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超临界流体萃取高效液相色谱法测定总合草苔虫中草苔虫内酯4含量

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中国药学杂志 2003年第12期38卷 907-909页

作者：孙鹏李玲易杨华张淑瑜汤海峰周大铮第二军医大学药学院海洋药物研究室上海200433

目的　建立超临界流体萃取 (SFE)和高效液相色谱 (HPLC)的联用技术测定总合草苔虫中抗癌活性成分的方法。方法　正交设计法考察了影响草苔虫内酯 4 (bryostatin 4 )超临界流体萃取效率的主次效应及最佳萃取条件 ,并以HPLC定量检测bryost... 详细信息

目的　建立超临界流体萃取 (SFE)和高效液相色谱 (HPLC)的联用技术测定总合草苔虫中抗癌活性成分的方法。方法　正交设计法考察了影响草苔虫内酯 4 (bryostatin 4 )超临界流体萃取效率的主次效应及最佳萃取条件 ,并以HPLC定量检测bryostatin 4。结果　SFE萃取的最佳条件为 :压力 4 0MPa ,温度 4 5℃ ,改性剂量 1mL ,萃取体积 15mL。结论　SFE HPLC可用于检测总合草苔虫中的草苔虫内酯成分 ,该方法快速。

关键词：超临界流体萃取高效液相色谱法测定总合草苔虫草苔虫内酯含量

高效液相色谱-质谱法鉴定总合草苔虫中的草苔虫内酯成分

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色谱 2004年第2期22卷 144-146页

作者：孙鹏李玲易杨华张诗龙周大铮张淑瑜第二军医大学药学院海洋药物研究室上海200433

采用高效液相色谱分离与质谱检测的联用技术,对总合草苔虫中的草苔虫内酯成分进行定性分析。在以体积比为80∶20的甲醇水溶液为流动相、采用ODS柱进行分离的色谱条件下,10种草苔虫内酯成分均可获得良好的分离。分析结果表明:深圳大亚... 详细信息

采用高效液相色谱分离与质谱检测的联用技术,对总合草苔虫中的草苔虫内酯成分进行定性分析。在以体积比为80∶20的甲醇水溶液为流动相、采用ODS柱进行分离的色谱条件下,10种草苔虫内酯成分均可获得良好的分离。分析结果表明:深圳大亚湾产地的总合草苔虫中共含有9种已知和1种未知的草苔虫内酯成分。已知成分分别是bryostatin4,5,6(9),7,8,10,16,17,18,其中bryostatin7和17是首次从中国海域总合草苔虫中发现的2种痕量草苔虫内酯。该方法简便、准确、灵敏度高,可以很好的对总合草苔虫原药材及提取物中的草苔虫内酯成分进行定性分析。

关键词：总合草苔虫草苔虫内酯成分分析高效液相色谱质谱法

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总合草苔虫和海燕中化学成分的研究

总合草苔虫和海燕中化学成分的研究

作者：汤华第二军医大学

学位级别：硕士

目的：研究总合草苔虫和海燕中的化学成分研究。方法：利用溶媒萃取和多种现代色谱手段，对总合草苔虫和海燕中的化学成分进行分离，应用现代波谱技术，并结合文献对照，对所分离得到的化合物进行结构鉴定。结果：从从总合草苔虫和海燕... 详细信息

目的：研究总合草苔虫和海燕中的化学成分研究。方法：利用溶媒萃取和多种现代色谱手段，对总合草苔虫和海燕中的化学成分进行分离，应用现代波谱技术，并结合文献对照，对所分离得到的化合物进行结构鉴定。结果：从从总合草苔虫和海燕分离得到28个化合物，鉴定了其中的21个化合物。结论：所得的21个化合物中，有1个新化合物，12个化合物为首次从海燕和草苔虫中分离得到。

关键词：总合草苔虫海燕化学成分

中国南海总合草苔虫抗癌活性成分研究:一个新的大环内酯的分离鉴定(英文)

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第二军医大学学报 2004年第5期25卷 473-478页

