检索结果-南通市图书馆

作者：高丽芳陕西师范大学

学位级别：硕士

大鲵(Andrias davidianus)是我国特有的有尾两栖类,属于国家II级重点保护野生动物。随着大鲵人工繁育技术的突破,大鲵养殖作为一种新兴特种水产养殖业蓬勃发展,但人工养殖采用井水饲养导致大鲵性别比例严重失调,且绝大多数个体为雄鲵。... 详细信息

大鲵(Andrias davidianus)是我国特有的有尾两栖类,属于国家II级重点保护野生动物。随着大鲵人工繁育技术的突破,大鲵养殖作为一种新兴特种水产养殖业蓬勃发展,但人工养殖采用井水饲养导致大鲵性别比例严重失调,且绝大多数个体为雄鲵。为此,本实验室自2011年起连续4年使用外源雌二醇对处于生殖腺分化敏感期的幼鲵进行处理,结果连续4年使得幼鲵全部分化为雌性。由此可见,幼鲵在生殖腺分化期对外界环境变化很敏感。但关于外界环境变化引起幼鲵向不同性别分化的机理及大鲵性别决定的分子机制等一系列重大理论问题,目前仍然摆在课题组的面前。鉴于转录组学研究在性别决定和生殖腺分化方面具有较大的潜力,本文通过对大鲵未分化生殖腺UD、雌性生殖腺F和雄性生殖腺M样本进行高通量转录组测序,旨在筛选出与大鲵性别决定和分化相关的差异表达基因,获得在生殖腺中显著富集的代谢通路,为构建大鲵性别决定和分化的基因调控网络、探讨大鲵的生殖腺分化及性别决定的分子机制等研究工作积累基础实验数据,也为大鲵产业的可持续健康发展及大鲵这个古老物种的种族延续提供理论依据。主要研究结果和结论如下:1.通过IlluminaHiseq2000平台测序,共产出24,623,084,880 nt数据。样本M、F、UD的转录组混合拼接后获得146,292个总Unigene,通过Blast比对,注释到NR、NT、Swiss-prot、KEGG、COG 及 GO 中的 Unigene 序列分别为 57,862、36,773、45,054、42,365、16,960、29,268 条。所有注释上的 Unigene 序列为 62,102 条,占到了总 Unigene 的 42.5%。2.基因表达差异分析后显示,大鲵UD-vs-M共有22,544个差异表达基因,相对于UD,M表达量上调的差异基因数量有7,907个,表达量下调的差异基因数量有14,637个;UD-vs-F共有34,800个差异表达基因,相对于UD,F表达量上调的差异基因有16,751个,表达量下调的差异基因数量有18,049个;M-vs-F共有29,530个差异表达基因,相对于M,F表达量上调的差异基因数量有17,240个,表达量下调的差异基因数量有12,290个。3.通过对差异表达基因进行GO功能和Pathway显著性富集,初步了解大鲵3个生殖腺样本中差异表达基因的主要功能及其参与的主要生化代谢途径和信号转导途径。筛选到了包括类固醇激素生物合成、孕酮诱导卵母细胞成熟通路等在内的与大鲵生殖腺分化相关的通路,并对类固醇激素生物合成通路中疑似Hsdl7b3和Cyp19a基因在UD和M中的差异表达进行了初步分析。4.从差异表达基因的GO功能富集中,筛选到与大鲵性别决定相关的差异表达基因,主要包括Dmrt1、Fgf9、Wnt-4、Foxl2等,并对其进行了功能描述。其中,筛选到与雄性性别决定有关的共同基因有Dmrt1、Fgf9,与雌性性别决定相关的共同基因有Wnt-4,并进一步分析了它们在大鲵3个生殖腺样本中的表达差异。此外,还筛选到一些疑似与大鲵性别决定相关的其他基因,如Dmrt2、Tcf21、Foxl2等。5.从差异表达基因的GO功能富集中,筛选到与大鲵性别分化相关的部分差异表达基因,主要包括Dmrt1、Dmrt2、Fgf8、Wnt-4、Fst、Dmc1等,并对这些基因进行了功能描述。其中,筛选到与雄性性别分化有关的共同基因是Dmrt1,与雌性性别分化相关的共同基因是Wnt-Fsh-R,并分析了 Fsh-R基因在大鲵3个生殖腺样本中的表达差异。此外,还筛选到一些疑似与大鲵性别分化相关的其他基因,如 Dmrt2、Fgf8、Fst、Dmc1 等。

