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恒河猴自发性盆腔器官脱垂作为研究人盆腔器官脱垂理想模型的综合评价

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Science Bulletin 2023年第20期68卷 2434-2447,M0006页

作者：李雅倩刘健张也毛萌王宏马懿迪陈志刚张又月廖成敏常晓青高倩倩郭建宾叶扬艾方方刘旭东赵晓悦田维杰杨华季维智谭韬朱兰 Medical Science Research Center the State Key Laboratory for ComplexSevereand Rare DiseasesPeking Union Medical College HospitalChinese Academy of Medical Science and Peking Union Medical CollegeBeijing 100730China State Key Laboratory of Primate Biomedical Research Institute of Primate Translational MedicineKunming University of Science and TechnologyKunming 650500China Department of Obstetrics and Gynecology National Clinical Research Center for Obstetric&Gynecologic Diseasesthe State Key Laboratory for ComplexSevereand Rare Diseasesthe State Key Laboratory of Common Mechanism Research for Major DiseasesPeking Union Medical College HospitalChinese Academy of Medical Sciences and Peking Union Medical CollegeBeijing 100730China Department of Obstetrics and Gynecology The First Affiliated Hospital of Zhengzhou UniversityZhengzhou 450000China Department of Obstetrics and Gynecology Beijing Chao-Yang HospitalCapital Medical UniversityBeijing 100020China Department of Obstetrics and Gynecology Xuanwu HospitalCapital Medical UniversityBeijing 100053China Department of Gynecology Guizhou Provincial People’s HospitalMedical College of Guizhou UniversityGuiyang 550002China

盆腔器官脱垂严重影响女性的生活质量且其治疗的并发症严重.开发新疗法须在临床前研究中对其免疫反应和安全性进行评估.但多数四足动物的解剖结构和病理变化与人相差较大,目前缺乏合适的动物模型.本研究对72只老年恒河猴进行了体格检查... 详细信息

盆腔器官脱垂严重影响女性的生活质量且其治疗的并发症严重.开发新疗法须在临床前研究中对其免疫反应和安全性进行评估.但多数四足动物的解剖结构和病理变化与人相差较大,目前缺乏合适的动物模型.本研究对72只老年恒河猴进行了体格检查,发现恒河猴自发性盆腔器官脱垂的发生率与人相似.作者选取了5只正常恒河猴和4只脱垂恒河猴的阴道组织进行进一步分析.Verhoeff-van Gieson染色表明,与正常恒河猴相比,恒河猴脱垂阴道的弹力纤维含量明显降低.免疫组化结果表明,恒河猴脱垂阴道的平滑肌束紊乱,大平滑肌束的数量明显低于正常恒河猴.天狼星红染色提示恒河猴脱垂阴道中Ⅰ型和Ⅲ型?原蛋白的比值明显降低.恒河猴脱垂阴道的组织学形态和生化改变与人脱垂相似.作者进一步构建了恒河猴脱垂后阴道的单细胞转录组图谱,对比分析显示人和恒河猴的阴道具有相似的细胞组成.差异基因分析提示细胞外基质失调和免疫紊乱是保守的分子机制.成纤维细胞和巨噬细胞的相互作用可能在人和恒河猴脱垂中都起到重要作用.综上,该研究对恒河猴自发性脱垂进行了综合评估并表明其是盆腔器官脱垂研究的合适动物模型.

关键词：盆腔器官脱垂临床前研究生化改变恒河猴动物模型细胞外基质弹力纤维成纤维细胞

恒河猴感染H5N1禽流感病毒后肺组织病理变化及病毒分布

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中华结核和呼吸杂志 2014年第9期37卷 682-686页

作者：赖天文邓少嫦吴东黎东明陈敏吕莹莹张钰黄韧吴斌广东湛江广东医学院附属医院呼吸疾病研究所 524001 广东省实验动物监测所

目的探讨恒河猴感染H5N1病毒后肺组织病理变化及病毒分布特点.方法在麻醉状态下对4只雄性恒河猴经鼻部滴入H5N1禽流感病毒（AF148678/ACGoose/Guangdong/11961H5N1）,在染毒后第1、3、6及14天分别剖杀1只恒河猴.HE染色观察主要组织器... 详细信息