作者：林厚文刘皋林易杨华姚新生吴厚铭第二军医大学长征医院药学部上海200003 药学院海洋药物研究中心上海200433 沈阳药科大学沈阳110015 中国科学院上海有机化学研究所上海200032

目的:研究中国南海总合草苔虫中的抗癌活性成分。方法:通过分级萃取和多种硅胶柱层析(Sephadex LH-20凝胶过滤、ODS反相层析和HPLC)追踪分离抗癌活性成分;利用电喷雾离子质谱(ESI-MS)和高分辨(600 MHz)核磁共振二维谱技术鉴定化合物的... 详细信息

目的:研究中国南海总合草苔虫中的抗癌活性成分。方法:通过分级萃取和多种硅胶柱层析(Sephadex LH-20凝胶过滤、ODS反相层析和HPLC)追踪分离抗癌活性成分;利用电喷雾离子质谱(ESI-MS)和高分辨(600 MHz)核磁共振二维谱技术鉴定化合物的结构。结果:分离得到一个新的具有显著抗肿瘤活性的大环内酯bryostatin 19(1)。同时还首次自中国海域的该种苔虫中分离鉴定了5个bryostatins类大环内酯抗癌活性化合物:bryostatin 4,5,6,10,18。Bryostatin 19显示很强的体外抗癌活性,对U937细胞的ED50值为3.2 nmol／L。结论:我国南海总合草苔虫资源丰富,并且含有新结构的抗癌活性草苔虫内酯。本研究结果为今后的新药研制与开发提供了参考。

关键词：总合草苔虫抗肿瘤药草苔虫素抗癌活性成分

总合草苔虫抗癌活性成分Bryostatins的研究概况

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中国海洋药物 1997年第3期16卷 26-31页

作者：林厚文易杨华姚新生釜野德明第二军医大学药学院天然药化教研室上海200433

总合草苔虫Bugula neritina是一种海洋底栖动物,广泛分布于世界各海域。自1968年美国亚利桑那州立大学癌研究所首次发现它的抗癌活性以来,以釜野德明为中心的 Pettit研究小组已从中分离得到18个大环内酯类化合物(bryostatinl～18)。其中... 详细信息

总合草苔虫Bugula neritina是一种海洋底栖动物,广泛分布于世界各海域。自1968年美国亚利桑那州立大学癌研究所首次发现它的抗癌活性以来,以釜野德明为中心的 Pettit研究小组已从中分离得到18个大环内酯类化合物(bryostatinl～18)。其中bryostatin 1和bryostatin 4的抗癌活性最强。经美国国立癌研究院(NCI)的生物鉴定,已投入临床试验,是极有希望的新型抗癌药物。本文对bryostatin类化合物的化学结构、提取分离方法及主要生物活性加以综述。

关键词：抗肿瘤活性 Bryostatin 总合草苔虫海洋

中国南海总合草苔虫抗癌活性成分的质量分析研究

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中国南海总合草苔虫抗癌活性成分的质量分析研究

作者：孙鹏第二军医大学

学位级别：硕士

草苔虫内酯是来源于海洋生物总合草苔虫中的大环内酯类化合物，对多种肿瘤细胞株具有很高的细胞毒作用，草苔虫内酯是一类极具开发前景的抗肿瘤药物。我国东南沿海含有丰富的总合草苔虫资源，大规模的分离研究发现，产于我国的总合草苔... 详细信息