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武昌罗索线虫性别分化差异基因筛选及功能研究

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作者：陶斯莹华中师范大学

学位级别：硕士

昆虫病原索科线虫是一类非常宝贵的昆虫天敌资源,在蔬菜、农林及卫生害虫生物防治方面具有很好的应用前景。该类线虫的性别分化较为特殊,寄生期的营养竞争压力决定其雌、雄性别分化(属环境决定型),然而目前有关动物这一特殊性别分化的... 详细信息

昆虫病原索科线虫是一类非常宝贵的昆虫天敌资源,在蔬菜、农林及卫生害虫生物防治方面具有很好的应用前景。该类线虫的性别分化较为特殊,寄生期的营养竞争压力决定其雌、雄性别分化(属环境决定型),然而目前有关动物这一特殊性别分化的分子机理研究的较少。本课题组前期利用秀丽线虫(Caenorhabdiris elegans)相关研究背景,对蚊类病原武昌罗索线虫(Romanomermis wuchangennsis)的寄生后期幼虫(J4)和成虫进行了转录组测序分析并筛选到部分相关性别分化基因,但并未对性别分化关键的寄生期幼虫(J3)进行转录组测序分析,其相关性别分化基因的功能也缺乏更深入的研究。因此,进一步探讨影响武昌罗索线虫性别分化基因及其功能具有重要的理论和现实意义。本研究首先观察了武昌罗索线虫寄生期幼虫(J3)在宿主致倦库蚊孑孓体内寄生的系列形态变化,探明了线虫与宿主感染比例及寄生后期幼虫脱出时间等因素对该线虫雌、雄性别分化或比例的影响。然后取材雌、雄武昌罗索线虫不同寄生期幼虫(J3)样本进行转录组测序。最后依据秀丽线虫性别决定通路,筛选性别相关基因,采用荧光定量PCR、RNA干扰及原位杂交等技术对部分基因进行功能研究,探究基因在线虫不同发育期的表达量及干扰后对其性别分化的影响。其结果如下。1.寄生期幼虫形态及生物学观察为了解武昌罗索线虫寄生期幼虫及其宿主的形态变化,本研究利用体视显微镜对感染后的孑孓进行观察,发现从线虫寄生的第5天开始,孑孓体内胸部缠绕有寄生期幼虫;解剖孑孓发现:线虫在寄生3天后其体长成倍增长,第5天的寄生期幼虫体内滋养物体开始大量堆积。线虫完成寄生期的生长发育后从宿主体内脱出并导致孑孓死亡,脱出的寄生后期幼虫外形已出现明显的性别特征,能明显观察到雌性个体较雄性的大,在体视显微镜下能清楚看到雌性个体身体中前部的阴道口。对线虫寄生时间和感染比例进行研究结果表明:在26 ℃培养条件下,最早在寄生第6天脱出的线虫均为个体较小的雄性寄生后期幼虫,寄生第8天后脱出的均为体型较大的雌性寄生后期幼虫。感染比例(线虫:孑孓)为1:1时脱出的线虫全为雌虫,感染比例为40:1时脱出的线虫全部发育为雄虫。即:宿主体内寄生的线虫越多,每条线虫所能获得的营养越少,越有可能发育为雄虫;相反则发育成雌虫。2.寄生期幼虫的转录组测序通过对所选用寄生3d、4d、5d雌雄幼虫分别进行转录组测序并结合本课题组前期转录组数据分析结果,同时参照模式线虫的性别决定通路筛选出fox-1、tra-2、laf1、tra-3、fem-1、tra-1、mab-3、mab-7、mab-5、gld-1、egl-4 等 11 个与性别分化相关的基因。课题组前期已对laf-1、mab-3、tra-2等基因进行了初步研究,在此基础上,本研究选取以下4个基因fem-1、fox-1、mab-7、tra-1进行更进一步的功能分析。3.武昌罗索线虫性别分化候选基因的功能研究(1)Rwufem-1、Rwufox-1、Rwumab-7和Rwutra-1 基因序列分析利用生物信息学构建N-J进化树进行序列多重比对,结果显示Rwufem-1、Rwufox-1、Rwumab-7和Rwutra-1 个基因均与中华卵索线虫(Ovomermis sinensis)的聚为同一枝,亲缘关系最近。(2)Rwufem-1、Rwufox-1、Rwumab-7和Rwumab-1的荧光定量 PCR荧光定量结果显示:①Rwufem-1基因在3天寄生期幼虫及雌、雄成虫相对表达量出现极显著差异(p基因在3天寄生期幼虫、1天寄生后期雌雄幼虫相对表达量出现显著差异(p基因在3天、5天寄生期幼虫,1天寄生后期雌雄幼虫相对表达量出现极显著差异(p基因在3天寄生期雌、雄幼虫及成虫相对表达量出现极显著差异(p基因表达量出现显著差异(p基因后,脱出线虫的雌、雄性比与对照组相比明显增加且差异极显著(P基因被干扰后幼线虫朝向雌性化发育;②Rwufox-1基因干扰后,线虫雌、雄性比减小且差异极显著(p基因被干扰后幼线虫偏向雄性化发育;③Rwumab-7基因干扰后实验组与对照组相比没有差异(p>0.05),推测可能与dsRNA长度和位置不合适等因素有关;④干扰Rwutra-1基因后

