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四逆汤的谱动学与谱效学研究

四逆汤的谱动学与谱效学研究

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作者：赵雪丽广州中医药大学

学位级别：硕士

中药复方具有多成分、多途径、多靶点的作用特点,这使得中药复方的药动学及药效学研究,较西药而言,面临更大的挑战。因此建立适合中药复方特点的药动学与药效学研究方法是中药在该领域研究的必经之路,而谱动学与谱效学概念的提出,为研... 详细信息

中药复方具有多成分、多途径、多靶点的作用特点,这使得中药复方的药动学及药效学研究,较西药而言,面临更大的挑战。因此建立适合中药复方特点的药动学与药效学研究方法是中药在该领域研究的必经之路,而谱动学与谱效学概念的提出,为研究者们提供了新的思路。目的：本研究以四逆汤作为模型药物,采用总量统计距法对其进行谱动学研究,计算四逆汤多成分的药物动力学参数。同时在中药复方指纹图谱的基础上,进行抗心肌缺血作用的药效学研究,将二者结合,采用灰色关联度法进行分析,探索四逆汤抗心肌缺血作用的谱效学关系,为中药复方代谢机制以及药效物质基础研究提供新的方法和思路。方法：1四逆汤指纹图谱的建立考察四逆汤指纹图谱的色谱条件,通过优化流动相、色谱柱、洗脱梯度、波长、流速等确定最佳检测条件;建立10批四逆汤药材指纹图谱,并采用“中药指纹图谱相似度评价系统软件2004A版”进行相似度研究;在同样的色谱条件下,对四逆汤中次乌头碱、新乌头碱、苯甲酰新乌头原碱、甘草苷、甘草酸以及6-姜酚进行含量测定。2四逆汤谱动学研究采用四逆汤指纹图谱的色谱条件,建立空白大鼠和给药后不同时间点的大鼠血浆指纹图谱,用总量统计距法进行分析,计算四逆汤整体复方药物动力学总量统计矩参数,考察四逆汤在大鼠体内代谢的谱动学特征。3四逆汤抗心肌缺血药效学研究取SD大鼠104只,随机分为4组,每组8只,分别是空白对照组、模型组、10批四逆汤组、阳性对照组,灌胃给予相应药物连续7天,从第五天开始,除空白对照组外其他各组大鼠均灌服异丙肾上腺素(ISO)制备心肌缺血模型,以肌酸激酶(CK)以及乳酸脱氢酶(LDH)的含量作为检测指标,考察10批四逆汤药材抗心肌缺血的药效作用。4四逆汤谱效学研究在药效学实验的基础上,结合指纹图谱数据,采用灰色关联度法进行分析,计算四逆汤各共有峰成分对抗心肌缺血药效作用的贡献大小。结果：1.确定四逆汤指纹图谱的测定条件为：色谱柱:AgilentC18(2)(250×4.6mm,5 μm);流动相：乙腈-0.1%磷酸水,洗脱梯度：(0-18min,5%～19%A:18～42min, 19%～22%A;42～52min,22%～35%A;52～80min,35%～65%A;80～85min,65%～65%A);流速：0.8mL/min;柱温：30℃;检测波长：230nm。建立了10批四逆汤指纹图谱,得到22个共有峰,相似度均在0.9以上,该测定方法稳定性、重复性、重现性良好。四逆汤三批样品中次乌头碱、新乌头碱、苯甲酰新乌头原碱、甘草苷、甘草酸以及6-姜酚的含量分别为：13.01～13.03,20.2～20.4,23.1～23.2,364.7～365.8,680.7～681.3,61.2～62.2μg·mL-1。2.四逆汤在SD大鼠体内代谢表观半衰期为9.383h,即经9.383h代谢50%,经9.383±1.96×15.04h后95%的成分被排出体外,说明四逆汤在大鼠体内代谢遵循一般药物代谢的规律。3.药效实验发现,与空白对照组相比,模型组大鼠血清的***含量均显著升高。而与模型组相比,四逆汤组均能使心肌缺血大鼠血清的***含量显著降低。说明10批四逆汤药材均具有较好的抗心肌缺血的作用。4.经过灰色关联度分析得到四逆汤抗心肌缺血作用的谱效学相关参数,初步确定各个共有峰对抗心肌缺血作用的贡献大小顺序为P12>P17>P11>P18>P4>P10>P16>P20> P2>P15>P14,并确定排在1、3、4位的成分分别为苯甲酰新乌头原碱、甘草苷和6-姜酚。结论：本实验所采用的谱动学与谱效学方法能够较好的应用于中药复方多成分药物代谢机制与药效物质基础的研究,能够体现中药复方整体性的特点,为中药现代化研究提供新的思路和实验依据。

关键词：四逆汤总量统计距法谱动学灰色关联度法谱效学

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