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恶臭假单胞杆菌转谷氨酰胺酶基因的克隆及原核表达载体的构建

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中国预防兽医学报 2005年第1期27卷 21-24页

作者：郝学忠薛飞朱远茂马莺李景鹏东北农业大学生命科学与生命技术研究中心基因部黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所黑龙江哈尔滨150001 哈尔滨工业大学食品学院黑龙江哈尔滨150030

通过PCR方法扩增恶臭假单胞杆菌 (Pseudomonasputida )H76的转谷氨酰胺酶 (transglutaminase ,TGase)基因 ,然后将扩增的约 80 0bp的基因片段克隆到pET_2 8a(+)表达载体上 ,构建重组TGase的表达载体。酶切鉴定阳性的重组质粒命名为pET_T... 详细信息

通过PCR方法扩增恶臭假单胞杆菌 (Pseudomonasputida )H76的转谷氨酰胺酶 (transglutaminase ,TGase)基因 ,然后将扩增的约 80 0bp的基因片段克隆到pET_2 8a(+)表达载体上 ,构建重组TGase的表达载体。酶切鉴定阳性的重组质粒命名为pET_TGase。核苷酸及推导的氨基酸序列分析表明 ,该基因与恶臭假单胞杆菌KT2 4 4 0的相应基因有很高的同源性。

关键词：转谷氨酰胺酶恶臭假单胞杆菌基因克隆表达载体构建

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微波诱变结合底物类似物选育恶臭假单胞杆菌

工业微生物 2006年第1期36卷 51-53页

作者：陈希莫章桦周国英刘友全中南林学院资环学院湖南长沙410004

利用微波辐照恶臭假单胞菌进行诱变处理,结合底物类似物的筛选方法,结果选育到一株产海因酶和N-甲酰基水解酶的高酶活菌株MW303;高效液相色谱(HPLC)分析结果显示:该菌的总酶活由0.218升高至0.612,提高了280.73%。

关键词：微波底物类似物恶臭假单胞杆菌 HPLC分析

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产海藻糖合酶菌株发酵培养基的研究

食品与发酵工业 2002年第7期28卷 34-36页

作者：薛璐马莺哈尔滨工业大学生命科学与工程系哈尔滨150001 东北农业大学食品学院哈尔滨150030

在已筛选出产海藻糖合酶菌株———恶臭假单胞杆菌的基础上 ,研究了该菌株最佳发酵培养基。恶臭假单胞杆菌H76的最适碳源为麦芽糖和葡萄糖 ,最适氮源为蛋白胨和酵母粉 ,无机盐为MgSO4 ·7H2 O ;该菌株产酶最佳培养基配方为 :麦芽糖 3 % ... 详细信息

在已筛选出产海藻糖合酶菌株———恶臭假单胞杆菌的基础上 ,研究了该菌株最佳发酵培养基。恶臭假单胞杆菌H76的最适碳源为麦芽糖和葡萄糖 ,最适氮源为蛋白胨和酵母粉 ,无机盐为MgSO4 ·7H2 O ;该菌株产酶最佳培养基配方为 :麦芽糖 3 % ,葡萄糖 3 % ,Mg SO4 7H2 O 0 2 % ,蛋白胨 2 % ,酵母粉 0 7%。

关键词：产海藻糖合酶菌株发酵培养基恶臭假单胞杆菌

Pseudomonas putida S1海藻糖合成酶基因在大肠杆菌中的表达及其条件研究

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Pseudomonas putida S1海藻糖合成酶基因在大肠杆菌中的表达及其...

作者：姚林江南大学

学位级别：硕士

海藻糖是一种非还原性二糖,它广泛存在于自然界中,具有独特的理化性质和生物学功能,使其在食品工业、化妆品工业、医药工业、农业、分子生物学等领域有广泛的应用前景。海藻糖合成酶能够通过分子内的转糖苷作用转化麦芽糖生成海藻糖,是... 详细信息

海藻糖是一种非还原性二糖,它广泛存在于自然界中,具有独特的理化性质和生物学功能,使其在食品工业、化妆品工业、医药工业、农业、分子生物学等领域有广泛的应用前景。海藻糖合成酶能够通过分子内的转糖苷作用转化麦芽糖生成海藻糖,是海藻糖合成最重要的途径之一。利用PCR技术从恶臭假单胞杆菌S1中成功扩增出海藻糖酶基因(treS)基因。通过TA克隆,将扩增片段与pMD19-T载体连接,转化E. coli JM109,蓝白斑筛选阳性菌落,得到重组质粒pMD-TS2。质粒经酶切鉴定、测序后,用BamHI、HindⅢ同时双酶切重组质粒pMD-TS2和表达载体pQE30T,在T4DNA连接酶作用下,构建重组质粒pQE-TS2。酶切鉴定后,将重组质粒pQE-TS2转化E. coli M15并进行了IPTG诱导表达。表达产物经SDS-PAGE分析,酶蛋白的分子量大小为77KD,但主要以包含体的形式存在于宿主细胞中。通过在摇瓶条件下的优化,得到最佳培养和诱导条件为:37℃菌体生长至OD600≈0.6时,加入诱导剂IPTG至终浓度0.01mmol/L,20℃诱导20h,目的蛋白的表达量达可占可溶性总蛋白18.6%,发酵液酶活达到1.9U /mL,为原始菌株的50倍。通过单因素优化实验,得到经济适用、易于扩大培养重组菌的培养基配方:葡萄糖10 g/L,硫酸铵3 g/L,蛋白胨1.5g/L,柠檬酸1.5g/L,磷酸二氢钾12.5 g/L,MgSO4·7H2O 1 g/L,TES 5 mL/L,pH为7.0。在5 L台式搅拌发酵罐中,控制溶氧在30%以上,重组菌的对数生长中期流加碳源和氮源,发酵结束菌体干重为17.2g/L,目的蛋白的表达量占胞内可溶性蛋白的10.2%,单位体积内高密度发酵的海藻糖合成酶表达量是摇瓶发酵的6.9倍。重组海藻糖合成酶能够一步法将底物麦芽糖转化成海藻糖。通过对缓冲液pH,温度,反应时间,底物浓度,加酶量对麦芽糖转化率的影响研究,得到了该酶最适pH 8.5,最适温度20℃,在30℃以下和pH7.5.0之间保持较好的稳定性,并需在低温下保存。通过正交实验考察加酶量、pH、底物浓度、反应温度等因素,确立了海藻糖合成酶最佳的转化条件为:在10℃、pH8.5条件下反应36h、加酶量是6U/g麦芽糖,按此可以获得70.1%的海藻糖产率。

