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心脏干细胞的分离技术

中华病理学杂志 2010年第8期39卷 555-556页

作者：刘聪况东王国平华中科技大学同济医学院附属同济医院病理研究所武汉430030

干细胞再生为心肌组织的研究及心肌梗死的修复带来了新的曙光。近期的研究表明，在成年人和哺乳动物心脏内，均存在原始的、未分化的干细胞，该细胞c-kit阳性，被命名为心脏干细胞（cardiacstemceils）^[1-3]。心脏干细胞在体内外被证... 详细信息

干细胞再生为心肌组织的研究及心肌梗死的修复带来了新的曙光。近期的研究表明，在成年人和哺乳动物心脏内，均存在原始的、未分化的干细胞，该细胞c-kit阳性，被命名为心脏干细胞（cardiacstemceils）^[1-3]。心脏干细胞在体内外被证实可分化为心肌细胞、内皮细胞和平滑肌细胞，并重构心肌组织，改善心功能。

关键词：心脏干细胞分离技术心肌组织干细胞再生 c-kit 平滑肌细胞心肌梗死哺乳动物

心脏干细胞分泌的exosome对氧化应激下心肌细胞的保护作用研究

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中国药理学通报 2015年第12期31卷 1656-1660页

作者：肖静潘宇李晓红姜霖杨翔宇吴岳恒雷和平余细勇南方医科大学药学院广东广州510515 广东省人民医院广东省医学科学院广东广州510080

目的探索心脏干细胞分泌的外泌体(exosome)对体外氧化应激所致心肌细胞凋亡的保护作用。方法磁珠分选出Sca-1^+CPCs进行培养,流式细胞术鉴定;分离CPCs分泌的exosome,并用Western blot进行表型鉴定和用Nanosight进行粒径分析;免疫荧光法... 详细信息

目的探索心脏干细胞分泌的外泌体(exosome)对体外氧化应激所致心肌细胞凋亡的保护作用。方法磁珠分选出Sca-1^+CPCs进行培养,流式细胞术鉴定;分离CPCs分泌的exosome,并用Western blot进行表型鉴定和用Nanosight进行粒径分析;免疫荧光法及PKH26标记技术观察心肌细胞H9c2对exosome的摄取作用;通过H_2O_2处理诱导H9c2细胞凋亡,用Western blot检测对照组与CPC-exo处理组凋亡相关蛋白水平,观察exosome对心肌细胞凋亡的保护作用。结果 1磁珠分选出的细胞用免疫荧光检测发现Sca-1呈阳性表达,且纯度可达95%以上。2从Sca-1^+CPCs细胞培养上清中提取出的exosome其表面标记蛋白CD63呈阳性表达,Nanosight结果显示大部分粒子都处于(82.33±3.06)nm(n=3)。免疫荧光显示H9c2细胞中可见大量PKH26标记的exosome在胞质聚集。3Western blot结果显示,与对照组相比,CPC-exo处理组总的caspase-3表达不变,而激活型caspase-3表达水平明显降低(P细胞所摄取,可以保护心肌细胞由于氧化应激引起的凋亡。

关键词：心脏干细胞外泌体磁珠分选旁分泌效应氧化应激凋亡

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心脏干细胞对心肌细胞凋亡的保护机制

中国组织工程研究 2016年第36期20卷 5405-5411页

作者：高学东胡科魏虎南阳市第三人民医院心血管内科河南省南阳市473000 南阳市中心医院神经康复科河南省南阳市473000 南阳市第三人民医院老年病科河南省南阳市473000

背景:心肌细胞凋亡会导致多种心脏疾病的出现,常规治疗大多无法获得理想的效果。心脏干细胞相关理论的出现,颠覆以往心肌细胞不可再生的观点,为各种心脏疾病的治疗提供了新思路。目的:探讨心脏干细胞在心肌细胞凋亡中的保护机制。方法:... 详细信息

背景:心肌细胞凋亡会导致多种心脏疾病的出现,常规治疗大多无法获得理想的效果。心脏干细胞相关理论的出现,颠覆以往心肌细胞不可再生的观点,为各种心脏疾病的治疗提供了新思路。目的:探讨心脏干细胞在心肌细胞凋亡中的保护机制。方法:取5只新生大鼠进行心脏干细胞分离与培养,另取20只Wistar大鼠制备心肌梗死模型,然后随机分为2组,每组10只,分别设为观察组和对照组,建模后1 d,分别予以心脏干细胞与培养液注射。治疗后14 d,计算两组的心肌细胞凋亡指数,并检测两组心肌细胞凋亡相关蛋白表达情况。结果与结论:(1)细胞形态:连续培养3 d,组织块呈现出完全铺展生长状态,组织块中爬出少量的类纤维细,磁珠分离后进行传代培养5 d后,可观察到细胞重新聚集成团;(2)心肌细胞凋亡情况及相关蛋白表达:观察组的心肌细胞凋亡指数、Fas蛋白吸光度值和Fasl蛋白吸光度值均显著小于对照组(P心脏干细胞移植治疗,可有效调节细胞凋亡相关蛋白的表达情况,抑制心肌细胞的凋亡。

