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包装饮用水中铜绿假单胞菌快速检测试剂盒的研制与评价

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微生物学通报 2020年第6期47卷 1982-1992页

作者：周杨万强蔡芷荷卢勉飞曲晓莹吴清平李健顺广东环凯微生物科技有限公司广东广州510663 广东省微生物研究所广东广州510070 广东环凯生物科技有限公司广东肇庆526238

【背景】在包装饮用水企业生产活动中,铜绿假单胞菌是被重点监测的致病菌之一。随着分子检测相关技术的不断发展,研制用于包装饮用水中铜绿假单胞菌简便、高效的快速检测产品至关重要。【目的】评价基于环介导恒温扩增(loop-mediated is... 详细信息

【背景】在包装饮用水企业生产活动中,铜绿假单胞菌是被重点监测的致病菌之一。随着分子检测相关技术的不断发展,研制用于包装饮用水中铜绿假单胞菌简便、高效的快速检测产品至关重要。【目的】评价基于环介导恒温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)技术的铜绿假单胞菌快速检测试剂盒在包装饮用水铜绿假单胞菌检测中的实效性。【方法】优化该LAMP反应体系,反应试剂采用冻干工艺,确定试剂盒组成,并评价其特异性、灵敏度、重复性、保质期等性能指标。【结果】铜绿假单胞菌标准菌株和分离菌株均检测为阳性,非铜绿假单胞菌标准菌株和分离菌株均检测为阴性,未发现有交叉反应;试剂盒最低检验限为18 CFU/mL;该试剂盒的特异性、灵敏度及准确度与传统方法相比具有较高的一致性;批内、批间检测重复率均为100%,可在4℃保存12个月以上,并且可在42℃环境中储存72 h以上。【结论】该试剂盒性能好,检测结果稳定、可靠,适用于包装饮用水中铜绿假单胞菌的快速检测。

关键词：铜绿假单胞菌环介导恒温扩增技术快速检测试剂盒性能评价

基于环介导恒温扩增技术的大肠杆菌O157:H7快速检测试剂盒的评价

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微生物学通报 2017年第8期44卷 1996-2004页

作者：周杨万强蔡芷荷卢勉飞吴清平李健顺广东环凯微生物科技有限公司广东广州510663 广东环凯生物科技有限公司广东肇庆526238 广东省微生物研究所广东广州510070

【目的】评价基于环介导恒温扩增技术(LAMP)的大肠杆菌O157:H7(Escherichia coli O157:H7)快速检测试剂盒的实效性。【方法】测定快速检测试剂盒的特异性、灵敏度、重复性、保质期以及运输稳定性,并与传统方法对比检测实际样品。【结果... 详细信息

【目的】评价基于环介导恒温扩增技术(LAMP)的大肠杆菌O157:H7(Escherichia coli O157:H7)快速检测试剂盒的实效性。【方法】测定快速检测试剂盒的特异性、灵敏度、重复性、保质期以及运输稳定性,并与传统方法对比检测实际样品。【结果】大肠杆菌O157:H7标准菌株样品均检测为阳性,非大肠杆菌O157:H7标准菌株样品均检测为阴性,未发现有交叉反应;试剂盒最低检验限为29 CFU;该试剂盒的特异性、灵敏度及准确度与传统方法相比具有较高的一致性;试剂盒对高菌量目标菌和阴性菌样品的检测重复率均为100%,对低菌量目标菌样品的批间检测重复率为94%。试剂盒可在4°C保存9个月以上,并且可进行变温储存72 h以上。【结论】该试剂盒特异性好,灵敏度高,重复性好,储存方便,检测结果稳定、可靠,适用于对食品中大肠杆菌O157:H7的检测需求。

关键词：大肠杆菌O157 H7 环介导等温扩增技术快速检测试剂盒评价

H9亚型禽流感病毒免疫层析快速检测试剂盒的研制及应用

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中国兽医学报 2009年第5期29卷 584-587,593页

作者：彭伏虎张殊慧王政宋念华方羽张文通张展英毕丁仁华中农业大学动物医学院湖北武汉430070 湖北省动物疫病预防控制中心湖北武汉430064

利用胶体金免疫层析技术,在建立H9亚型禽流感病毒免疫层析检测方法的基础上组装成试剂盒,试剂盒由试纸卡、稀释液、样品管、塑料吸管、一次性手套及说明书组成。对试剂盒的特异性、敏感性、保存期和重复性等进行了测定。结果表明,试剂... 详细信息