目的探讨恒河猴感染H5N1病毒后肺组织病理变化及病毒分布特点.方法在麻醉状态下对4只雄性恒河猴经鼻部滴入H5N1禽流感病毒（AF148678/ACGoose/Guangdong/11961H5N1）,在染毒后第1、3、6及14天分别剖杀1只恒河猴.HE染色观察主要组织器官的病理变化,应用实时荧光（RT）-PCR及免疫组织化学方法分析H5N1禽流感病毒侵袭机体后肺及其他主要器官的病理改变及病毒分布情况.结果恒河猴感染H5N1禽流感病毒后,病毒仅在肺组织复制,主要侵犯肺泡上皮细胞和肺巨噬细胞,表现为弥漫性肺泡损伤,先后经历渗出期、增生期和纤维化期.在肺外主要器官也观察到变性、坏死等病理变化,但均未分离出病毒.结论 H5N1禽流感病毒感染引起的急性弥漫性肺损伤是主要病理改变.肺脏是H5N1禽流感病毒主要攻击对象,下呼吸道以外的组织器官中未见到病毒复制,这可能是H5N1禽流感病毒在人与人之间传递的障碍之一.

关键词： H5N1禽流感病毒恒河猴非人灵长类动物模型

恒河猴血管内皮细胞离心沉淀移植替代角膜内皮细胞的研究

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中华眼科杂志 2013年第11期49卷 1006-1013页

作者：朱勤胡敏孙晓梅刘海杨忠昆代解杰胡竹林云南省第二人民医院眼科中心昆明650021 中国医学科学院昆明医学生物研究所灵长类研究中心

目的探讨恒河猴血管内皮细胞（RMVEC）移植替代角膜内皮细胞（CEC）治疗角膜内皮损伤的可行性.方法实验研究.体外培养增殖RMVEC并用5-溴脱氧尿嘧啶核苷（BrdU）标记.将恒河猴9只采用随机数字表法分为两组：实验组（6只）、对照组（3只... 详细信息

目的探讨恒河猴血管内皮细胞（RMVEC）移植替代角膜内皮细胞（CEC）治疗角膜内皮损伤的可行性.方法实验研究.体外培养增殖RMVEC并用5-溴脱氧尿嘧啶核苷（BrdU）标记.将恒河猴9只采用随机数字表法分为两组：实验组（6只）、对照组（3只）.实验组将体外培养的BrdU标记的RMVEC利用离心沉淀法移植到撕除后弹力层的恒河猴角膜内表面后缝回植床;对照组将撕除后弹力层的术眼角膜植片原位缝回植床.术后观察各组角膜植片透明情况.术后30、60、90 d分别摘取术眼行病理切片、抗BrdU单克隆抗体免疫组织化学染色、扫描电镜及透射电镜观察RMVEC在角膜植片内表面的分布及细胞超微形态结构.结果在实验观察期内,实验组角膜植片比对照组角膜植片有较好的透明性,未出现新生血管及大泡性角膜病变.病理学检查发现实验组角膜内表面可见细胞层,抗BrdU单克隆抗体免疫组织化学染色阳性,证实该细胞为培养的BrdU标记的血管内皮细胞;对照组角膜内表面未见细胞样结构.扫描电镜下可见实验组角膜植片内表面可见RMVEC分布均匀,生长良好,呈不规则多边形,表面可见微绒毛,RMVEC间可见少量白细胞,小梁网处部分细胞碎片聚集;对照组角膜内表面呈纤维物质样,未见细胞生长.透射电镜：培养的RMVEC及实验组角膜内表面的RMVEC呈不规则扁圆状,细胞间大量桥粒链接,胞质内细胞器丰富,可见特征性WP小体,提示其具备活体血管内皮细胞的特征与活性,对照组角膜内表面未见细胞结构.结论 RMVEC能够在撕除后弹力层的角膜内表面生长并替代CEC的功能,可能成为治疗角膜内皮损伤的一种新思路.