关键词：干细胞细胞凋亡组织工程移植心脏干细胞心肌梗死心肌细胞 Fasl蛋白 Fas蛋白 Bcl-2蛋白保护大鼠细胞分化细胞移植

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心脏干细胞分离培养及其增殖与迁移的机制

中国组织工程研究 2016年第41期20卷 6190-6196页

作者：侯波朱先云王学坤青岛市胶州中心医院心内科山东省青岛市266300 青岛市胶州中心医院内分泌科山东省青岛市266300 青岛市中心医院心内科山东省青岛市266042

背景:体外环境下进行心脏干细胞培养的过程中,生长微环境可能会对细胞的的增殖等产生一定的影响。目的:在体外环境下培养大鼠心脏干细胞,探讨心脏干细胞增殖、迁移的可能机制。方法:纳入SD大鼠10只,获得心肌组织块进行原代和传代培养。... 详细信息

背景:体外环境下进行心脏干细胞培养的过程中,生长微环境可能会对细胞的的增殖等产生一定的影响。目的:在体外环境下培养大鼠心脏干细胞,探讨心脏干细胞增殖、迁移的可能机制。方法:纳入SD大鼠10只,获得心肌组织块进行原代和传代培养。收集第3代心脏干细胞进行免疫荧光染色,进行干细胞鉴定,检测干细胞生长因子受体(c-kit)和CD45、CD90的表达。收集培养后的组织块,随机分为2份,一份用多聚甲醛进行固定,常规石蜡包埋后切片,进行苏木精-伊红染色、Masson染色以及细胞凋亡检测;另一份在培养基中添加Ed U标记增殖细胞,采用免疫荧光染色检测c-kit阳性细胞以及基质金属蛋白酶2,9及转化生长因子β1等表达。结果与结论:(1)细胞鉴定结果:心肌组织培养7-10 d后有明亮的圆形细胞长出,细胞贴壁后呈梭状,生长、增殖能力旺盛。免疫荧光染色可观察到大量细胞呈c-kit、CD45阳性表达,CD90阴性表达;(2)细胞凋亡情况:培养的组织块切片后染色见大量新生细胞生长的同时伴随心肌细胞的凋亡;(3)免疫荧光染色结果:经EdU标记后阳性细胞分布于心肌间隙,基质金属蛋白酶2,9及转化生长因子β1少量表达,但周围心肌组织上述3因子表达明显增多。(4)结果表明,心肌组织体外培养可获取心脏干细胞,伴随细胞增殖和迁移,其机制与基质金属蛋白酶2,9及转化生长因子β1的表达有关。

关键词：干细胞培养心脏干细胞心脏细胞稳态微环境作用机制

干细胞niche在心脏干细胞稳态维持中的作用

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中国修复重建外科杂志 2015年第4期29卷 503-507页

作者：文智廖斌泸州医学院附属医院胸心外科四川泸州646000

目的综述干细胞niches(stem cell niches,SCNs)在心脏干细胞(cardiac stem cells,CSCs)稳态维持中的作用,并展望其应用前景。方法广泛查阅近十年来关于心脏SCNs(cardiac SCNs,CSCNs)的文献,分析其组成细胞、细胞外基质及分泌因子在CSCs... 详细信息

目的综述干细胞niches(stem cell niches,SCNs)在心脏干细胞(cardiac stem cells,CSCs)稳态维持中的作用,并展望其应用前景。方法广泛查阅近十年来关于心脏SCNs(cardiac SCNs,CSCNs)的文献,分析其组成细胞、细胞外基质及分泌因子在CSCs稳态维持中的作用,并进行综述。结果研究表明,CSCNs能延缓CSCs老化,保护其不受外因损害,保持干性稳定,并提高纯净度和数量,但作用机制尚不完全清楚。结论 CSCNs在CSCs干性稳定的维持以及纯化、扩增方面具有良好应用前景,有待进一步深入研究。

关键词：干细胞niches 心脏干细胞稳态

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心脏干细胞的研究与进展(英文)

中国组织工程研究与临床康复 2011年第49期15卷 9299-9302页

作者：杨文玲赵晓辉解放军第三军医大学新桥医院心内科重庆市400037

背景:大量研究证明,哺乳动物心脏中存在心脏自身干细胞,参与心脏的自我更新和内源性修复。目的:就心脏干细胞的来源、分类、特征及心脏病治疗等方面进行综述。方法:由第一作者应用计算机检索PubMed数据库2000-01/2010-12有关心脏干细胞... 详细信息

背景:大量研究证明,哺乳动物心脏中存在心脏自身干细胞,参与心脏的自我更新和内源性修复。目的:就心脏干细胞的来源、分类、特征及心脏病治疗等方面进行综述。方法:由第一作者应用计算机检索PubMed数据库2000-01/2010-12有关心脏干细胞的来源、分化、特征及其在心肌再生方面的文章,检索词为"Cardiacstemcell",包括临床研究和基础研究,排除重复研究和Meta分析,共保留32篇文献进行综述。结果与结论:心脏干细胞是一类存在于心脏组织内能够自我更新及克隆增殖的干细胞,它能够分化为心肌细胞、内皮细胞,参与心脏损伤修复,改善心功能。现已能够通过体外分离培养扩增后移植入动物心脏内,为下一步在临床上应用于人体打下了基础。但成体心脏干细胞自身的稳态平衡和动态变化,及其向心脏功能细胞分化需经历哪些具体过程,有哪些影响因素及如何调控等还不太清楚,需要继续研究以进一步证实。