利用胶体金免疫层析技术,在建立H9亚型禽流感病毒免疫层析检测方法的基础上组装成试剂盒,试剂盒由试纸卡、稀释液、样品管、塑料吸管、一次性手套及说明书组成。对试剂盒的特异性、敏感性、保存期和重复性等进行了测定。结果表明,试剂盒在室温可以保存6个月,4℃可以保存12个月;与HA试验相比特异性强、灵敏度高、重复性好,操作简单、方便、快捷,能在10min内准确检测出样品中是否含有H9亚型禽流感病毒。先后制备了5批试剂盒,对武汉市及周边地区的鸡场共抽检498份样品,经病毒分离鉴定准确率达到100%。

关键词： H9亚型禽流感病毒免疫层析快速检测试剂盒

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食品中柠檬酸快速检测试剂盒的研制

中国酿造 2015年第3期34卷 111-114页

作者：常平平郝艳红周遵武万宇平刘薇钱瑞沈国栋北京勤邦生物技术有限公司北京102206 山东春雪食品有限公司山东莱阳265200

建立了一种酶法检测食品中柠檬酸含量的快速检测方法.将6UL-苹果酸脱氢酶、9.13 U L-乳酸脱氢酶、0.5 mg烟酰胺腺嘌呤二核苷酸、2 mg硫酸镁、3.783 mg海藻糖、5mg聚乙二醇6000在0.2 mL 0.082 g/mL双甘肽质量浓度下-60℃冷冻5h,室温条件... 详细信息

建立了一种酶法检测食品中柠檬酸含量的快速检测方法.将6UL-苹果酸脱氢酶、9.13 U L-乳酸脱氢酶、0.5 mg烟酰胺腺嘌呤二核苷酸、2 mg硫酸镁、3.783 mg海藻糖、5mg聚乙二醇6000在0.2 mL 0.082 g/mL双甘肽质量浓度下-60℃冷冻5h,室温条件下抽真空18h得到试剂Ⅰ,0.468U柠檬酸裂解酶在0.2 mL水体系冷冻干燥得到试剂Ⅱ.结果表明,该方法标准曲线线性关系良好,相关系数R2=0.995,线性范围1～80 μg/L;灵敏度0.25 mg/L;检测限0.5 mg/L;各样品回收率均在90％～110％.该试剂盒方法可以在20 min实现样品中柠檬酸的快速检测,方法灵敏度高、特异性高、快速简便,适合于食品生产企业对食品中的柠檬酸进行快速检测及对食品的质量和品质进行评价.

关键词：食品柠檬酸快速检测试剂盒烟酰胺腺嘌呤二核苷酸

当前常用结核抗体快速检测试剂盒临床使用的对比观察

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检验医学 2004年第3期19卷 180-180,184页

作者：贾震王晓燕周口市结核病防治所河南周口466000

结核抗体检测应用于临床以来,在结核病的诊断与鉴别诊断中起到了重要作用.本研究选用当前使用较为广泛的4种结核抗体快速检测试剂盒进行比较观察.

关键词：结核抗体快速检测试剂盒结核病生物技术

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苏丹红Ⅰ～Ⅳ现场快速检测试剂盒的研制

黑龙江畜牧兽医 2013年第3期 69-70页

作者：常平平万宇平陶光灿刘天琪邵小雪北京勤邦生物技术有限公司北京102206

苏丹红是一种人工合成的偶氮类染色剂，有Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ号。苏丹红不是一种食品添加剂，但是由于其着色效果好、颜色比较鲜艳，被许多食品厂商作为食品添加剂加入食品中来增加食品的颜色。国际癌症研究机构将苏丹红归为三类致癌物质，... 详细信息

苏丹红是一种人工合成的偶氮类染色剂，有Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ号。苏丹红不是一种食品添加剂，但是由于其着色效果好、颜色比较鲜艳，被许多食品厂商作为食品添加剂加入食品中来增加食品的颜色。国际癌症研究机构将苏丹红归为三类致癌物质，但苏丹红的代谢产物却属于二级致癌物质。还有研究表明，苏丹红能诱发癌细胞的产生，可能会使肝部DNA结构发生变化，导致肝部病症等，严重危害人体健康。

