光谱方法在检测精油抑菌过程中细胞内部、外部的变化时,能发挥良好的诊断作用。利用表面增强拉曼光谱快速检测出细胞蛋白质、核酸和脂质的泄漏。具体表现为,胞外上清液中蛋白质的特征峰1244 cm峰强上升;核酸的特征峰734 cm、1330 cm、1338 cm皆同时上升;另外,代表脂质的特征峰1466 cm的强度也上升。用共聚焦显微拉曼光谱仪检测线粒体中细胞色素c时,发现其特征峰强度指标I/I下降,表示线粒体内细胞色素c的量减少。另外,拉曼峰强可以与OD值、蛋白质泄漏量和细胞色素c泄漏量等经典分析方法之间建立强相关性,相关性系数都在0.9以上。以上研究结果表明,反式肉桂醛通过破坏细胞膜发挥抑制意大利青霉菌菌丝生长的作用;通过激活线粒体介导的细胞凋亡途径发挥抑菌功效;拉曼光谱和表面增强拉曼光谱技术可以很好的表征精油抑真菌过程中的物质变化。

关键词：植物源精油反式肉桂醛意大利青霉菌拉曼光谱

咪鲜胺对意大利青霉菌的抑制作用及其抗性机制的研究

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咪鲜胺对意大利青霉菌的抑制作用及其抗性机制的研究

作者：张保华中农业大学

学位级别：硕士

意大利青霉菌(Penicillium italicum Wehmer)引起的柑橘青霉病是导致柑橘采后腐烂的一种重要病害。目前对柑橘青霉病的防治仍然以化学杀菌剂为主,甾醇14α-脱甲基化酶抑制剂(DMI)类杀菌剂咪鲜胺是我国防治柑橘青霉病最常用的杀菌剂,但... 详细信息

意大利青霉菌(Penicillium italicum Wehmer)引起的柑橘青霉病是导致柑橘采后腐烂的一种重要病害。目前对柑橘青霉病的防治仍然以化学杀菌剂为主,甾醇14α-脱甲基化酶抑制剂(DMI)类杀菌剂咪鲜胺是我国防治柑橘青霉病最常用的杀菌剂,但是随着DMI类杀菌剂的广泛使用,意大利青霉菌对该类杀菌剂的抗药性问题日益严峻,因此开展对意大利青霉菌抗药性机制的研究变得尤为重要。本论文研究了咪鲜胺对意大利青霉菌生长、物质合成、抗氧化酶活性的影响和意大利青霉菌对咪鲜胺的抗性分子机制,主要研究结果如下:1.从全国5个地区的发病样品中分离纯化出164株意大利青霉菌菌株。测定咪鲜胺对意大利青霉菌菌丝在PDA培养基上生长抑制的有效中浓度(EC),建立了咪鲜胺对意大利青霉菌的相对敏感性基线,根据EC值的频率分布,把EC意大利青霉菌作为相对敏感菌株,其平均EC值为0.0085±0.0042μg/mL(SD),EC>0.1μg/mL的16株意大利青霉菌被认为是敏感性下降的菌株,其EC值范围是0.2931-11.82μg/mL,抗性频率为9.76%。2.意大利青霉菌对咪鲜胺的敏感性和对丙环唑、氟硅唑的敏感性均成正相关(R=0.965,P青霉病的保护作用防效分别为48.3%和78.6%。PDA中0.003、0.006和0.012μg/mL的咪鲜胺显著降低了意大利青霉菌的产孢量(P意大利青霉菌孢子的萌发率和芽管伸长。低浓度下的咪鲜胺对孢子萌发率没有明显影响,只是延长了孢子萌发所需要的时间。咪鲜胺提高了菌丝体细胞膜的通透性。咪鲜胺处理后的菌丝中丙二醛、超氧根阴离子O的含量与对照相比均有显著上升,而过氧化氢的含量较对照相比则没有较为明显的变化。咪鲜胺处理的菌丝中超氧化物歧化酶活性持续上升,过氧化物酶活性与对照组相比差异不显著。4.与S型菌株相比,HR型菌株PiCYP51A氨基酸有7处突变(V14I,V35I,D93E,F170L,A181T,Y332H,F501L),LR型菌株PiCYP51A氨基酸有4处突变(V14I,V35I,D93E,Y332H),LR型和HR型菌株PiCYP51B氨基酸有4处突变(V49A,S77N,V192A,V476I)。氨基酸同源性分析表明,F501L突变和指状青霉菌CYP51B中F506I突变属于同源突变,推测意大利青霉菌对咪鲜胺的高抗性可能和F170L、A181T和F501L氨基酸的突变有关。LR型和HR型菌株PiCYP51A基因上游启动子区只有a127g突变,而PiCYP51B基因上游启动子区存在较多的碱基突变和片段缺失,其中两个较大的缺失片段分别为183 bp和81 bp。5.结合PiCYP51A/B、PiABC1/2基因的表达量和菌株的抗性水平分析,推测意大利青霉菌的低水平抗性可能与PiCYP51A基因的表达升高有关,而高水平的抗性可能与PiCYP51B基因的表达升高有关。PiABC1/2基因的表达升高可能与意大利青霉菌对咪鲜胺的抗性无关,尽管咪鲜胺处理诱导了PiABC1/2基因的表达升高。