草苔虫内酯是来源于海洋生物总合草苔虫中的大环内酯类化合物，对多种肿瘤细胞株具有很高的细胞毒作用，草苔虫内酯是一类极具开发前景的抗肿瘤药物。我国东南沿海含有丰富的总合草苔虫资源，大规模的分离研究发现，产于我国的总合草苔虫主要含有bryostatin 4，5，8和10，此外尚含有bryostatin 6，16，17，18，19等微量成分，我们以四种主要草苔虫内酯成分为检测对象，进行中国南海不同产地总合草苔虫的质量分析。课题研究主要分为四个部分：第一部分草苔虫内酯提取和样品预处理方法的建立草苔虫内酯的含量占总合草苔虫原料湿重的百万分之一，初提液由于草苔虫内酯的含量很低无法直接进行检测，我们首次建立了一种有效的样品预处理方法。实验中我们首先比较了几种不同提取方法对草苔虫内酯提取效率的影响，结果发现以(1：1)的二氯甲烷-甲醇为提取溶剂，采用超声提取的方法进行提取的效率最高。然后根据TLC追踪鉴别的结果，我们确立了经过硅胶柱和反相ODS柱两步洗脱的样品预处理方法，使初提液达到分析检测的要求。第二部分 HPLC法测定总合草苔虫初提液中的草苔虫内酯通过考察不同色谱柱和流动相条件下对草苔虫内酯的分析结果，建立了以80：20的甲醇-水为流动相，在C18柱为固定相的HPLC分析检测草苔虫内酯成分的方法。方法学考察显示，在该色谱条件下各组份分离良好，峰形和理论塔板数都比较理想，四种草苔虫内酯成分浓度与相应的峰面积呈良好的线性关系。各组份的日内精密度均小于1.69％，日间精密度均小于2.09％。在该色谱条件下两个极性相近成分bryostatin 8和10能够达到基线分离。该方法用于草苔虫原料初提液的分析，很好的避免了杂质干扰，实现了草苔虫内酯的定性定量分析。第三部分不同产地草苔虫中草苔虫内酯成分的含量测定我们采集了中国东南沿海三个不同产地包括海南清澜港、深圳大亚湾和浙江南麂岛的总合草苔虫，按照第一部分的方法进行提取和样品预处理，按照第二部分HPLC方法测定其中的草苔虫内酯含量。结果显示：三个产地的总合草苔虫均含有四种主要的草苔虫内酯成分，其中以深圳大亚湾产地为最佳，各种草苔虫内酯的含量均较高。采用液-质联用的方法测定深圳大亚湾产地总草苔虫 ③ ③ 摘要硕士研究论文③ 内酯提取物，结果发现：除4种主要的成分以外，尚含有另外6种草苔虫内酯③ 成分。＠第四部分超临界流体革取－高效液相色谱法检测草苔虫内酯的含量＠本实验首次采用超临界流体侣FE）法革取总合草苔虫，并采用HPLC测定了i 其中草苔虫内酯的含量。试验中我们采用正交设计的方法对影响革取效率的因g 素即温度、压力、革取体积和改性剂的量进行了考察，确立了一种优化的超临g 界流体革取条件，并且发现改性剂量和革取体积是影响草苔虫内酯革取效率的主要因素。在该优化条件下我们分别对三个产地的总合草苔虫进行超临界流体荤取，采用HPLC法测定了其中草苔虫内酯的含量。结果显示：以深圳大亚湾产地的总合草苔虫含量最高。

关键词：抗肿瘤药物总合草苔虫草苔虫内酯样品预处理高效液相色谱超临界流体萃取

海洋苔藓动物总合草苔虫共附生微生物杀虫活性研究

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海洋苔藓动物总合草苔虫共附生微生物杀虫活性研究

作者：范晓培西北农林科技大学

学位级别：硕士

生存于极端环境中的微生物因其特有的基因类型、生理机能和结构新颖的代谢产物,已成为近年来开发新药品的热点与趋势,但大多趋向于医药研究,鲜有关于农药的研发的报道。因此在之前研究基础上,本文针对极端环境-高盐高压海洋中总和草苔虫... 详细信息