关键词：快速检测试剂盒苏丹红食品添加剂致癌物质 DNA结构人工合成着色效果研究机构

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β-内酰胺酶快速检测试剂盒的研究

β-内酰胺酶快速检测试剂盒的研究

作者：张鑫潇河南工业大学

学位级别：硕士

β-内酰胺酶俗称生鲜牛乳抗生素分解剂，又名解抗剂或金玉兰酶制剂，它是由革兰氏阳性细菌产生和分泌的，可选择性分解牛奶中残留的β-内酰胺类抗生素。β-内酰胺酶是违法添加的非食用物质，它的使用掩盖了牛奶中抗生素的残留。β-内酰... 详细信息

β-内酰胺酶俗称生鲜牛乳抗生素分解剂，又名解抗剂或金玉兰酶制剂，它是由革兰氏阳性细菌产生和分泌的，可选择性分解牛奶中残留的β-内酰胺类抗生素。β-内酰胺酶是违法添加的非食用物质，它的使用掩盖了牛奶中抗生素的残留。β-内酰胺酶分解青霉素钾的分解产物是青霉噻唑酸，青霉噻唑酸具有还原性和酸性，运用碘量法、酸度法、高效液相色谱法、分光光度法等方法测定样品中青霉噻唑酸的含量，间接检测牛奶中的β-内酰胺酶。 1.利用SDS-PAGE电泳法对β-内酰胺酶标准品和市场上的生鲜牛乳抗生素分解剂进行对比研究，确定生鲜牛乳抗生素分解液的成分为β-内酰胺酶。使用碘量法分别检测β-内酰胺酶标准品和生鲜牛乳抗生素分解剂的酶活度。测定结果表明β-内酰胺酶标准品的酶活度为24.552万U/mL，生鲜牛乳抗生素分解剂的酶活度为23.808万U/mL。利用液质联用色谱仪对青霉素钾酶解产物进行分析,质谱图中青霉素钾的特征峰m/z373不明显，未出现m/z333和m/z289峰，青霉噻唑酸特征峰m/z307.0出峰明显，表明青霉素钾在β-内酰胺酶作用下基本完全酶解，酶解后的主要产物是青霉素噻唑酸。用pH为12～14的氢氧化钠溶液把青霉素钾完全水解成青霉噻唑酸，利用高效液相色谱法测定青霉素钾及青霉噻唑酸的出峰时间，并研究青霉噻唑酸和β-内酰胺酶浓度的相关性。随着β-内酰胺酶添加量的增加，青霉素噻唑酸的峰值逐渐增大，R为0.9331，线性关系良好，青霉噻唑酸的含量与β-内酰胺酶的含量呈正相关。 2.青霉噻唑酸可与碘离子反应显蓝色，利用直接碘量法对β-内酰胺酶进行定性测定，间接碘量法对β-内酰胺酶定量测定，R为0.9895，相关性良好，最低检出限为15U/mL;青霉噻唑酸具有酸性，利用β-内酰胺酶对青霉素钾进行酶解，对反应温度、底物浓度、反应时间等反应条件进行优化，利用pH计测量牛奶pH值变化，建立pH值与β-内酰胺酶相关性曲线，R为0.9917，相关性良好，实际最低检出限为12.3U/mL。 3.青霉噻唑酸具有还原性，可以将二价铜还原为一价铜，而亚铜试剂2,2’-联喹啉与一价铜离子偶联生成紫红色络合物，利用可见分光光度计测定络合物，在547nm处有最大吸收峰，且颜色随着β-内酰胺酶浓度的增大而加深。利用可见分光光度计扫描反应产物紫红色络合物，可知络合物在547nm处有最大吸收峰，且其颜色深浅与β-内酰胺酶浓度大小成正相关。最优反应条件为显色时间为15min，底物浓度50U/mL，0.05%2,2’-联喹啉添加量为2.4mL，20mmol/LCuSO添加量为0.2mL，样液添加量为0.1mL。在最佳优化条件下建立β-内酰胺酶检测梯度，建立线性关系，R为0.9936，相关性良好，理论最低检出限为3.44U/mL，实际最低检出限为4U/mL。做抗干扰性试验，可知具有还原性的抗坏血酸试剂不影响试验显色效果。 4.在可见分光光度法试验基础上，设计β-内酰胺酶快速检测试剂盒，试剂盒由试剂、比色管和标准比色卡三部分组成。选择0～200U/mL范围内的8个样品，在最优条件反应条件下制作β-内酰胺酶标准比色卡。试剂包括A液为13%的TCA，B液为0.05%2,2’-联喹啉乙醇溶液，C液为20mmol/L的0.1mlCuSO，检测样品时选择最优条件，即2,2’-联喹啉添加量为2.4mL，20mmol/LCuSO添加量为0.2mL，样液添加量为0.1mL，置入比色管中，混合均匀，显色反应15min后，将试剂颜色与β-内酰胺酶标准比色卡比照，确定样品中β-内酰胺酶浓度。将试剂盒检测法与碘量法、酸度法、高效液相色谱法及可见分光光度法对比，可知，试剂盒法具有检出限低、操作简便、经济实用等优点。