关键词：意大利青霉菌咪鲜胺敏感性基线抗性分子机制相对表达量

桂枝主要抑菌活性成分对柑橘青霉病菌的作用机制研究

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现代食品科技 2016年第10期32卷 45-51,65页

作者：陈玉环万春鹏彭旋陈金印江西省果蔬保鲜与无损检测重点实验室江西农业大学农学院江西南昌330045

以意大利青霉菌(Penicillium italicum)为供试菌,研究桂枝主要抑菌活性成分肉桂醛、肉桂酸的抑菌机制。通过测定肉桂醛、肉桂酸对供试菌的孢子萌发、菌丝生长形态、细胞膜通透性、可溶性糖和蛋白质含量以及代谢关键酶活性的影响,以阐明... 详细信息

以意大利青霉菌(Penicillium italicum)为供试菌,研究桂枝主要抑菌活性成分肉桂醛、肉桂酸的抑菌机制。通过测定肉桂醛、肉桂酸对供试菌的孢子萌发、菌丝生长形态、细胞膜通透性、可溶性糖和蛋白质含量以及代谢关键酶活性的影响,以阐明二者的作用机理。研究发现,肉桂醛溶液对供试菌的最小抑菌浓度(MIC)、最小杀菌浓度(MFC)分别为0.025 mg/m L和0.1 mg/m L,肉桂酸溶液分别为0.1 mg/m L和0.4 mg/m L;与对照组相比,经处理的菌体,其孢子萌发率降低,菌丝扭曲膨大或断裂,细胞膜渗透率增强,菌体内可溶性糖及蛋白质含量减少,琥珀酸脱氢酶(Succinate dehydrogenase,SDH)和苹果酸脱氢酶(Malate dehydrogenase,MDH)活性降低。试验结果表明,肉桂醛和肉桂酸能有效抑制意大利青霉菌的孢子萌发,阻碍菌体生长,破坏细胞膜致使通透性增加,内含物外渗,且能有效破坏三羧酸循环(Tricarboxylic acid cycle,TCA)过程,菌体能量代谢途径受阻,从而抑制其正常的生长发育。

关键词：意大利青霉菌肉桂醛肉桂酸抑菌机制

辣木叶黄酮对采后金桔青霉病的防治及机理研究

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核农学报 2020年第5期34卷 1028-1037页

作者：陈小丰任慧许凤王靖孙朦王鸿飞宁波大学食品与药学学院浙江宁波315211

为考察辣木叶黄酮对采后金桔青霉病的防治效果,以意大利青霉菌为试验菌种,采用体外平板接菌试验和体内损伤接种试验研究辣木叶黄酮对金桔果实采后青霉病的抑制效果及其抑制机理。结果表明,辣木叶黄酮对意大利青霉菌具有良好的抑菌活性,... 详细信息

为考察辣木叶黄酮对采后金桔青霉病的防治效果,以意大利青霉菌为试验菌种,采用体外平板接菌试验和体内损伤接种试验研究辣木叶黄酮对金桔果实采后青霉病的抑制效果及其抑制机理。结果表明,辣木叶黄酮对意大利青霉菌具有良好的抑菌活性,其最小抑菌浓度(MIC)及最小杀菌浓度(MFC)分别为4.00和8.00 mg·mL-1。扫描电镜(SEM)和透射电镜(TEM)结果表明,辣木叶黄酮会引起意大利青霉菌菌丝体的扭曲,明显改变青霉菌菌丝的形态,而胞内超微结构显示辣木叶黄酮会破坏其膜结构和细胞器,导致胞内内容物外流,胞内空洞化,进而引起菌体死亡;损伤接种结果表明,辣木叶黄酮处理可显著降低金桔的病斑直径并保持金桔硬度(P<0.05),同时提高苯丙氨酸解氨酶(PAL)和几丁质酶相关防御酶的活性,使果胶酶保持较低的活性,增强果实的抗病性。本研究结果对辣木叶黄酮在柑橘类水果采后贮藏保鲜的应用具有重要意义。

