检索结果-南通市图书馆

TaqMan探针双重荧光聚合酶链式反应技术检测食源性沙门氏菌和志贺氏菌

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

食品安全质量检测学报 2024年第10期15卷 261-269页

作者：郭瑞赵林萍韩小改屈凌波赵光升姬建生郑怀信任宝红国家市场监管重点实验室(食品安全快速检测与智慧监管技术) 郑州450001 郑州中道生物技术有限公司郑州450001 郑州大学药学院郑州450001 河南省食品和盐业检验技术研究院郑州450003 郑州大学基础医学院郑州450001

目的建立TaqMan探针双重荧光聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)技术检测食源性沙门氏菌和志贺氏菌的方法。方法通过比对沙门氏菌和志贺氏菌的基因组序列,选择同源性高、保守性好的区域设计特异性引物和探针,经过引探筛选... 详细信息

目的建立TaqMan探针双重荧光聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)技术检测食源性沙门氏菌和志贺氏菌的方法。方法通过比对沙门氏菌和志贺氏菌的基因组序列,选择同源性高、保守性好的区域设计特异性引物和探针,经过引探筛选、浓度调试等一系列优化,建立了食源性沙门氏菌和志贺氏菌双重荧光PCR核酸检测方法,并对其特异性、质粒最低检出限、菌液敏感性、重复性、稳定性以及实际样品进行了验证。结果该方法与大部分食源性致病菌无交叉反应,特异性强;沙门氏菌和志贺氏菌质粒的最低检出限可达5 copies/μL,沙门氏菌菌液敏感性为1.0×10^(2) cfu/mL,志贺氏菌菌液敏感性10 cfu/mL;质粒和菌液核酸梯度的批内和批间变异系数均在0.177%~1.958%之间,小于5.0%,具有较强的稳定性;标准曲线相关系数(r^(2))均大于0.999。结论本研究成功建立了一种TaqMan探针双重荧光PCR技术同时检测食源性沙门氏菌和志贺氏菌的方法,该方法扩增时间短,只需要30 min即可,而且特异性强、稳定性好,可用于疑似沙门氏菌和志贺氏菌污染样品的检测,为食品安全的快速检测提供技术支撑。

关键词：沙门氏菌志贺氏菌食源性荧光聚合酶链式反应

重组酶介导的等温扩增结合CRISPR/Cas12a检测志贺氏菌和克罗诺杆菌

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

食品安全质量检测学报 2024年第11期15卷 35-44页

作者：张欣悦杨钰娟孔祥翔杨捷琳钮冰陈沁刘志勇上海大学生命科学学院上海海关动植物与食品检验检疫技术中心上海市徐汇区疾病预防控制中心

目的应用重组酶介导的等温扩增技术（recombinase-aided amplification,RAA）结合成簇规则的间隔短回文重复序列（clustered regularly interspaced short palindromic repeats,CRISPR）,建立志贺氏菌和克罗诺杆菌的快速检测方法。方法通过筛选志贺氏菌和克罗诺杆菌特异性基因,设计特异扩增引物、CRISPR脱氧核糖核酸（CRISPR deoxyribonucleic acid,cr DNA）和探针,将靶标进行RAA扩增后,建立CRISPR检测方法。对方法的灵敏度、特异性和应用性进行评价,并与国标检测方法进行对比。结果本研究对志贺氏菌和克罗诺杆菌纯菌液DNA最低检出限分别为4.9×10～3 CFU/m L、4.4×10～4 CFU/m L,基因组DNA最低检出限为6.8×10-3ng/μL、5.7×10-3ng/μL,特异性好,与其他病原菌无交叉反应。同时,该方法成功检测出加标猪肉样品和人工污染奶粉中的志贺氏菌和克罗诺杆菌,比国家标准检出限更低。结论本研究建立的RAA-CRISPR方法可有效应用于志贺氏菌和克罗诺杆菌的检测,这为快速筛查食品中是否污染这两种病原菌提供重要价值。

关键词：志贺氏菌克罗诺杆菌重组酶介导的等温扩增成簇规则的间隔短回文重复序列

在线全文

同方期刊数据库

学校读者我要写书评

暂无评论

食品中志贺氏菌检测技术研究进展

食品工业科技 2022年第1期43卷 410-416页

作者：卢鑫王立娟郭威马晓燕张伟河北农业大学理工学院河北沧州061100 河北农业大学食品科技学院河北保定071001 河北农业大学生命科学学院河北保定071001 河北省人畜共患病原微生物分析与防控重点实验室河北保定071001

