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新型心肌黄酶检测荧光探针的合成及生物成像

南昌大学学报（理科版） 2022年第1期46卷 72-78,84页

作者：周莹房街芹贾明轩朱立平云南大学化学科学与工程学院云南昆明650091

由于癌细胞以极快的速度不停生长,其内部需氧量远远超出血液的供应量,导致组织内部出现低氧。在固体肿瘤内,低氧导致部分酶出现过表达现象,其中硝基还原酶、偶氮还原酶及心肌黄酶的浓度变化最为明显。本研究中,我们以心肌黄酶作为检测目... 详细信息

由于癌细胞以极快的速度不停生长,其内部需氧量远远超出血液的供应量,导致组织内部出现低氧。在固体肿瘤内,低氧导致部分酶出现过表达现象,其中硝基还原酶、偶氮还原酶及心肌黄酶的浓度变化最为明显。本研究中,我们以心肌黄酶作为检测目标,合成了一种新型荧光探针Milla 1。该探针将苯醌作为反应基团,在还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸的共同作用下,经过还原反应并发生质子化,生成对苯二酚(或半醌),利用断键反应释放出荧光团,实现对心肌黄酶的光学检测。其中,Milla 1可与心肌黄酶发生专一识别反应,通过635 nm处荧光值的变化直接测定心肌黄酶含量的波动,进而检测出相关低氧区域的低氧程度。由于探针Milla 1具有选择性高、光稳定性好、毒性低等特点,探针Milla 1被成功用于HeLa细胞和秀丽隐杆线虫内源性和外源性的心肌黄酶检测和光学成像实验中。

关键词：荧光探针心肌黄酶三甲基苯醌细胞成像

国产染料配基层析介质分离纯化甘油激酶α-磷酸甘油脱氢酶和心肌黄酶

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中国医药工业杂志 1991年第5期22卷 193-196页

作者：周金耀卞祖宁徐景娣赵玉秀熊振平上海医药工业研究院生化室上海20005

以国产Sepharose 4 B和活性染料制备的YS一Ⅱ染料配基层析介质,分离提纯了甘油激酶、α-磷酸甘油脱氢酶和心肌黄酶,可使纯度分别提高6.6、2.9和3.3倍,收率为83.3、43.6和81.9%,所含的NADH 氧化酶和乳酸脱氢酶几乎全部可除去,各酶冻干后... 详细信息

以国产Sepharose 4 B和活性染料制备的YS一Ⅱ染料配基层析介质,分离提纯了甘油激酶、α-磷酸甘油脱氢酶和心肌黄酶,可使纯度分别提高6.6、2.9和3.3倍,收率为83.3、43.6和81.9%,所含的NADH 氧化酶和乳酸脱氢酶几乎全部可除去,各酶冻干后在10℃存放可稳定半年以上。所得的上述三个酶与自制的脂酶可组成血清甘油三酯酶联试剂盒。

关键词：甘油激酶心肌黄酶染料配基层析

基于检测一氧化氮和心肌黄酶荧光探针的设计、合成及性质研究

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基于检测一氧化氮和心肌黄酶荧光探针的设计、合成及性质研究

作者：曹洁云南大学

学位级别：硕士

荧光探针可用于生物科学研究、开发新药物、诊断临床疾病等,由于其具有灵敏度高、成本低等优点,目前已经在生活中的各个领域得到了应用。一氧化氮(NO)是一种重要的气体信使分子,它参与了大量的生理调节活动,在生物体内发挥着关键的作用... 详细信息