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武昌罗索线虫营养决定性别分化关键期及相关基因的功能分析

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作者：张辉华中师范大学

学位级别：硕士

武昌罗索线虫（Romanomermis wuchangensis）是一种昆虫病原索科线虫,可主动侵染多种库蚊和伊蚊的幼虫（孑孓）,寄生率即等于害虫的死亡率,生物防治潜力极大。在武昌罗索线虫整个生活史中,营养均来源于其寄生期吸取宿主血淋巴微环境中... 详细信息

武昌罗索线虫（Romanomermis wuchangensis）是一种昆虫病原索科线虫,可主动侵染多种库蚊和伊蚊的幼虫（孑孓）,寄生率即等于害虫的死亡率,生物防治潜力极大。在武昌罗索线虫整个生活史中,营养均来源于其寄生期吸取宿主血淋巴微环境中的营养物质,它的另一个特点是性别分化为营养决定型,即每一宿主体内寄生的线虫越少,每条线虫在宿主体内血淋巴中吸取的营养越多,越有可能发育为雌虫,反之则为雄虫。为探究昆虫病原索科线虫营养决定性别分化的分子机理,本课题组前期通过转录组测序并以秀丽线虫（Caenorhabtditis elegans）为背景筛选出fox-1、tra-2、laf1、fem-1、tra-1、mab-3、mab-7、mab-5、gld-1、egl-4 等10个与性别分化和性腺发育相关的基因,并对其中的fox-1、tra-2、laf1、fem-1、tra-1、mab-3、mab-7等基因的功能进行了初步研究,但对mab-5、gld-1、egl-4基因在武昌罗索线虫性别分化过程中的作用仍认识不足。本文通过观察武昌罗索线虫寄生期的生长状况及停止喂食孑孓以探讨其营养决定性别分化的关键期,利用qRT-PCR和RNAi等技术探索了 mab-5、gld-1、egl-4基因在该线虫性别分化中的作用,其主要结果如下:1.本文比较了埃及伊蚊和致倦库蚊不同宿主对武昌罗索线虫雌、雄性比的影响,结果显示:宿主的种类并不影响寄生后期线虫的雌雄性比,当感染比例为1:1时（孑孓:线虫）,线虫全部发育为雌虫,感染比例大于或等于1:10,线虫全部发育为雄虫。当线虫的感染强度为1时,全部发育为雌虫;感染强度大于或等于4,全部发育为雄虫;随着线虫感染强度的增加,线虫的个体逐渐变小。对武昌罗索线虫寄生期生长发育的观察发现,无论是雌虫还是雄虫,在整个寄生期（1-7天）,线虫的体宽逐天增加,而线虫的体长在寄生期1-2天没有显著性变化,直到寄生期的第3天才开始出现极显著性变化（p＜0.001）。说明线虫进入宿主体内的第三天才开始快速发育,到寄生期的第4-5天线虫体长加倍增长,雄虫第6天、雌虫第7天增长变缓。