志贺氏菌是主要的食源性致病菌之一,其低感染剂量和严重危害性受到人们广泛关注。因此,探究出快速、灵敏、高效的志贺氏菌的检测方法,对于保障食品质量安全是至关重要的。志贺氏菌的检测方法可分为三大类:传统培养方法、免疫学方法和分... 详细信息

志贺氏菌是主要的食源性致病菌之一,其低感染剂量和严重危害性受到人们广泛关注。因此,探究出快速、灵敏、高效的志贺氏菌的检测方法,对于保障食品质量安全是至关重要的。志贺氏菌的检测方法可分为三大类:传统培养方法、免疫学方法和分子生物学方法,许多研究为使其在样品检测中更加实用,进行了不同程度的改进。本文综述近年检测志贺氏菌的技术,包括改良的传统方法、免疫学方法和分子生物学方法以及新兴检测方法。重点阐述这些方法的应用范畴和应用进展,为志贺氏菌检测方法的选择提供参考。

关键词：志贺氏菌检测技术研究进展食品

志贺氏菌噬菌体ΦDS8对患病肉鸡的治疗及其肠道菌群的影响

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

浙江农业学报 2022年第7期34卷 1386-1395页

作者：陈诗雨徐美余邓征宇王峰张麒麟邓先余林连兵昆明理工大学生命科学与技术学院云南昆明650500 云南省高校饲用抗生素替代技术工程研究中心云南昆明650500

志贺氏菌是一种常见的肠道致病菌,其引起的细菌病是危害公共卫生的人畜共患病之一。随着抗生素的滥用,志贺氏菌耐药性的问题难以控制,急需新的方法来解决,采用噬菌体杀灭耐药性细菌已日益受到重视。本研究建立肉鸡感染志贺氏菌模型,分... 详细信息

志贺氏菌是一种常见的肠道致病菌,其引起的细菌病是危害公共卫生的人畜共患病之一。随着抗生素的滥用,志贺氏菌耐药性的问题难以控制,急需新的方法来解决,采用噬菌体杀灭耐药性细菌已日益受到重视。本研究建立肉鸡感染志贺氏菌模型,分别采用感染前2 h灌喂噬菌体液预防和感染2 h后灌喂噬菌体液两种方法对肉鸡进行治疗。灌喂志贺氏菌2 h后的肉鸡均出现腹泻状况,粪便中志贺氏菌含量最高达到1×10^(7) CFU·g^(-1),优势菌群含量大幅下降,有害菌群占比上升。噬菌体治疗后,肉鸡粪便中噬菌体含量上升,志贺氏菌含量下降,粪便性状及肠道菌群恢复正常,且肉鸡存活率100%。没有噬菌体治疗的肉鸡存活率60%,解剖观察发现器官病变明显。噬菌体ΦDS8在治疗志贺氏菌株感染方面有良好的效果,其作为抗生素替代产品有较好的应用价值和前景。

关键词：志贺氏菌噬菌体肉鸡肠道菌群

食品中志贺氏菌快速检测免疫磁分离样品前处理技术研究

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

计量学报 2023年第3期44卷 326-333页

作者：李静雯陈尔凝康福英洪甜富迎辉杜美红北京市科学技术研究院分析测试研究所(北京市理化分析测试中心) 北京100089 北京国际工程咨询有限公司北京100055

采用Protein A磁珠与志贺氏菌混合血清制备抗志贺氏菌多靶标免疫磁珠,建立了25 mL志贺氏菌免疫磁分离体系,并通过测定代表性食品(牛奶、水果、面包)中志贺氏菌生长曲线,设计食品样品前处理可行性技术方案,与环介导等温扩增(LAMP)检测技... 详细信息

