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基于NF-κB/MAPK信号通路探讨息风定喘方对幼龄寒性哮喘豚鼠气道炎症影响的研究

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基于NF-κB/MAPK信号通路探讨息风定喘方对幼龄寒性哮喘豚鼠气道...

作者：张姗尉安徽中医药大学

学位级别：硕士

目的:通过复制幼龄寒性哮喘豚鼠模型,观察息风定喘方对哮喘豚鼠气道炎症、气道黏液高分泌及NF-κB/MAPK信号通路上相关蛋白表达的影响,进而探讨息风定喘方对幼龄寒性哮喘豚鼠气道炎症的可能作用机制。方法:将72只幼龄雄性豚鼠依据随机... 详细信息

目的:通过复制幼龄寒性哮喘豚鼠模型,观察息风定喘方对哮喘豚鼠气道炎症、气道黏液高分泌及NF-κB/MAPK信号通路上相关蛋白表达的影响,进而探讨息风定喘方对幼龄寒性哮喘豚鼠气道炎症的可能作用机制。方法:将72只幼龄雄性豚鼠依据随机数字法分为正常组(Normal组)、模型组(Model组)、息风定喘方高剂量组(CMHDI组)、息风定喘方中剂量组(CMMDI组)、息风定喘方低剂量组(CMLDI组)和地塞米松组(DXMS组),每组各12只。除正常组外各组豚鼠使用卵清蛋白(OVA)致敏、雾化激发,并予寒冷刺激,复制寒性哮喘豚鼠模型;正常组以0.9%氯化钠注射液代替进行致敏与雾化,无寒冷刺激。造模成功后,持续21天每天灌胃给药,中药高中低各组及西药组分别按儿童剂量换算豚鼠等效剂量给药,正常组及模型组以0.9%氯化钠注射液替代。实验过程中观察各组豚鼠的一般情况及体重变化;实验结束后留取豚鼠相关组织标本,肺组织行HE染色、AB-PAS染色;肺泡灌洗液计数中性粒细胞(NEUT)和嗜酸性粒细胞(EOS);ELISA法检测豚鼠血清IL-1β和IL-13表达情况;Western blot法检测肺组织NF-κBp65、p-NF-κBp65、p38MAPK、p-p38MAPK、ERK/p-ERK的蛋白表达情况。结果:1.一般情况观察:与Normal组比较,Model组豚鼠在实验过程中出现咳嗽喷嚏,精神不振,被毛凌乱,进食、饮水减少,体重增长水平明显降低。CMHDI组和DXMS组豚鼠的活动,饮食及生理情况正常,体重增长水平和正常组比较无明显差异。2.HE染色及肺组织形态分析:与Normal组比较,Model组镜下可见肺组织有大量炎细胞浸润,气管壁增厚,管道狭窄。与Model组比较,息风定喘方各剂量组镜下炎性细胞数量减少,气道结构有不同程度的改善,CMHDI组和DXMS组豚鼠肺组织病理结果与Normal组接近,但未达到正常水平。3.BALF中NEUT和EOS计数:与Normal组相比较,其余各组豚鼠BALF中NEUT和EOS均明显升高(P息风定喘方各剂量组黏蛋白分泌减少,杯状细胞数量均显著减少;CMHDI组和DXMS组气道黏蛋白分泌量与杯状细胞增生程度与Normal组相接近。5.肺组织MUC5AC的表达情况:与Normal组相比较,Model组豚鼠可见高表达MUC5AC(P息风定喘方对于治疗幼龄寒性哮喘豚鼠模型具有确切疗效。2.息风定喘方可显著改善幼龄寒性哮喘豚鼠气道的炎性细胞浸润、气道黏液分泌、杯状细胞化生程度。3.息风定喘方可以调节幼龄寒性哮喘模型豚鼠血清IL-1β、IL-13水平,减轻豚鼠的气道炎症。4.息风定喘方可以调节幼龄寒性哮喘模型豚鼠肺组织NF-κB/MAPK信号通路的表达。5.息风定喘方对幼龄寒性哮喘模型豚鼠气道炎症、气道黏液分泌及细胞因子IL-1β、IL-13的干预作用可能是通过对NF-κB/MAPK信号通路的调控完成。