生存于极端环境中的微生物因其特有的基因类型、生理机能和结构新颖的代谢产物,已成为近年来开发新药品的热点与趋势,但大多趋向于医药研究,鲜有关于农药的研发的报道。因此在之前研究基础上,本文针对极端环境-高盐高压海洋中总和草苔虫(Bugulaneritina)所共附生微生物进行分离、杀虫活性筛选,并结合薄层色谱学行为,筛选出高活性且具丰富结构物质类型的杀虫活性菌株,并对活性菌株进行鉴定。主要结果如下:(1)总和草苔虫共附生微生物的分离与初步鉴定从总合草苔虫中,共分离获得共附生微生物91株,其中细菌61株,初步形态学鉴定结果表明其分别为:假单胞菌属(16株)、弧菌属(13株)、假交替单胞菌属(10株)、芽孢杆菌属(1株)、鞘氨醇单胞菌属(4株)、希瓦氏菌属(4株)、交替单胞菌属(6株)和黄曲杆菌属(7株)。真菌25株,分别为青霉菌属(9株)、曲霉菌属(14株)、木霉菌属(2株)。放线菌5株,初步鉴定其为链霉菌属。以上结果表明:总合草苔虫共附生微生物以细菌为主(占67%),其次为真菌(28%)和放线菌(5%)。对总合草苔虫共附生微生物的菌群分布进行了统计,结果表明:总合草苔虫共附生微生物中,细菌以假单胞菌属、假交替单胞菌属和弧菌属为主;真菌以青霉菌属和曲霉菌属为主;放线菌主要为链霉菌属。(2)以卤虫为试虫对共附生微生物进行杀虫活性初步筛选,结果如下:卤虫24h死亡率在70%以上的菌株共有26株,占供试菌株的28.57%。细菌、真菌和放线菌分别有6株、17株和3株,分别占活性菌株数的23.08%、65.38%和11.54%。其中,真菌B-Z-10-23,B-Z-10-35和B-Z-37,B-Z-12-17四株菌的发酵液在30分钟内对卤虫的致死率为100%;菌株B-X-4-8,B-X-4-14,B-F-10-41,B-Z-5-31三株菌的发酵液在3小时内对卤虫的致死率为100%。对具活性的26株菌株进行菌群统计分布分析,结果表明:总合草苔虫共附生微生物24小时对卤虫的毒杀活性主要集中在真菌中的青霉菌属和曲霉菌属.(3)具卤虫毒杀活性共附生微生物杀虫活性进一步筛选以小菜蛾、酢浆草茹叶螨为试虫对26株具卤虫毒杀活性的菌株进行复筛,结果表明:8株菌对小菜蛾具有一定的毒杀活性,其中真菌B-Z-5-31,B-Z-10-35,B-Z-12-17对小菜蛾在72小时内的毒杀活性均大于70%;14株菌对小菜蛾具有一定的拒食活性,其中细菌B-X-4-8和B-X-4-14的拒食活性最好(>70%),其次为真菌 B-Z-5-14,B-Z-5-31,B-Z-10-35,B-F-10-41(拒食活性>30%);21株菌对酢浆草茹叶螨具有一定毒杀活性,其中细菌B-X-12-100、B-X-10-169,真菌B-Z-12-17和放线菌B-F-10-41对酢浆草茹叶螨24h的校正死亡率均大于 60%,株菌 B-X-4-8、B-Z-10-23、B-Z-9-26、B-Z-10-35 和 B-F-7-37 对酢浆草茹叶螨的校正死亡率均大于40%。(4)高活性菌株毒力测试对活性较好菌株B-X-4-8,B-X-4-14、B-Z-5-31和B-Z-12-17等进行薄层色谱分析,结果表明B-Z-5-31、B-Z-12-17两株株菌具有明显的物质结构多样性。进而对菌株B-Z-5-31和B-Z-12-17发酵液粗提物对小菜蛾和酢浆草茹叶螨进行活性毒力测试,结果表明:B-Z-5-31和B-Z-12-17发酵液粗提物对小菜蛾的LC50分别为50.197 mg/mL、4.609 mg/mL;B-Z-12-17发酵液粗提物对酢浆草茹叶螨的LC50为 36.281 mg/mL。(5)活性菌株鉴定对菌株B-Z-5-31和B-Z-12-17分别进行了鉴定,结果表明:菌株B-Z-5-31与Aspergillus versicolor(AY373880)的关系最近,序列相似性99%。据结合形态学和分子学分析结果,将B-Z-5-31菌株定位Aspergillus versicolor(GenBank序列登记号:KF848935);菌株 B-Z-12-17 与 Penicillium polonicum(NR103687)的关系最近,序列相似性99%。据形态学和分子学分析结果,将B-Z-12-17菌株定位Penicillium polonicum(GenBank 序列登记号:KF848936)。

关键词：总合草苔虫共附生微生物杀虫活性筛选小菜蛾形态和分子鉴定

总合草苔虫共附生真菌Aspergillus versicolor BZ-31的杀虫活性成分研究

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总合草苔虫共附生真菌Aspergillus versicolor BZ-31的杀虫活性成...