荧光探针可用于生物科学研究、开发新药物、诊断临床疾病等,由于其具有灵敏度高、成本低等优点,目前已经在生活中的各个领域得到了应用。一氧化氮(NO)是一种重要的气体信使分子,它参与了大量的生理调节活动,在生物体内发挥着关键的作用。研究表明,一氧化氮与许多的人体疾病如心血管疾病、糖尿病等都有着密切的关系。因此,一氧化氮的研究在医学领域有着重要的意义。本文设计合成了一个基于罗丹明衍生物,能够专一识别一氧化氮的荧光探针分子Rh-NO。该化合物在溶剂CHCHOH:PBS=1:99,pH=7.4的条件下,与一氧化氮进行结合,在595 nm出释放出强烈的红色荧光。化合物Rh-NO的水溶性良好,同时也成功的应用在了细胞与线虫的荧光成像实验中。本文设计合成了一种用于识别心肌黄酶的荧光探针分子DCM-Q。心肌黄酶是一种广泛分布在几乎所有动物的身体组织中的一种细胞质黄素蛋白酶,它能阻止或减少自由基产生,保护细胞免受损伤,通常被认为是一种保护酶。此外,心肌黄酶在多种癌症组织中的含量远高于正常组织,因此,开发心肌黄酶探针可用于癌症的检测或治疗。我们对合成的探针分子DCM-Q进行了一系列光谱测试,证明该探针可以在NADH的存在下对心肌黄酶进行专一识别,其荧光从无到有,响应时间极快,且不需要特定温度就能响应。经计算得DCM-Q检测极限极低,是一个高灵敏度的荧光探针。在溶剂DMSO:PBS=1:99的条件下,该探针能在Hi-5细胞中进行生物成像。

关键词：荧光探针一氧化氮心肌黄酶生物成像罗丹明

应用液-液双水相抽提技术分离纯化甘油激酶、α-甘油磷酸脱氢酶及心肌黄酶

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生物工程学报 1988年第3期 186-192页

作者：卞祖宁周金耀徐景娣胡莹书熊振平上海医药工业研究院

用液-液双水相抽提技术分别从嗜热脂肪芽胞杆菌（Bacillus stearothermophilus）菌体、兔肌及猪心肌匀浆液中分离甘油激酶、α-甘油磷酸脱氢酶及心肌黄酶,研究了 pH、匀浆液的量、氯化钠浓度及丙酮等因素对分配系数、上下相体积之比、... 详细信息

用液-液双水相抽提技术分别从嗜热脂肪芽胞杆菌（Bacillus stearothermophilus）菌体、兔肌及猪心肌匀浆液中分离甘油激酶、α-甘油磷酸脱氢酶及心肌黄酶,研究了 pH、匀浆液的量、氯化钠浓度及丙酮等因素对分配系数、上下相体积之比、酶活性回收率及分离效果等参数的影响,并确定了抽提上述三种酶的最佳相组成系统。用本文的工艺抽提甘油激酶、α-甘油磷酸脱氧酶及心肌黄酶有下列优点:1.酶活回收率较高,分别为90%、95%及70% 2.分离效果较好,通常提纯三、四倍以上 3.各酶均存留在下相,即磷酸钾盐富相中,故可省去聚乙二醇（PEG）的分离工序而直接与后继精制工艺衔接,简化了工艺,在实验室及工业生产中均有实用价值。

关键词：液-液双水相抽提技术相组成系统甘油激酶 α-甘油磷酸脱氢酶心肌黄酶

肝脂消煎剂对脂肪肝大鼠肝微粒体膜流动性及心肌黄酶、丙二醛的作用

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中国中西医结合消化杂志 2002年第5期10卷 284-286页

作者：马晓燕季雅玲杨扬周学文辽宁中医学院附属医院中医内科教研室沈阳110032

目的 :探讨肝脂消煎剂治疗脂肪肝药效学机制。方法 :采用高脂饮食加白酒灌胃建立大鼠脂肪肝模型 ,以东宝肝泰作对照 ,观察肝脂消煎剂对脂肪肝大鼠肝微粒体膜流动性及心肌黄酶 (DTD)、丙二醛 (MDA)的影响。结果 :模型对照组 MDA与肝微粒... 详细信息

目的 :探讨肝脂消煎剂治疗脂肪肝药效学机制。方法 :采用高脂饮食加白酒灌胃建立大鼠脂肪肝模型 ,以东宝肝泰作对照 ,观察肝脂消煎剂对脂肪肝大鼠肝微粒体膜流动性及心肌黄酶 (DTD)、丙二醛 (MDA)的影响。结果 :模型对照组 MDA与肝微粒体膜荧光偏振度较正常对照组明显增大 ,且两者成正相关 (r =0 .974 6 ) ,表示肝脏因脂质过氧化引起膜流动性降低 ;肝脂消煎剂能降低 MDA含量及荧光偏振度 ,拮抗膜流动性的下降 ,提高肝脏DTD活性 ,均明显优于东宝肝泰。结论 :肝脂消煎剂可抑制肝微粒体脂质过氧化 ,拮抗其膜流动性降低 ,具有良好的防治脂肪肝作用。