关键词：心脏干细胞心肌细胞定向分化心脏疾病干细胞移植

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心脏干细胞移植治疗缺血性心脏病的研究进展

中国循环杂志 2015年第3期30卷 290-292页

作者：李玲石蓓遵义医学院附属医院心血管内科贵州省遵义市563003

缺血性心脏病患者往往死于心力衰竭(心衰),而目前对于难治性心衰最好的治疗方法是心脏移植。但随着干细胞和祖细胞在再生潜能治疗和预防心衰方面的深入研究,心脏干细胞移植有望成为治疗缺血性心脏病最理想的方法。本文旨在对心脏干细胞... 详细信息

缺血性心脏病患者往往死于心力衰竭(心衰),而目前对于难治性心衰最好的治疗方法是心脏移植。但随着干细胞和祖细胞在再生潜能治疗和预防心衰方面的深入研究,心脏干细胞移植有望成为治疗缺血性心脏病最理想的方法。本文旨在对心脏干细胞移植治疗缺血性心脏病的研究现状及所面临的问题进行综述。

关键词：心脏干细胞缺血性心脏病干细胞移植

骨髓间充质干细胞对CD117^+心脏干细胞分化过程中转化生长因子βⅢ型受体表达的影响

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中国组织工程研究与临床康复 2009年第36期13卷 7057-7062页

作者：曹青王飞林继先陈书艳上海交通大学医学院附属新华医院心内科上海市200092

背景:骨髓间充质干细胞能够促进心肌细胞、血管生成,减轻心肌重构、改善心功能。但其旁分泌作用能否能够通过影响转化生长因子βⅢ型受体促进CD117+心脏干细胞的分化尚不清楚。目的:观察骨髓间充质干细胞对CD117+心脏干细胞分化过程中... 详细信息

背景:骨髓间充质干细胞能够促进心肌细胞、血管生成,减轻心肌重构、改善心功能。但其旁分泌作用能否能够通过影响转化生长因子βⅢ型受体促进CD117+心脏干细胞的分化尚不清楚。目的:观察骨髓间充质干细胞对CD117+心脏干细胞分化过程中转化生长因子βⅢ型受体表达的影响。设计、时间及地点:细胞学体外对比观察,于2008-02/2009-02在新华医院完成。材料:新生大鼠,体质量5～8g,用于心脏干细胞分离培养;4周龄SD大鼠,体质量200～250g,用于骨髓间充质干细胞培养。方法:分离大鼠心肌组织进行植块培养,体外磁珠分离培养大鼠心脏干细胞,免疫荧光鉴定其表型为CD117+。将获得的CD117+心脏干细胞吹打制成单细胞悬液,无血清同步化24h,PBS冲洗3次,加入DMEM/F12培养基,接种至被明胶包被的6孔板。实验分为对照组和共培养组,对照组用心肌球培养液诱导分化的心脏干细胞,共培养组用Transwell小室避免细胞融合建立心脏干细胞与骨髓间充质干细胞共培养体系。主要观察指标:①倒置显微镜下观察心脏干细胞生长情况。②Westernblot检测CD117+心脏干细胞向心肌细胞系分化过程中培养第1,3,5,7天心肌钙蛋白T、缝隙连接蛋白43、转化生长因子βⅢ型受体和smad2及其磷酸化程度的改变。结果:①植块培养和磁珠分离法结合分离出CD117+心脏干细胞,传代后心脏干细胞分散生长,细胞略小于普通心肌细胞。②诱导分化后第5,7天,共培养组心肌钙蛋白T和缝隙连接蛋白43的表达高于对照组(P干细胞旁分泌作用能够促进CD117+心脏干细胞内心肌钙蛋白T,缝隙连接蛋白43和转化生长因子βⅢ型受体的表达,并提高了smad2蛋白的磷酸化程度。

关键词：心脏干细胞骨髓间充质干细胞 CD117 转化生长因子β smad

心脏干细胞可通过旁分泌exosome保护心肌细胞发生凋亡

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中国病理生理杂志 2015年第10期 1819-1820页

作者：肖静潘宇李晓红吴岳恒姜霖杨翔宇余细勇广东省人民医院广东省医学科学院医学研究中心南方医科大学广州医科大学药学院

心脏干细胞移植在心肌梗死治疗中具有广泛应用,外泌体(exosome)被认为是细胞旁分泌的重要介质。本研究拟建立心脏固有干细胞(CPCs)的成熟分离方法,并初步探索CPCs分泌的exosome在体外保护氧化应激状态下心肌细胞的凋亡。原代

关键词：旁分泌 exosome 心肌细胞心脏干细胞凋亡