采用Protein A磁珠与志贺氏菌混合血清制备抗志贺氏菌多靶标免疫磁珠,建立了25 mL志贺氏菌免疫磁分离体系,并通过测定代表性食品(牛奶、水果、面包)中志贺氏菌生长曲线,设计食品样品前处理可行性技术方案,与环介导等温扩增(LAMP)检测技术整合进行了食品中痕量志贺氏菌快速检测验证。结果显示:多靶标免疫磁珠能同时捕获福氏、宋内氏、鲍氏、痢疾氏等4种志贺氏菌,捕获效率为35%~94%,非特异性小于1%(金黄色葡萄球菌10%除外),1~2×10^(1)CFU志贺氏菌在25 mL纯牛奶、25 g梨/面包+25 mL志贺氏菌增菌肉汤基础中,通过6 h培养+免疫磁分离的策略可获得10^(2)CFU/mL以上的志贺氏菌,将志贺氏菌检测样品前处理时间由48 h缩短至8 h内,并能够满足后续检测技术检出限的需求,实现了食品中志贺氏菌的快速检测。

关键词：计量学食品检测志贺氏菌免疫磁分离捕获效率 Protein A磁珠多价血清

志贺氏菌CRISPR位点的比较基因组学及与质粒数量的相关性分析

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国食品学报 2020年第5期20卷 242-250页

作者：曲道峰陆诗铫陈跃文黄东萍龚俏玲易松强韩剑众浙江工商大学食品与生物工程学院杭州310018 江西省畜牧技术推广站南昌330046

成簇规律间隔的短回文重复序列(CRISPR)在多数细菌和古生菌中广泛存在,该遗传结构可以有效防御外源DNA(如质粒、噬菌体等)的侵袭,从而降低外源基因的水平转移。本文的研究对象为志贺氏菌属中的鲍氏志贺氏菌、痢疾志贺氏菌、宋内氏志贺... 详细信息

成簇规律间隔的短回文重复序列(CRISPR)在多数细菌和古生菌中广泛存在,该遗传结构可以有效防御外源DNA(如质粒、噬菌体等)的侵袭,从而降低外源基因的水平转移。本文的研究对象为志贺氏菌属中的鲍氏志贺氏菌、痢疾志贺氏菌、宋内氏志贺氏菌以及福氏志贺氏菌等40株菌。研究不同志贺氏菌种中CRISPR位点的结构差异,其与可移动质粒之间的关联。采用生物信息学的方法比较间隔序列与插入序列的同源性,判断CRISPR位点与RNA二级结构稳定性的关系。结果:40株志贺氏菌中均含CRISPR结构,共有241个CRISPR位点和6个确定位点。本研究发现cas3基因和重复序列均不可作为这4类细菌的分类依据。结论:CRISPR位点的数量和间隔区数量之间在统计学上无关。耐药基因、间隔序列整合子等移动遗传原件具有一定的同源性,表明志贺氏菌在进化过程中不断受到外源基因的侵袭。

关键词：志贺氏菌 CRISPR 间隔区外源基因质粒

一株可裂解动物源性多重耐药志贺氏菌的噬菌体分离鉴定及其生物学特性研究

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

微生物学杂志 2023年第5期43卷 91-100页

作者：徐美余张瑶邓征宇何秀罗成莹邓先余林连兵王峰昆明理工大学生命科学与技术学院云南昆明650500 云南省高校饲用抗生素替代技术工程研究中心云南昆明650500

从鸡的肠道内分离鉴定多重耐药志贺氏菌(Shigelle),纯化获得可侵袭、裂解该志贺氏菌的噬菌体,并研究其生物学特性。以养殖场病鸡肠道中分离的志贺氏病原菌为宿主,筛选鉴定噬菌体,聚乙二醇沉淀浓缩噬菌体,通过透射电镜观察噬菌体形态,双... 详细信息

从鸡的肠道内分离鉴定多重耐药志贺氏菌(Shigelle),纯化获得可侵袭、裂解该志贺氏菌的噬菌体,并研究其生物学特性。以养殖场病鸡肠道中分离的志贺氏病原菌为宿主,筛选鉴定噬菌体,聚乙二醇沉淀浓缩噬菌体,通过透射电镜观察噬菌体形态,双层平板法测定噬菌体宿主谱、最佳感染复数、一步生长曲线、酸碱耐受性和热稳定性,测定噬菌体对多重耐药致病性志贺氏菌的裂解效果。通过上述方法,共筛选到26株志贺氏菌分离株,分别命名为BS1~BS26。以志贺氏菌BS26为宿主菌分离得到一株裂解性噬菌体并命名为噬菌体PSF26,鉴定为有尾噬菌体目,长尾噬菌体科,噬菌体对福氏志贺氏菌(Shigella flexneri)和宋内志贺氏菌(Shigella sonnei)分离株均有裂解作用。噬菌体PSF26的最佳感染复数为0.1,感染周期为90 min,包括75 min的潜伏期和15 min的爆发期,裂解量为(58±17)pfu/cell。噬菌体PSF26在pH 5~8,温度0~40℃条件下能保持较高活性,对宿主菌的抑菌圈直径为(11.33±1.53)mm。结果表明,噬菌体PSF26爆发期短,裂解量高,有较好的酸碱、温度耐受性,对多重耐药性福氏和宋内志贺氏菌有良好的作用效果,为利用噬菌体防控饲养动物中食源性致病菌感染和饲用抗生素替代技术研发提供参考。