关键词：金桔辣木叶黄酮意大利青霉菌抑菌活性贮藏保鲜

桂枝主要活性物质对新余蜜橘青霉病抗性和防御体系的诱导

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植物保护学报 2016年第3期43卷 467-474页

作者：陈玉环彭旋陈楚英万春鹏陈金印江西农业大学农学院江西省果蔬保鲜与无损检测重点实验室江西省果蔬采后处理关键技术与质量安全协同创新中心南昌330045

为探讨桂枝主要活性物质肉桂醛和肉桂酸对新余蜜橘青霉病的抗性及其机理,以500倍和1 000倍咪鲜胺稀释液为阳性对照,蜜橘损伤接种后,测定了防护效果最佳时肉桂醛、肉桂酸的抑菌浓度,分析了对果实活体防效和防御酶活性的影响。结果表明,25... 详细信息

为探讨桂枝主要活性物质肉桂醛和肉桂酸对新余蜜橘青霉病的抗性及其机理,以500倍和1 000倍咪鲜胺稀释液为阳性对照,蜜橘损伤接种后,测定了防护效果最佳时肉桂醛、肉桂酸的抑菌浓度,分析了对果实活体防效和防御酶活性的影响。结果表明,25、8 mg/m L肉桂醛以及30、15mg/m L肉桂酸是最佳抑菌浓度;与对照组相比,各浓度药液处理均能显著降低病原菌的致病力,贮藏第6天,25、8 mg/m L肉桂醛处理组的病情指数分别为54.4%和66.4%,30、15 mg/m L肉桂酸处理组分别为49.6%和63.2%;各浓度药液处理均能降低新余蜜橘的MDA和H_2O_2含量,显著提高并维持SOD、PPO等防御酶的活性,以25 mg/m L肉桂醛和30 mg/m L肉桂酸处理效果最佳。研究表明,肉桂醛和肉桂酸能有效增强果实活体防护效果以及诱导果实的抗病性,且抗性的产生可能与果实内相关防御酶活性提高有关。

关键词：肉桂醛肉桂酸意大利青霉菌新余蜜橘抗性诱导

柑橘青霉菌CYP51B基因和上游调控区克隆及生物信息学分析

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微生物学通报 2016年第1期43卷 76-87页

作者：牛玉慧刘婧齐婷伍志秦婷婷李青钟靖然张恒王崇武袁永泽刘德立华中师范大学生命科学学院湖北省遗传与调控重点实验室湖北武汉430079

【目的】克隆柑橘青霉菌(意大利青霉菌,Penicillium italicum)CYP51的同源基因,并对基因序列进行生物信息学分析。【方法】通过PCR及染色体步移技术得到基因的完整序列及上下游调控序列。通过生物信息学手段对基因的结构进行分析:使用N... 详细信息

【目的】克隆柑橘青霉菌(意大利青霉菌,Penicillium italicum)CYP51的同源基因,并对基因序列进行生物信息学分析。【方法】通过PCR及染色体步移技术得到基因的完整序列及上下游调控序列。通过生物信息学手段对基因的结构进行分析:使用NNPP分析软件预测转录起始位点,并利用TFSEARCH1.3软件分析转录因子结合位点。利用SWISS-MODEL在线软件对蛋白进行同源模建。【结果】克隆得到了意大利青霉菌CYP51的同源基因,命名为Pi CYP51B。获得的Pi CYP51B及上下游调控区序列总长为3 496 bp,包括上游910 bp和下游834 bp的序列。Pi CYP51B基因的开放阅读框全长1 575 bp,编码524个氨基酸。该基因含有3个分别为74、51、52 bp的内含子,分别位于247 bp与320 bp之间,519 bp与569 bp之间,1 635 bp与1 686 bp之间。Pi CYP51B 5′上游调控区序列的总长为579 bp。生物信息学分析结果显示:转录起始位点位于上游458 bp处;上游调控区不仅包含启动子的核心结构序列TATA盒(位于-25 bp处),也包含多个转录因子结合位点,如Abd-B、ADR1、AP-4、GATA-1、Cdx A、Clox和Oct-1等。在上游调控序列中嘌呤含量高,而且从+387 bp处开始存在4个连续高嘌呤含量的热激转录因子特异性结合位点(HSF);在+106 bp处开始存在3个连续的Cdx A转录因子结合位点。选用人CYP51晶体结构(PDB ID:3LD6)为模板,利用SWISS-MODEL在线软件构建了意大利青霉菌CYP51B蛋白的结构模型。【结论】克隆了意大利青霉Pi CYP51B基因,其上游含有多个热激应答转录因子特异性结合位点(HSF)表明其参与逆境应答。该基因作为意大利青霉菌CYP51的同源基因,可能与青霉菌对真菌药物的抗药性密切相关。