关键词：乳制品 β-内酰胺酶快速检测试剂盒

副溶血性弧菌恒温荧光法检测及快速检测试剂盒的初步应用

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上海预防医学 2018年第5期30卷 386-391页

作者：杨家齐田明胜朱智殷荣永钟少水唐皓轩邵雪阳倪培恩王大鹏张文敏石育娇戚成冯元琦何更生复旦大学公共卫生学院上海200032 上海食品药品监督管理局上海200021 上海捷易生物科技有限公司上海201210 上海交通大学农业与生物学院上海200240 上海理工大学医疗器械与食品学院上海200093 广州迪澳生物科技有限公司广州510663

【目的】采用恒温荧光PCR方法及快速检测试剂盒对副溶血弧菌的扩增结果进行实时检测,并对其检测限、灵敏度及特异度等进行测试。【方法】通过三个实验阶段(实验室自配阳性样品测试阶段、腹泻病人模拟生物样本测试阶段、市场食品样测试阶... 详细信息

【目的】采用恒温荧光PCR方法及快速检测试剂盒对副溶血弧菌的扩增结果进行实时检测,并对其检测限、灵敏度及特异度等进行测试。【方法】通过三个实验阶段(实验室自配阳性样品测试阶段、腹泻病人模拟生物样本测试阶段、市场食品样测试阶段),验证仪器及试剂盒的稳定性、对腹泻样本和市场食品样本检测的可靠性,及其适用范围。【结果】实验室自配样品检测结果较好,检测限达到7~100 cfu/m L;腹泻样和市场食品样的检测假阳性率较高,但灵敏度极好,三个阶段合计灵敏度为99.6%,特异度为55.9%,真阳性率为85.1%,真阴性率为98.3%。【结论】该恒温荧光PCR方法及快速检测试剂盒灵敏度高,稳定性好,适用范围广,在控制实验操作过程及实验条件,提高特异度后,值得进一步推广,对我国食源性副溶血性弧菌的检测具有重要意义。

关键词：副溶血性弧菌恒温荧光PCR 快速检测试剂盒

蔬菜中拟除虫菊酯残留ELISA快速检测试剂盒的研制

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食品安全导刊 2017年第11期 34-39页

作者：熊雅婷邢维维白莲英潘爱珍吴益清玄兵北京维德维康生物技术有限公司湖北省武汉市黄陂区农业检验检测中心长沙市长沙县食品药品工商质量监督管理局辽宁省锦州市兽药饲料监测所

拟除虫菊酯是一类人工合成的杀虫剂,包括醚菊酯、苄氯菊酯、溴氰菊酯、氯氰菊酯等20种农药,因其杀虫谱广且效果好而被广泛用于防治农业害虫,在蔬菜、果树害虫防治等方面取得了较好的效果.目前,拟除虫菊酯类农药已成为我国使用量最大的... 详细信息

拟除虫菊酯是一类人工合成的杀虫剂,包括醚菊酯、苄氯菊酯、溴氰菊酯、氯氰菊酯等20种农药,因其杀虫谱广且效果好而被广泛用于防治农业害虫,在蔬菜、果树害虫防治等方面取得了较好的效果.目前,拟除虫菊酯类农药已成为我国使用量最大的农药种类之一,

关键词：拟除虫菊酯类农药快速检测试剂盒 ELISA 蔬菜果树害虫防治残留农药种类人工合成