关键词：志贺氏菌噬菌体抗生素替代细菌感染疾病防治生物学特性

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

志贺氏菌的LAMP检测方法研究

中国食品学报 2013年第8期13卷 200-206页

作者：刘光富关荣发刘明启中国计量学院生命科学学院杭州310018

目的:建立志贺氏菌的快速LAMP检测技术。方法:以志贺氏菌ipaH基因为靶序列,设计LAMP特异性引物,同时检测引物的灵敏度和特异性。建立LAMP检测病原菌的方法,并对LAMP与荧光定量PCR检测方法的灵敏度、特异性进行比对。结果:LAMP方法的检... 详细信息

目的:建立志贺氏菌的快速LAMP检测技术。方法:以志贺氏菌ipaH基因为靶序列,设计LAMP特异性引物,同时检测引物的灵敏度和特异性。建立LAMP检测病原菌的方法,并对LAMP与荧光定量PCR检测方法的灵敏度、特异性进行比对。结果:LAMP方法的检出限为4×100CFU/mL,荧光定量PCR的检出限为4×101CFU/mL,实验结果可用肉眼观察。结论:LAMP检测方法不仅能够达到荧光定量PCR方法的准确性,而且检测限低,灵敏度高。

关键词： LAMP 志贺氏菌检测荧光定量PCR

1种选择性富集沙门氏菌、志贺氏菌、金黄色葡萄球菌和副溶血性弧菌共增菌培养基SSSV研究

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国食品学报 2013年第1期13卷 19-28页

作者：翁思聪朱军莉冯立芳励建荣浙江工商大学食品与生物工程学院浙江省食品安全重点实验室杭州310035 渤海大学辽宁省食品安全重点实验室辽宁锦州121013

设计并制备1种同时富集沙门氏菌、志贺氏菌、金黄色葡萄球菌、副溶血性弧菌的复合共增菌培养基SSSV,用于水产品中上述常见4种食源性致病菌的快速增菌。以缓冲蛋白胨水为基础培养基,挑选适合的促进剂、抑制剂及营养物质等做单因素试验和... 详细信息

设计并制备1种同时富集沙门氏菌、志贺氏菌、金黄色葡萄球菌、副溶血性弧菌的复合共增菌培养基SSSV,用于水产品中上述常见4种食源性致病菌的快速增菌。以缓冲蛋白胨水为基础培养基,挑选适合的促进剂、抑制剂及营养物质等做单因素试验和正交试验,确定其最佳成分及配比;分析SSSV培养基对目标菌的生长选择性以及混合菌的生长特性;通过人工污染试验,评价SSSV对不同贮藏条件下的水产品中目标致病菌的增菌复原能力。结果表明,共增菌培养基SSSV对非目标菌表现一定的抑制作用,对4种致病菌的增菌效果优于营养肉汤,但略差于国家标准中目标菌各自的选择培养基。SSSV能同时富集不同接种比例组成的混合菌,37℃培养8h后,菌体浓度均在104～104CFU/mL范围。SSSV能有效修复冷藏和冻藏水产品中冷受伤的目标致病菌。人工污染102CFU/mL目标菌的冷藏和冷冻虾仁、目鱼卷及鱼丸样品,经SSSV培养基在37℃分别培养8h和12h,可使菌体浓度在105～106CFU/mL。可见,SSSV培养基可应用于水产品中沙门氏菌、志贺氏菌、金黄色葡萄球菌和副溶血性弧菌检验的前增菌,可望与多重PCR检测方法联用,以加快检测时间,提高检测率和准确性。

关键词：共增菌培养基沙门氏菌志贺氏菌金黄色葡萄球菌副溶血性弧菌