关键词：哮喘息风定喘方 NF-κB/MAPK 黏蛋白气道炎症

息风定喘方对哮喘豚鼠血清VEGF、EGF、TGF-β2的调节作用

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中国医药导报 2022年第9期19卷 27-30页

作者：郭思彤尚莉丽安徽中医药大学研究生院安徽合肥230038 安徽中医药大学第一附属医院儿科安徽合肥230031

目的研究息风定喘方对哮喘豚鼠血管内皮生长因子(VEGF)、表皮生长因子(EGF)、转化生长因子β2(TGF-β2)的调节作用,探讨其作用机制。方法将72只普通级雄性豚鼠按照随机数字表法分为正常对照组、寒哮模型组、息风定喘方高剂量组[22.72 g/... 详细信息

目的研究息风定喘方对哮喘豚鼠血管内皮生长因子(VEGF)、表皮生长因子(EGF)、转化生长因子β2(TGF-β2)的调节作用,探讨其作用机制。方法将72只普通级雄性豚鼠按照随机数字表法分为正常对照组、寒哮模型组、息风定喘方高剂量组[22.72 g/(kg·d)]、息风定喘方中剂量组[11.36 g/(kg·d)]、息风定喘方低剂量组[5.68 g/(kg·d)],地塞米松组[0.5 mg/(kg·d)],每组12只。除正常对照组外利用卵清蛋白致敏+寒冷刺激复制寒性哮喘豚鼠模型,正常对照组给予等剂量生理盐水,造模成功后于实验第29天起,息风定喘方高、中、低剂量组灌胃给药,正常对照组和寒哮模型组予生理盐水。观察各组豚鼠的一般情况,HE染色法检测息风定喘方对寒性哮喘豚鼠模型的治疗效果;酶联免疫吸附试验分析血清VEGF、EGF、TGF-β2的含量。结果息风定喘方高剂量组豚鼠症状改善情况优于息风定喘方中、低剂量组。与寒哮模型组比较,息风定喘方各剂量组气道改变均有减轻,有不同程度炎症细胞浸润,肺泡间隔厚度降低。与正常对照组比较,寒哮模型组血清中VEGF、EGF、TGF-β2含量显著升高,差异均有高度统计学意义(P息风定喘方各剂量组的VEGF、EGF、TGF-β2含量均降低,差异有统计学意义(P息风定喘方低、中剂量组血清VEGF含量高于息风定喘方高剂量组,差异均有统计学意义(P息风定喘方低剂量组血清EGF含量高于息风定喘方高、中剂量组,差异有统计学意义(P息风定喘方低剂量组血清TGF-β2含量高于息风定喘方高、中剂量组,息风定喘方中剂量组血清TGF-β2含量高于息风定喘方高剂量组,差异有统计学意义(P息风定喘方可通过调节VEGF、EGF、TGF-β2含量,达到降低炎症因子水平,控制气道炎症,干预气道重塑的目的。

关键词：息风定喘方哮喘豚鼠血管内皮生长因子表皮生长因子转化生长因子β2

基于JAK2/STAT3信号通路探讨息风定喘方对哮喘豚鼠气道炎症影响的研究

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基于JAK2/STAT3信号通路探讨息风定喘方对哮喘豚鼠气道炎症影响的...