另外,本研究还从线虫寄生的第3天起禁止喂食于宿主,宿主禁食1天后,与对照组相比,实验组在感染强度为1时,雌线虫的比例由100%下降了80.0±4.2%,感染强度为2、3时雌线虫的比例分别由40.0%±2.2%、22.2± 1.3%降为0,即全部发育为雄性。宿主禁喂2天或3天后,感染强度为1的线虫也全部发育成雄性。随着禁止喂食宿主时间的延长,线虫个体也逐渐变小。***-PCR结果显示:mab-5基因在雌、雄线虫寄生期第4天（p＜0.01）、第5天（p＜0.01）以及寄生后期第1天（p＜0.01）、第3天（p＜0.01）、第5天（p＜0.001）的表达量均出现显著性或极显著性差异;gld-1基因在雌、雄线虫寄生期第4天（p＜0.001）、寄生后期第5天（p＜0.01）的表达量出现极显著性或显著性差异;egl-4基因在雌、雄线虫寄生期第5天（p＜0.001）、成虫期（p＜0.01）的表达量出现极显著或显著性差异;以上3个基因均在雌虫的寄生期高表达。***结果表明:干扰mab-5、gld-1、egl-4基因后并不会引起武昌罗索线虫雌、雄性比的变化,推测这3个基因在线虫发育过程中并不决定其性别分化,可能参与线虫的性腺发育。干扰gld-1基因的表达后fox-1、laf1、fem-1、egl-4表达量均无显著变化,mab-3、mab-5的表达量出现显著性上调的趋势,tra-2、tra-1、mab-7、的表达量出现显著性下调的趋势,说明gld-1可能处在tra-2、tra-1、mab-3、mab-7、mab、-5基因的上游位置;干扰mab-5基因的表达后不会引起fox-1、tra-2、fem-1、mab-3、egl-4表达量的变化,但是显著性上调laf-1的表达,显著性下调tra-1、mab-7、ggld-1,推测mab-5可能处于laf1、tra-1、mab-7、gld-1的上游;但干扰egl-4之后不会影响laf1、tra-2基因的表达,会使tra-1、mab-3、mab-7、mab-5出现显著性上调、fox-1、fem-1、gld-1出现显著性下调的趋势,说明egl-4可能处于fox-1、fem-1、tra-1、mab-3、mab-7、mab-5、gld-1的上游。为进一步验证这一推测,本实验选择了促进线虫雌性分化的fox-1基因对以上结果进行反证,将fox-1基因干扰后检测其它性别分化基因的表达,结果发现当fox-1下调表达后,laf1、tra-2、fem-1、mab-5、gld-1显著性上调,tra-1、mab-3、mab-7显著性下调,说明fox-1基因可能

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栉孔扇贝（Chlamys farreri）性别分化相关基因的筛选以及两个相关基因的表达分析

栉孔扇贝（Chlamys farreri）性别分化相关基因的筛选以及两个相...