关键词：意大利青霉菌 Pi CYP51B 5′上游调控序列同源模建

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水黄连抑菌物质提取工艺及其抑菌效果的研究

热带作物学报 2017年第10期38卷 1932-1939页

作者：陈楚英万春鹏付永琦甘武彭旋陈金印江西省果蔬采后处理关键技术与质量安全协同创新中心江西南昌330045 江西省果蔬保鲜与无损检测重点实验室江西农业大学江西南昌330045

以水黄连提取物对意大利青霉菌的抑菌圈直径为考察指标,在单因素试验基础上,采用4因素3水平的响应面优化水黄连中抑菌物质的提取条件,并将最优工艺所得提取物用于柑橘活体抑菌试验。结果表明:影响水黄连抑菌效果的主次因素为:提取时间>... 详细信息

以水黄连提取物对意大利青霉菌的抑菌圈直径为考察指标,在单因素试验基础上,采用4因素3水平的响应面优化水黄连中抑菌物质的提取条件,并将最优工艺所得提取物用于柑橘活体抑菌试验。结果表明:影响水黄连抑菌效果的主次因素为:提取时间>乙醇体积分数>液料比>温度。超声波辅助提取的最佳工艺条件为:乙醇体积分数65%,时间82 min,液料比23 mL/g,温度75℃,获得的抑菌圈直径为(52.33±0.41)mm,与理论最优值52.20 mm接近;水黄连提取物对由意大利青霉菌引发的柑橘青霉病有显著的防治作用,EC_(50)为59.53 mg/mL。

关键词：水黄连超声波提取响应面法意大利青霉菌抑菌效果

5,7-二羟基类黄酮抗柑橘青霉病的构效关系和作用机理研究

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5,7-二羟基类黄酮抗柑橘青霉病的构效关系和作用机理研究

作者：周洁华中农业大学

学位级别：硕士

黄酮化合物具有多种生理活性和潜在的药用价值,其活性与结构有着很大的联系,研究表明,黄酮化合物C-OH和C-OH是药物发挥抗菌作用的重要基团。本文以引起采后柑橘青霉病的主要病原菌意大利青霉为指示菌,选取23种C-和C-含羟基结构的黄酮化... 详细信息

黄酮化合物具有多种生理活性和潜在的药用价值,其活性与结构有着很大的联系,研究表明,黄酮化合物C-OH和C-OH是药物发挥抗菌作用的重要基团。本文以引起采后柑橘青霉病的主要病原菌意大利青霉为指示菌,选取23种C-和C-含羟基结构的黄酮化合物来探讨其抑菌构效关系。以抗菌活性最强的5,7二羟基黄酮类化合物松属素为代表来研究松属素处理后对意大利青霉呼吸作用和细胞程序性死亡的影响,筛选松属素抑制意大利青霉的生物作用靶点,并探讨其抑菌诱导细胞程序性死亡的作用机制。主要研究结果如下:1.以抑制意大利青霉孢子萌发和菌体呼吸作用为指标,研究23种5,7-二羟基黄酮类化合物抑制意大利青霉的构效关系,结果表明:5,7-二羟基黄酮抑制孢子萌发作用位点与药物抑制菌体呼吸作用位点不是完全一致的;5位和7位羟基是这类黄酮抑菌主导位点,C3-OH可增强其抑菌性而C4’位置酚羟基甲氧化会降低呼吸抑制活性;C-7位羟基被糖苷键取代,抑菌效果减弱。2.松属素对意大利青霉菌丝体的呼吸表现出强烈的抑制作用,并且具有显著的浓度效应、时间效应,且幼龄菌丝的呼吸作用对松属素处理较老龄菌丝更敏感。进一步深入研究发现,松属素对意大利青霉的线粒体呼吸同样表现出显著的抑制作用;通过呼吸抑制剂实验表明松属素抑制意大利青霉的其作用部位可能在线粒体呼吸电子传递链上NADH向辅酶Q的传递过程。松属素破坏了菌体线粒体细胞结构和功能。经松属素处理后的菌丝三态呼吸(ST3),呼吸控制率(RCR),氧化磷酸化效率(OPR)的下降,呼吸相关酶琥珀酸脱氢酶和苹果酸脱氢酶活性显著下降,线粒体呼吸电子传递链酶复合物I,IV和V的活性降低。因此,松属素通过破坏意大利青霉线粒体呼吸电子传递链复合物活性及呼吸相关酶活性,抑制呼吸作用,导致菌体能量代谢紊乱。3.松属素能诱导意大利青霉出现早期和晚期凋亡特征,诱导发生S期阻滞,引起ROS累积,线粒体PTP开放度增大,MMP下降,胞质钙离子释放,Cyt C从线粒体释放到细胞质,PS外翻,线粒体肿胀和结构破坏等细胞凋亡或程序性坏死的症状。

关键词： 5,7-二羟基黄酮意大利青霉菌抑菌活性构效关系作用机理