关键词：恶臭假单胞杆菌海藻糖合成酶克隆表达诱导条件转化条件

产嗜铁素菌株HZ-2的鉴定及其产嗜铁素能力的检测

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浙江农业科学 2021年第9期62卷 1849-1852,1881页

作者：梁建根浙江省农业科学院植物保护与微生物研究所浙江杭州310021

明确产嗜铁素菌株HZ-2的分类地位和其产嗜铁素的能力,能够为筛选有应用前景的有益菌提供依据。本研究用传统的形态学和生理生化方法,并结合脂肪酸分析法和16S rDNA序列分析法对菌株HZ-2进行了鉴定;采用CAS定性法和定量法对该菌株的产嗜... 详细信息

明确产嗜铁素菌株HZ-2的分类地位和其产嗜铁素的能力,能够为筛选有应用前景的有益菌提供依据。本研究用传统的形态学和生理生化方法,并结合脂肪酸分析法和16S rDNA序列分析法对菌株HZ-2进行了鉴定;采用CAS定性法和定量法对该菌株的产嗜铁素能力进行了系统的检测。由菌株HZ-2的表型特征与生理生化特性的分析结果发现,菌株和恶臭假单孢菌的相近度最高,依据MIDI操作手册,脂肪酸分析也可以把菌株HZ-2成功鉴定为恶臭假单胞菌(Pseudomonas putida)。此外,菌株HZ-2与Pseudomonas putida基因序列相似性最高,达到99%,由此可将其鉴定为Pseudomonas putida。菌株HZ-2在通用定性CAS平板检测中具有极快和极强的产圈特性,有明显的橙黄色的嗜铁素的螯合圈。CAS法定量检测结果表明,A/Ar值为0.049,该菌株产嗜铁素的能力属于极强的范围。本研究为以后发现和应用嗜铁素来防治土传、气传和采后真菌引起的植物病害提供理论和实用基础,并促进其后续工作的研究。

关键词：嗜铁素恶臭假单胞杆菌分泌能力

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遗传工程与环境保护

环境保护 1979年第1期7卷 14-15页

作者：杨惠芳

遗传工程又称基因工程,是七十年代生物科学的重大发展,遗传工程以分子遗传学为理论基础,综合了分子生物学和微生物遗传学的现代方法和手段,按照人的意愿把有机体中的一种专门特征的基因取出,并把它转移到另一个生物中去,构成一个具有新... 详细信息

遗传工程又称基因工程,是七十年代生物科学的重大发展,遗传工程以分子遗传学为理论基础,综合了分子生物学和微生物遗传学的现代方法和手段,按照人的意愿把有机体中的一种专门特征的基因取出,并把它转移到另一个生物中去,构成一个具有新遗传性的生物类型,这样就打破了生物固有的种的界限,为有计划地按需要改造现有的生物和创造新的生物类型开辟了新的途径。因此这门学科不仅对研究生物学有着重大的理论意义,同时对工、农、医。

关键词：遗传工程环境保护染色体微生物转化质体分子遗传学七十年恶臭假单胞杆菌重大发展现代方法

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恶臭假单肥杆菌致新生儿口鼻坏死二例

中华新生儿科杂志(中英文) 1999年第5期 222-223页

作者：李选侠陕西省岐山县医院儿科!邮编722400

食品抗氧剂-D-异抗坏血酸的研究——Ⅰ.2-酮基-D-葡萄糖酸产生菌的筛?

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微生物学通报 1987年第6期 246-249页

作者：梁改芹曹桂芳尹光琳中国科学院微生物研究所中国科学院微生物研究所北京北京上海交通大学生物科技系

从199株细菌中筛选出产2-酮基-D-葡萄糖酸的高产菌株2株。产物对葡萄糖的克分子转化率达85.93%、87.56%以上。经生物学鉴定,菌株E301为恶臭假单胞菌(Pseudomonas putida),菌株E54为产碱菌属的一个新种,为产酮产碱菌(Alcaligenes ketogen... 详细信息

从199株细菌中筛选出产2-酮基-D-葡萄糖酸的高产菌株2株。产物对葡萄糖的克分子转化率达85.93%、87.56%以上。经生物学鉴定,菌株E301为恶臭假单胞菌(Pseudomonas putida),菌株E54为产碱菌属的一个新种,为产酮产碱菌(Alcaligenes ketogenes ***.)。将发酵产物及其转化成的D-异抗坏血酸钠样品经红外吸收光谱比较,结果均与标准品相同。可确定这两株菌的发酵产物确系2-酮基-D-葡萄糖酸钙。

关键词：产酮产碱菌恶臭假单胞杆菌 2-酮基-D-葡萄糖酸 D-异抗坏血酸