关键词：内皮,血管细胞移植内皮,角膜细胞,培养的恒河猴

人工设计的HIV-1重组鸡痘病毒诱导恒河猴产生免疫应答的研究

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高技术通讯 2007年第11期17卷 1198-1203页

作者：张立树金宁一宋英洪宝庆马鹤雯尚玉璞王宏孙岩松金洪涛战大伟李昌军事医学科学院11所全军基因工程重点实验室长春130062 天津大学农业与生物工程学院天津300072 军事医学科学院实验动物中心北京100071 Department of Biochemistry and Molecular Biology Oklahoma State University Stillwater USA 74078 暨南大学生命科学院生物系广州510632

将人工设计的HIV-1多表位-p24嵌合基因重组鸡痘病毒rFPV-MEGp24大量制备并纯化后,分别在0周、8周、18周肌肉注射至实验恒河猴中,在第2次免疫后2周和第3次免疫后2周采集血液,分离血清和外周血淋巴细胞（PBMC）,ELISA法检测血清HIV-1抗体... 详细信息

将人工设计的HIV-1多表位-p24嵌合基因重组鸡痘病毒rFPV-MEGp24大量制备并纯化后,分别在0周、8周、18周肌肉注射至实验恒河猴中,在第2次免疫后2周和第3次免疫后2周采集血液,分离血清和外周血淋巴细胞（PBMC）,ELISA法检测血清HIV-1抗体和PBMC培养上清Th1类细胞因子的含量,MTT法测定PBMC的增殖能力,乳酸脱氢酶（LDH）释放法检测PBMC特异性CTL杀伤活性。结果表明：HIV-1多表位-p24嵌合基因重组鸡痘病毒可刺激恒河猴产生HIV-1特异性抗体;免疫猴的PBMC在HIV-1抗原肽刺激下细胞增殖能力加强,针对HIV-1靶细胞的特异性CTL杀伤活性产生,分泌Th1类细胞因子IFN-γ、IL-2的水平升高。研究提示,HIV-1多表位-p24嵌合基因重组鸡痘病毒能诱导恒河猴产生特异性细胞和体液免疫应答。

关键词：人免疫缺陷病毒I型人工设计重组鸡痘病毒恒河猴免疫应答

恒河猴超声乳化角膜内皮失代偿动物模型的活体共聚焦显微镜观察

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中国医学科学院学报 2016年第1期38卷 42-48页

作者：吴敏胡竹林孙晓梅代解杰昆明医科大学第四附属医院眼科昆明650021 中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所树鼩种属资源中心昆明650118

目的观察恒河猴超声乳化角膜内皮失代偿动物模型在共聚焦显微镜下的角膜特征性变化。方法健康恒河猴4只,以右眼为实验组,通过超声乳化能量破坏角膜中央直径7-9 mm处内表面制作角膜内皮失代偿模型;以左眼为空白对照组。于术前,术后1、2、... 详细信息

目的观察恒河猴超声乳化角膜内皮失代偿动物模型在共聚焦显微镜下的角膜特征性变化。方法健康恒河猴4只,以右眼为实验组,通过超声乳化能量破坏角膜中央直径7-9 mm处内表面制作角膜内皮失代偿模型;以左眼为空白对照组。于术前,术后1、2、3、4周应用裂隙灯显微镜和活体共聚焦显微镜观察角膜各层结构变化。采用SPSS 19.0统计软件进行数据分析,基底层下神经丛数量、内皮细胞密度的比较采用配对t检验,角膜厚度采用重复测量方差分析。结果在超声乳化损伤角膜内皮后,角膜改变逐渐出现在内皮层、基质层、前弹力层和基底上皮层。早期主要改变是角膜内皮细胞间隙增宽、细胞轻度水肿,基质层出现活化的基质细胞和细胞形态改变,基质厚度增加;术后2周开始出现前弹力层上皮状神经纤维减少,同时伴有基质层和内皮水肿加重;术后3周基底上皮细胞间隙增宽,少量朗汉细胞浸润,基质层和内皮水肿加重;术后4周基底上皮层大量朗汉细胞浸润,前弹力层仅见少量上皮状神经纤维,基质层大量活化的基质细胞,内皮层严重水肿。术后2周实验组基底膜下神经丛数量（t=6.9192,P=0.002）和内皮细胞密度（t=7.8936,P〈0.0001）明显低于对照组。实验组术后1（t=28.31,P〈0.0001）、2（t=63.56,P〈0.0001）、3（t=123.22,P〈0.0001）、4周（t=180.80,P〈0.0001）的角膜厚度明显高于对照组。结论活体共聚焦显微镜可清晰显示超声乳化后恒河猴角膜的变化,主要特征是逐渐加重的内皮细胞间隙增宽、基质细胞活化、朗汉细胞增多和基底上皮层下神经丛减少。