中国南海总合草苔虫中抗肿瘤活性成分研究——Ⅰ.Bryostatin 4～6的分离鉴定及其体外抗肿瘤活性

第十二届海洋药物学术年会

作者：田向荣高艳清张菁谢娜徐梦菲汤海峰冯俊涛马志卿西北农林科技大学植物保护学院第四军医大学药物研究所

目的对采集深圳大亚湾海域的总合草苔虫共附生真菌Aspergillus versicolor BZ-31进行次生代谢产物及杀虫活性研究。方法采用硅胶柱层析、Sephadex LH-20凝胶柱层析、RP-18反相柱层析及HPLC液相半制备等发法对真菌***-3 1发酵产物进行分... 详细信息

目的对采集深圳大亚湾海域的总合草苔虫共附生真菌Aspergillus versicolor BZ-31进行次生代谢产物及杀虫活性研究。方法采用硅胶柱层析、Sephadex LH-20凝胶柱层析、RP-18反相柱层析及HPLC液相半制备等发法对真菌***-3 1发酵产物进行分离纯化,通过波谱数据分析及文献对照等方法对化合物进行结构鉴定,并以孑孓为供试害虫对对所分离化合物进行杀虫活性测试。结果从该真菌发酵产物中分离得到了2个双苯吡酮类化合物柄曲菌素(1)和6-甲氧基柄曲菌素环(2),4个蒽醌类化合物,分别为Averythrin(3)、Versicolorin(4)、Noraverufanin(5)和Nidurufin(6),1个烯醇类化合物,2(Z)-庚烯-1-醇(7)。结论化合物7为首次从该属真菌中分离获得,其在100ppm浓度下,3h时,对孑孓的校正死亡率为100%,化合物7对孑孓的致死中浓LC为3.03 mg/L。研究结果表明,化合物7可以作为生物源杀虫剂的活性先导化合物加以开发和利用。

关键词：总合草苔虫共附生真菌杂色曲霉杀虫活性

来源： cnki会议评论

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cnki会议

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中国海洋药物 1998年第3期17卷 1-6页

作者：林厚文姚新生易杨华李翔吴厚铭釜野德明第二军医大学药学院天然药物化学教研室上海200433 沈阳药科大学沈阳110015 上海有机化学研究所上海200031 日本神奈川大学理学部

以中国南海海域大量生长的总合草苔虫为原料,将化学分离和活性追踪相结合,经溶媒提取和多种层析方法(Sephadex LH-20,ODS,HPLC等)分离,得到3个活性单体。采用高分辨核磁共振仪(600MHz)测定了它们的DQF-COSY、HMQC、TOCSY、NOESY、ROESY... 详细信息

以中国南海海域大量生长的总合草苔虫为原料,将化学分离和活性追踪相结合,经溶媒提取和多种层析方法(Sephadex LH-20,ODS,HPLC等)分离,得到3个活性单体。采用高分辨核磁共振仪(600MHz)测定了它们的DQF-COSY、HMQC、TOCSY、NOESY、ROESY等二维相关谱。利用波谱解析和化学方法,分别将其鉴定为:bryostatin 4、bryostatin 5、bryostatin 6,并对其~1HNMR和^(13)CNMR数据做了订正。所有化合物均系首次从中国产总合草苔虫中获得,并在体外抗肿瘤活性筛选中都表现出显著的抗肿瘤活性。

关键词：总合草苔虫抗肿瘤活性草苔虫内酯大环内脂