作者：陈悦安徽中医药大学

学位级别：硕士

目的:通过复制哮喘豚鼠模型,并使用不同剂量的息风定喘方对哮喘豚鼠进行干预,观察其对豚鼠气道炎症的作用和对JAK2/STAT3信号通路上相应蛋白及基因表达的影响,进而研究息风定喘方对哮喘豚鼠模型气道炎症的作用机制。方法:以6组×12只的... 详细信息

目的:通过复制哮喘豚鼠模型,并使用不同剂量的息风定喘方对哮喘豚鼠进行干预,观察其对豚鼠气道炎症的作用和对JAK2/STAT3信号通路上相应蛋白及基因表达的影响,进而研究息风定喘方对哮喘豚鼠模型气道炎症的作用机制。方法:以6组×12只的方法将72只豚鼠随机等分,依次为正常组、模型组、息风定喘方高剂量组（XFDCG组）、息风定喘方中剂量组（XFDCZ组）、息风定喘方低剂量组（XFDCD组）、西药组（Dex组）。在为期1周的适应性饲养后,于第8天和第15天分别进行腹腔注射,正常组豚鼠予1ml 0.9%的氯化钠溶液;其余各组注射1ml 10%卵清蛋白复合液致敏（卵清蛋白复合液由卵清蛋白和氢氧化铝以1∶100的比例混合于0.9%的氯化钠溶液配制）。自实验后第22天开始,除正常组外均用卵清蛋白（1%）雾化激发哮喘,30min/次,连续雾化7天,1次/d,每次结束后给予寒冷刺激60min;正常组雾化用0.9%的氯化钠溶液代替,结束后置于室温环境中。寒哮豚鼠模型造模成功后,自第29天开始,灌胃给药,息风定喘方各组及西药组给药量按照儿童剂量换算豚鼠等效剂量,正常组与模型组灌胃予0.9%的氯化钠溶液（2.5ml/d）,连续给药21天。造模过程中观察豚鼠一般情况,记录体重和死亡情况。在干预结束后取材,使用HE染色法观察豚鼠肺组织切片的炎性细胞浸润程度;使用ELISA法检测哮喘豚鼠血清中IL-6、IL-17、IL-23的水平;使用Western Blot法检测哮喘豚鼠肺组织中IL-6、IL-23R、IL-17R、JAK2、P-JAK2、STAT3、P-STAT3蛋白水平;使用Real-time RT-PCR法检测哮喘豚鼠肺组织中IL-17R、IL-23R、JAK2、STAT3 mRNA的表达。结果:1.一般情况观察:造模期间,与正常组相比,其余各组豚鼠被毛干枯甚则减少、体重较轻、食量亦随激发次数的增加而逐渐减少,均逐渐出现畏寒、活动频率降低、反应迟钝等症状。雾化激发后,模型组、息风定喘方各组及西药组豚鼠均出现烦躁不安,喷嚏咳嗽,呼吸增快,甚则张口呼吸等症状。药物治疗后,除模型组与正常组外,各组豚鼠活动较前增加、被毛光泽恢复且毛量增多、食量增加、体重增长速度加快、喷嚏咳嗽频率降低,其中XFDCG组及Dex组的豚鼠一般症状改善情况优于XFDCZ组和XFDCD组。2.各组豚鼠肺组织病理改变:正常组的肺组织整体结构正常,肺泡结构清晰,肺泡壁无明显增厚,肺泡无明显塌陷,未见明显炎症细胞浸润;与模型组比,息风定喘方各剂量组及西药组,病理学改变较轻、肺组织镜下未见异常结构性改变、气管壁增生程度较低、气道腔内可见或未见少量炎性分泌物,其中XFDCG组与Dex组在HE染色下的病理情况改善程度最优。3.与模型组相比,XFDCD组、XFDCZ组、XFDCG组、Dex组的血清IL-6、IL-17、IL-23表达水平均降低,其中IL-6与IL-17 Dex组降低更明显,IL-23 XFDCG组降低更明显（P＜0.05）;XFDCZ组、XFDCG组、Dex组肺组织IL-23R、STAT3、P-STAT3蛋白水平均降低,其中XFDCG组降低更明显（P＜0.05）;XFDCD组、XFDCZ组、XFDCG组、Dex组肺组织IL-6、IL-17R、JAK2、P-JAK2蛋白水平均降低,其中XFDCG组降低明显（P＜0.05）;XFDCD组、XFDCZ组、XFDCG组、Dex组肺组织IL-17R、IL-23R、JAK2、STAT3 mRNA表达均有下调,其中IL-17R mRNA XFDCG组降低明显,IL-23R、JAK2、STAT3 mRNA Dex组降低明显（P＜0.05）。4.与正常组相比,模型组、XFDCD组、XFDCZ组血清IL-6、IL-23表达水平均升高（P＜0.05）;模型组、XFDCD组、XFDCZ组、XFDCG组、Dex组的血清IL-17、表达水平均升高（P＜0.05）;模型组、XFDCD组、XFDCZ组、Dex组肺组织IL-23R蛋白水平明显升高（P＜0.05）;模型组、XFDCD组、XFDCZ组肺组织IL-6、IL-17R、JAK2、P-JAK2蛋白水平明显升高（P＜0.05）;模型组、XFDCD组肺组织STAT3蛋白水平均有升高（P＜0.05）;模型组、XFDCD组、XFDCZ组、Dex组肺组织P-STAT3蛋白水平均有升高（P＜0.05）;模型组、XFDCD组、XFDCZ组肺组织IL-17R、IL-23R、JAK2、STAT3 mRNA表达均有上调（P＜0.05）。结论:1.息风定喘方对于治疗哮喘豚鼠模型的疗效确切。2.息风定喘方可以使哮喘豚鼠气道的炎性细胞浸润现象明显好转。3.本实验发现息风定喘方可以通过调控JAK2、STAT3、P-JAK2、P-STAT3等蛋白的表达,以及干预血清中炎症因子IL-6、IL-17、IL-23的水平,从而调节JAK2/