关键词：恒河猴角膜内皮失代偿活体共聚焦显微镜动物模型

恒河猴肝脏cDNA文库表达序列标签测序及序列分析

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生物医学工程学杂志 2010年第2期27卷 358-364页

作者：柯晓雪王建东丁杨谭卫东陆燕蓉程惊秋陈又南四川大学华西医院卫生部移植工程与移植免疫重点实验室成都610041

恒河猴是重要的实验动物模型,其遗传学研究对于科学分析、应用动物实验结果有重要意义。我们从恒河猴肝脏cDNA文库随机挑选401个克隆单向测序,获得393条有效序列,拼接和聚类后得到221个非冗余EST序列。Swiss-prot数据库比对发现有188个U... 详细信息

恒河猴是重要的实验动物模型,其遗传学研究对于科学分析、应用动物实验结果有重要意义。我们从恒河猴肝脏cDNA文库随机挑选401个克隆单向测序,获得393条有效序列,拼接和聚类后得到221个非冗余EST序列。Swiss-prot数据库比对发现有188个Unigenes序列与已知蛋白质匹配,并与人有高度同源性,其中16个为已知恒河猴蛋白质。BLASTN比对显示,另外的33个Unigenes序列中,有26个Unigenes序列与已知恒河猴基因匹配。dbEST数据库比对表明有3个Unigenes序列为新发现的恒河猴EST序列。

关键词：恒河猴 cDNA文库肝脏表达序列标签

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恒河猴piwil4基因的鉴定与表达分析

遗传 2011年第4期33卷 365-370页

作者：赵少志李玥江雪卢亦路陶大昌刘运强马用信四川大学华西医院医学遗传研究室暨生物治疗国家重点实验室疾病基因组学研究室成都610041

为了研究人类近亲恒河猴中PIWI家族蛋白PIWIL4的结构和表达情况,文章首次利用同源比对和RT-PCR方法克隆了恒河猴piwil4基因,检测了其mRNA在恒河猴心脏、脑、结肠、附睾和睾丸5种组织中的表达情况,利用生物信息学的方法对恒河猴piwil4基... 详细信息

为了研究人类近亲恒河猴中PIWI家族蛋白PIWIL4的结构和表达情况,文章首次利用同源比对和RT-PCR方法克隆了恒河猴piwil4基因,检测了其mRNA在恒河猴心脏、脑、结肠、附睾和睾丸5种组织中的表达情况,利用生物信息学的方法对恒河猴piwil4基因和人的PIWIL4(HIWI2)基因编码的蛋白产物进行了同源性分析和结构域分析,并进一步利用免疫组化的方法比较了PIWIL4蛋白在成人、成年恒河猴和性未成熟恒河猴睾丸组织中的表达分布。结果表明,恒河猴piwil4 mRNA在多组织中表达,恒河猴和人的PIWIL4蛋白的氨基酸序列同源性达97%以上,均含有PAZ和Piwi结构域,它们在两物种成年个体睾丸组织中空间分布一致,但在不同发育阶段恒河猴睾丸组织中的分布发生了改变,幼猴中PIWIL4蛋白主要表达于生精小管细胞的细胞核,在成年猴睾丸组织中则表达于各种细胞的胞浆中。上述结果提示,piwil4基因在人类和恒河猴精子发生过程中作用类似,PIWIL4蛋白在幼猴和成年猴睾丸组织中的表达差异提示它们在不同发育阶段功能的改变。