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作者：秦贞奎中国海洋大学

学位级别：硕士

性别分化是发育生物学研究的重要内容之一,性别分化相关基因的研究在脊椎动物特别是哺乳动物中较为深入,目前已经发现了Sry、Sox9、Wnt4等诸多与性别决定和分化有关的基因;但在无脊椎动物特别是海洋贝类中相关的研究尚处于起步阶段。本... 详细信息

性别分化是发育生物学研究的重要内容之一,性别分化相关基因的研究在脊椎动物特别是哺乳动物中较为深入,目前已经发现了Sry、Sox9、Wnt4等诸多与性别决定和分化有关的基因;但在无脊椎动物特别是海洋贝类中相关的研究尚处于起步阶段。本研究选取我国重要的水产经济贝类——栉孔扇贝（Chlamys farreri）为研究对象,采用Solexa测序技术对其增殖期精卵巢的差异表达谱进行了分析,获得了295262个在精卵巢中差异表达的Tag,其中1354个Tag可以在GenBank数据库中得以注释。选择其中的5条核酸序列进行了半定量RT-PCR验证,发现solexa测序结果与半定量结果的一致率为40%。采用RACE技术对其中的CL3256序列进行全长cDNA扩增,序列比对初步判定其为核糖体蛋白24基因,定名为Cf-rlp24。该基因全长cDNA为965 bp,开放阅读框为525 bp,编码175个氨基酸,该推测蛋白在不同物种之间同源性很高。Real-time PCR检测Cf-rlp24基因在精、卵巢之间以及不同发育时期的精巢中均存在表达差异,其中生长期和成熟期精巢Cf-rlp24基因的表达量显著高于相应时期的卵巢,分别高出2.200±0.446倍和6.036±1.283倍;在精巢的发育过程中,该基因的表达呈逐渐升高的态势,至成熟期时达最高值,而后迅速回落;但在卵巢的发育过程中,始终处于较低的表达水平,且未见该基因的显著性表达差异。我们得出,Cf-rlp24基因参与栉孔扇贝性腺的发育,且在精巢发育中的作用大于卵巢。本研究我们还采用Real-time PCR技术,分析了栉孔扇贝卵黄蛋白原基因（Cf-vtg）在两性性腺发育周期以及肝胰腺中的表达,得出该基因主要在卵巢中表达,且其表达量随着卵巢的发育成熟而逐渐升高,生长期和成熟期Cf-vtg基因的表达量分别为增殖期的1.917±0.035和2.570±0.252倍。休止期卵巢该基因几乎没有表达。进一步我们发现Cf-vtg基因在肝胰腺中也有少量的表达,其表达量为增殖期卵巢中的0.045±0.009。该基因在精巢中几乎没有表达。进一步我们采用注射的方法,检测了17β-E2对扇贝Cf-vtg基因的诱导表达,real-time PCR结果显示,17β-E2可明显诱导Cf-vtg基因的表达。因此推测17β-E2可以促进栉孔扇贝扇贝Cf-VTG的合成。

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基于脑转录组数据筛选尼罗罗非鱼基因-温度性别决定相关基因的研究

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作者：梅园山东农业大学

学位级别：硕士

脊椎动物的性别决定类型可分为遗传性别决定(GSD)、环境性别决定(ESD)、遗传与环境性别决定(GSD+ESD)三大类。在各种环境因素中,温度对性别决定的影响因素最大所以称为温度性别决定(TSD)。有些鱼类的性别决定受遗传和温度的双重调控,被... 详细信息