关键词：寒性哮喘 JAK2/STAT3信号通路 Th17/Treg细胞失衡息风定喘方气道炎症

基于miR-23b-3p/TGF-β1/smads信号通路以及MMP-9探究息风定喘方对哮喘豚鼠气道重塑的影响

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基于miR-23b-3p/TGF-β1/smads信号通路以及MMP-9探究息风定喘方...

作者：李双颖安徽中医药大学

学位级别：硕士

目的:通过建立寒性哮喘豚鼠模型探究息风定喘方对哮喘豚鼠气道重塑的影响,并且基于miR-23b-3p/TGF-β1/smads信号通路以及MMP-9探讨其干预哮喘气道重塑的作用机制。方法:利用Excel软件中RAND函数生成随机数字表的方法,将72只幼龄雄性豚... 详细信息

目的:通过建立寒性哮喘豚鼠模型探究息风定喘方对哮喘豚鼠气道重塑的影响,并且基于miR-23b-3p/TGF-β1/smads信号通路以及MMP-9探讨其干预哮喘气道重塑的作用机制。方法:利用Excel软件中RAND函数生成随机数字表的方法,将72只幼龄雄性豚鼠随机分为正常组（Normal）、模型组（Model）、息风定喘方高剂量组（High dose of XFDC）、息风定喘方中剂量组（Medium dose of XFDC）、息风定喘方低剂量组（Low dose of XFDC）和地塞米松组（Dexamethasone）,每组各12只。参与寒性哮喘造模的各组于实验的第8、15天分别腹腔注射10%卵清蛋白（OVA）混合液致敏,第22天开始连续7天以1%0VA溶液雾化激发+寒冷刺激复制寒性哮喘豚鼠模型;正常组以0.9%Na Cl溶液代替。造模成功后,息风定喘方高、中、低剂量组,分别按22.72g/kg/d、11.36g/kg/d、5.68g/kg/d剂量给药;地塞米松组,按0.5mg/kg/d剂量给药;正常组与模型组均用等量0.9%Na Cl溶液代替,每组每天灌胃1次,连续21天。实验过程中观察各组豚鼠的一般情况及体重变化;实验结束后留取豚鼠肺组织标本,行苏木素-伊红（HE）染色、Masson染色、AB-PAS染色;酶联免疫吸附法（ELISA）检测豚鼠血清Ig-E、IL-4、IL-13、TNF-α水平;Western blot（WB）检测肺组织TGF-β1、samd2、smad3、MMP-9蛋白表达情况;逆转录-聚合酶链反应法（RT-PCR）检测miR-23b-3p、TGF-β1、samd2、smad3、MMP-9基因表达情况。结果:1.一般情况:与正常组比较,模型组豚鼠在实验过程中出现行动迟缓,精神不振,进食、饮水减少,体重减轻明显（P＜0.05）。息风定喘方各剂量组和地塞米松组豚鼠的进食、饮水及排便情况正常,体重增长和正常组比较无明显差异。