关键词：恒河猴 PIWI家族 piwil4基因免疫组织化学

恒河猴外周血调节性T淋巴细胞的分离纯化及鉴定

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中国修复重建外科杂志 2012年第10期26卷 1237-1241页

作者：张爽金熙程汉佳何斯荣陈又南龙丹单娟曾力王成世程惊秋陆燕蓉四川大学华西医院卫生部移植科学与移植免疫重点实验室成都610041 四川大学生命科学学院

目的建立恒河猴外周血CD4+CD25+调节性T淋巴细胞(regulatory T cells,Tregs)快速有效的分离纯化方法。方法 4～5岁健康恒河猴10只,雌性4只,雄性6只,体重5～8 kg;于大隐静脉抽取外周血,每只抽取8 mL。密度梯度离心法分离外周血单个核细胞... 详细信息

目的建立恒河猴外周血CD4+CD25+调节性T淋巴细胞(regulatory T cells,Tregs)快速有效的分离纯化方法。方法 4～5岁健康恒河猴10只,雌性4只,雄性6只,体重5～8 kg;于大隐静脉抽取外周血,每只抽取8 mL。密度梯度离心法分离外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC),分别采用非人灵长类Tregs分离试剂盒的生物素标记的混合抗体和磁珠标记的抗生物素抗体阴性分选,以及大鼠抗人CD4-活化蛋白C(activatedprotein C,APC)和抗APC多选试剂盒中的磁珠标记的抗APC抗体阳性分选出CD4+T淋巴细胞,比较两种方法获得细胞的得率、活性及纯度;选择得率、活性和纯度较高的分选方法获得的CD4+T淋巴细胞,用磁珠标记的抗人CD25抗体进行阳性分选,获得CD4+CD25+Tregs,流式细胞仪检测纯度、活性及FoxP3表达水平,以及Tregs对刀豆蛋白(concanavalinA,ConA)刺激的自体CD4+CD25-效应性T淋巴细胞(effective T cells,Teffs)增殖的抑制功能。结果 CD4+T淋巴细胞阳性分选和阴性分选后,细胞活性均达95%左右,差异无统计学意义(P>0.05),但阳性分选后CD4+T淋巴细胞得率和纯度均显著高于阴性分选(P恒河猴外周血中有功能的CD4+CD25+Tregs。

关键词：调节性T淋巴细胞效应性T淋巴细胞免疫磁珠分选淋巴细胞分离恒河猴

恒河猴LFA3胞外段CD2结合域在毕赤酵母中的重组表达及活性分析

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生物医学工程学杂志 2015年第1期32卷 120-125页

作者：朱健朱升云杨浩卢晓风万琳四川大学华西医院卫生部移植工程与移植免疫重点实验室成都610041

人淋巴细胞功能相关抗原3（hLFA3）是一种重要的T细胞黏附分子,其与CD2结合后可促进T细胞活化。恒河猴被广泛用作人类免疫疾病动物模型。因免疫系统存在严格的种属特异性,有必要研究恒河猴LFA3的功能。本文通过PCR扩增获得mmLFA3Sh基因... 详细信息

人淋巴细胞功能相关抗原3（hLFA3）是一种重要的T细胞黏附分子,其与CD2结合后可促进T细胞活化。恒河猴被广泛用作人类免疫疾病动物模型。因免疫系统存在严格的种属特异性,有必要研究恒河猴LFA3的功能。本文通过PCR扩增获得mmLFA3Sh基因,将其与人IgG1Fc片段融合,插入毕赤酵母表达载体构建表达质粒pPIC9K-mmLFA3Sh-Ig。诱导表达后获得融合蛋白mmLFA3Sh-Ig,产量为3-4mg/L。mmLFA3Sh-Ig能够特异性与CD2阳性细胞结合,能够抑制Con A和同种抗原刺激的猴和人淋巴细胞增殖。这些实验结果表明,mmLFA3Sh-Ig可能作为一种新的生物制剂用于研究恒河猴免疫疾病发病机制和实验治疗。

关键词：人淋巴细胞功能性相关抗原3 免疫抑制恒河猴毕赤酵母