脊椎动物的性别决定类型可分为遗传性别决定(GSD)、环境性别决定(ESD)、遗传与环境性别决定(GSD+ESD)三大类。在各种环境因素中,温度对性别决定的影响因素最大所以称为温度性别决定(TSD)。有些鱼类的性别决定受遗传和温度的双重调控,被称为遗传性别决定和温度性别决定的混合型(GSD+TSD),如尼罗罗非鱼就是一种GSD+TSD鱼类。前人已发现高温能影响性腺中许多雌性性别分化相关基因如Cyp19a1a和雄性性别分化相关基因如Dmrt1等的表达,然而,很少有研究在热敏期(TSP)期间进行温度处理对脑中的相关基因表达的影响。因此,本试验中首次利用尼罗罗非鱼脑组织进行转录组测序来揭示在性别分化关键期尼罗罗非鱼高温性逆转过程中脑中的基因表达变化。本研究建立了三个全雌家系(F1-F3),三个全雌家系高温处理后的雄性率分别为65%(F1)、74%(F2)和87%(F3)。从上述3个家系中挑选高温处理后雄性率最高的F3家系,在21 dpf时,取F3家系中对照雌鱼组(FC)和高温处理组(FT)的脑组织用于转录组分析。同时建立了1个正常家系,在21dpf时,采用分子标记技术鉴定幼鱼的雌雄,选取雄性个体的脑组织作为对照雄鱼组(MC)用于转录组分析。高通量分析结果显示FC、FT和MC三组共获得351,146,876个clean reads。三组之间两两比较,结果显示:在FC/FT、FC/MC和MC/FT比较组中分别获得的差异表达基因(DEG)数目为:105、3164和4666个,其中FC/FT组中上调的DEG有87个,下调的DEG有18个;FC/MC组中上调的DEG有1123个,下调的DEG有2041个;MC/FT组中上调的DEG有3354个,下调的DEG有1312个。Venn图显示FC/FT和FC/MC、FC/FT和MC/FT、FC/MC和MC/FT重叠的DEG数目分别为31、88和2534个。此外,本试验通过GO、KEGG和趋势分析对各比较组的DEG进行进一步分析与筛选。其中GO分析表明DEG主要涉及参与了单生物过程(Single-organism Process)、代谢过程(Metabolic Process)、细胞过程(Cellular Process)和结合(Binding)等生物学功能。大多数的DEG主要富集在细胞粘附因子(Cell adhesion molecules)、代谢通路(Metabolic pathways)、抗生素的生物合成(Biosynthesis of antibiotics)等生物学通路中。通过趋势分析共筛选出16个DEG,其mRNA表达水平在高温处理后表现出显著的下调或上调,并达到与MC相似的水平。在这16个DEG中,LOC100699848(lysine specific demethylase 6A)和Jarid2都含有JmjC结构域,表明JmjC结构域可能在尼罗罗非鱼进行温度处理的过程中起着重要的作用。最后,通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)对9个差异表达基因进行验证。本研究结果将为研究鱼类GSD+TSD的分子机制提供重要的线索。

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营养对中华卵索线虫性比的影响

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作者：冯旭飞华中师范大学

学位级别：硕士

鳞翅目害虫如棉铃虫(Helicoverpa armigera)等危害多种作物,造成严重经济损失。中华卵索线虫(Ovomermissinensis)感染性的2期幼虫(J2)可主动寻找并寄生于棉铃虫血淋巴,对宿主致死率高,在害虫生物防治中具有广阔的应用前景。然而,该线虫... 详细信息