2.HE染色及肺组织形态情况:与正常组比较,模型组镜下可见气道周围有大量炎细胞浸润,气道结构明显异常（气管壁厚度、平滑肌层厚度,P＜0.01）。与模型组比较,息风定喘方各剂量组镜下炎性细胞数量减少,气道结构有不同程度的改善（气管壁厚度、平滑肌层厚度,P＜0.01）。3.Masson染色及肺组织气道胶原沉积情况:与正常组比较,模型组支气管增厚,胶原沉积面积相对明显增多（P＜0.01）。与模型组比较,息风定喘方各剂量组胶原沉积面积均显著减少（P＜0.01）。息风定喘方高剂量组相对于地塞米松组胶原沉积面积减少更明显（P＜0.05）。4.AB-PAS染色及杯状上皮细胞增生情况:与正常组比较,模型组杯状细胞计数明显增多（P＜0.01）。与模型组比较,息风定喘方各剂量组杯状细胞计数均显著减少（P＜0.01）。5.血清IL-4、IL-13、TNF-α、Ig-E水平:与正常组比较,血清IL-4、IL-13、TNF-α在模型组和息风定喘方中、低剂量组差异具有统计学意义（P＜0.01）;息风定喘方高剂量组IL-4、IL-13、TNF-α差异无统计学意义;血清Ig-E在各组中与正常组比较差异均具有统计学意义（P＜0.01）。与模型组比较,息风定喘方各剂量组IL-4、IL-13、TNF-α、Ig-E表达水平均显著降低（P＜0.01）。6.肺组织TGF-β1、samd2/3、MMP-9蛋白表达情况:与模型组比较,息风定喘方各剂量组TGF-β1、samd2/3、MMP-9蛋白表达均显著降低（P＜0.01）。与地塞米松组比较,息风定喘方高剂量组的TGF-β1、samd2/3、MMP-9蛋白表达差异无统计学意义。7.肺组织TGF-β1、samd2/3、miR-23b-3p、MMP-9 mRNA表达情况:与模型组比较,MMP-9基因的表达在息风定喘方各剂量组中均明显降低（P＜0.05）;TGF-β1、samd2/3基因的表达在仅在息风定喘方高、中剂量组中均明显降低（P＜0.05）;miR-23b-3p的表达仅在息风定喘方高剂量组有的明显升高（P＜0.05）。8.相关性分析:对上述各组指标数据进行相关性分析,除miR-23b-3p mRNA与各组呈显著负相关（P＜0.01）,余下任意两组相比较均呈显著正相关（P＜0.01）,提示miR-23b-3p可通过下调TGF-β1/smads通路而实现抑制气道重塑的作用。结论:1.息风定喘方可以改善寒性哮喘模型豚鼠的气管壁厚度、平滑肌层厚度、气道胶原沉积面积以及杯状细胞计数。2.息风定喘方可以调节寒性哮喘模型豚鼠血清Ig E、IL-4、IL-13、TNF-α水平,减轻豚鼠的气道炎症。3.息风定喘方可以调节寒性哮喘模型豚鼠肺组织miR-23b-3p/TGF-β1/samds信号通路以及MMP-9的表达。4.息风定喘方对寒性哮喘模型豚鼠的气道重塑情况及相关炎症因子IL-4、IL-1

关键词：哮喘儿童息风定喘方气道重塑 miR-23b-3p/TGF-β1/samds MMP-9