鳞翅目害虫如棉铃虫(Helicoverpa armigera)等危害多种作物,造成严重经济损失。中华卵索线虫(Ovomermissinensis)感染性的2期幼虫(J2)可主动寻找并寄生于棉铃虫血淋巴,对宿主致死率高,在害虫生物防治中具有广阔的应用前景。然而,该线虫在自然界中的数量与分布有限,阻碍了其对棉铃虫等害虫的防治效果。因此,大量培养该种自然天敌迫在眉睫。其中,线虫的性比可以调节其种群繁殖的数量。然而迄今,有关中华卵索线虫性别分化的机理目前还知之甚少,故深入探索影响线虫性比的因素及性别分化相关基因具有重要意义,不仅可以为昆虫病原索科线虫性别分化的机理研究奠定基础,而且还可为该种天敌线虫大量培养及释放策略的研究提供参数。为初步了解线虫性别决定和性别分化发生的主要发育阶段,本研究首先利用体式显微镜观察了线虫(从卵到性成熟的整个生活史)发育过程中的形态结构特点。结果发现,从卵发育到具有感染性的2期幼虫再到寄生期第4天,没有出现明显的雌雄性别特征。但是,从棉铃虫体内脱出的寄生后期幼虫出现了雌雄个体大小不同的性别特征,经蜕皮进一步发育为成虫,可以明显观察到雌虫的阴道和阴道口、雄虫的交合刺等不同性别特征。据此,初步推测该线虫的性别决定和性别分化发生于寄生阶段。为明确影响线虫性比的主要生理学参数(营养供给与获取),本研究进一步分析了感染强度、宿主大小、宿主龄期、宿主营养供给、线虫营养获取等参数。结果发现:(1)感染强度≤5时(4龄期棉铃虫幼虫,体长196 ±6.25 mm、体重114.70 士9.43 mg)无雄线虫脱出;感染强度从10增大到40以上时,雄虫的比例由29.2±3.2%增大至100%,即雄线虫比例随着感染强度而增大;(2)宿主个体大小增大后,雄线虫的比例由52.5±4.1%降到15.2± 1.6%;(3)宿主龄期由3龄增大到5龄,雄线虫比例由52.0 ±4.3%降低到29.2 ±3.2%;(4)雄线虫寄生时间为(7.5 ±0.2天),显著少于雌虫(10.7 ±0.5天);(5)限制宿主取食后,以上影响因素(感染强度、宿主大小、宿主龄期和寄生时间)对线虫性比的影响全部被改变;(6)反向的,从寄生期线虫主要消化酶(胰蛋白酶以及淀粉酶)活性发现,线虫摄取的营养越少越趋于发育为雄虫。这些结果表明,线虫性比与宿主的营养供给与线虫营养获取相关。基于以上结果,为进一步确定影响其性比的基因,本研究首先对中华卵索雌雄线虫进行了转录组测序(因无基因组),参考模式线虫(Caenorhabditiselegans)性别决定通路进行blast筛选,得到性别分化同源基因:fox-1、lafl、tra-3、tra-3、fem-1、tra-1、mab-3以及mab-7。进一步,通过比对分析寄生于正常取食宿主与取食限制宿主(4h/天)以上基因的表达,结果发现:(1)与正常取食宿主相比,寄生于取食限制宿主3天时的线虫tra-3、fem-1和mab-3表达上调,而mab-7表达下调,表明tra-3基因为上游表达基因,其表达上调促进fem-1表达,最终mab-和mab-7表达启动,从而发育为雄虫;(2)寄生5天时,取食限制组线虫mab-3基因上调,而laf1和mab-7却显著下调,即此时laf-1基因启动表达,进而促进mab-3表达上调,以及mab-7下调,导致雄虫比例增大;(3)寄生7天时,取食限制组线虫的laf-1和mab-7下调,mab-3表达己无差异,表明雄虫性别形成已经完成,而mab-7下调可能与雄性性特征的形成相关;(4)寄生后期线虫中,fox-1和tra-1的mRNA表达量有显著性差异,说明fox-1和lra-1基因在中华卵索线虫性别分化信号转导途径中处于下游,可能与雌雄线虫的生殖腺发育相关;(5)正常取食组和取食限制组tra-2基因表达在各个时期均无显著性差异,可能tra-2基因不参与该线虫的性别决定。综上,本研究首先通过对线虫形态结构进行观察,推测线虫性别分化发生于寄生期;进一步通过改变营养得出其性比与宿主的营养供给和线虫的营养获取相关;其次通过转录组测序筛选到与性别分化相关的8个候选基因;最后通过不同营养状况下性别分化基因的时空表达差异确定中华卵索线虫营养影响性别分化的基因。这些结果表明,某些环境因素(营养)影响了线虫性别分化基因的表达,最终对其性别决定产生了影响。本研究不仅为昆虫病原索科线虫性别分化的机理研究奠定基础,而且为大量培养该种自然天敌、成功繁殖并释放提供了科学参数。

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