关键词：心肌黄酶丙二醛脂肪肝肝脂消煎剂膜流动性实验研究动物模型

β-萘酚黄酮诱导缺血心肌黄酶基因表达的研究

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中华地方病学杂志 1998年第6期17卷 13-15页

作者：关金阳黄绍明张中林李季英权旭东李芳生辽宁省基础医学研究所

用β－萘酚黄酮诱导大鼠缺血心肌黄酶基因表达，结果证明：诱导组大鼠心肌黄酶活性升高是对照组的４倍，缺血组的３倍。由于酶的基因表达，阻止了心肌细胞膜的脂质过氧化，使线粒体膜心磷脂水平增加，线粒体呼吸酶—细胞色素氧化酶活性... 详细信息

用β－萘酚黄酮诱导大鼠缺血心肌黄酶基因表达，结果证明：诱导组大鼠心肌黄酶活性升高是对照组的４倍，缺血组的３倍。由于酶的基因表达，阻止了心肌细胞膜的脂质过氧化，使线粒体膜心磷脂水平增加，线粒体呼吸酶—细胞色素氧化酶活性升高，心肌细胞超微结构优于缺血组，保护了缺血心肌细胞。

关键词：心肌黄酶缺血心肌 β－萘酚黄酮诱导

基于罗丹明衍生物的心肌黄酶荧光探针合成及生物成像

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基于罗丹明衍生物的心肌黄酶荧光探针合成及生物成像

用染料修饰吐温80液-固萃取体系从猪心肌匀浆液中分离纯化心肌黄酶

第十一届全国化学生物学学术会议

作者：陈秋玲乔怡木赵玉强杨索刘常小溪周莹云南大学化学科学与工程学院

心肌黄酶（DTD）是一种广泛分布在几乎所有动物的身体组织中的一种细胞质黄素蛋白酶。[1]在许多人类癌症,如前列腺癌,乳腺癌,结肠癌,胰腺癌中过度表达。因此心肌黄酶的基础研究和临床诊断具有重大意义。本工作中,设计合成基于罗丹明衍... 详细信息

心肌黄酶（DTD）是一种广泛分布在几乎所有动物的身体组织中的一种细胞质黄素蛋白酶。[1]在许多人类癌症,如前列腺癌,乳腺癌,结肠癌,胰腺癌中过度表达。因此心肌黄酶的基础研究和临床诊断具有重大意义。本工作中,设计合成基于罗丹明衍生物检测心肌黄酶的荧光探针（Dia1）,具有选择性高,近红外发射波长（630nm）,对癌细胞毒性较大等优点,通过诱导细胞低氧间接检测癌细胞中过度表达的心肌黄酶,具有有明显的成像效果。[2-3]该探针有望作为特异性检测心肌黄酶的一种荧光探针分子,具有良好的应用前景。

关键词：荧光探针心肌黄酶近红外细胞成像

来源： cnki会议评论

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天然产物研究与开发 1999年第6期11卷 26-32页

作者：孙小梅谭朝勤沈静茹邹群李步海中南民族学院化学系武汉430074

用三嗪类染料ＣｉｂａｃｒｏｎＢｌｕｅＦ３Ｇ－Ａ修饰的吐温８０，与吐温８０、硫酸被构成液－固萃取体系，从猪心肌匀浆液中分离纯化心肌黄酶。研究了吐温８０染料修饰物在吐温８０相中所占的比例、分相盐浓度、溶液的酸度、匀浆... 详细信息

用三嗪类染料ＣｉｂａｃｒｏｎＢｌｕｅＦ３Ｇ－Ａ修饰的吐温８０，与吐温８０、硫酸被构成液－固萃取体系，从猪心肌匀浆液中分离纯化心肌黄酶。研究了吐温８０染料修饰物在吐温８０相中所占的比例、分相盐浓度、溶液的酸度、匀浆液的加入量等对匀浆液中酶及杂蛋白在两相中分配的影响。在室温条件下，酶选择性地进入吐温８０固相，杂蛋白主要留在盐水相。匀浆液中心肌黄酶的酶活力平均收得率为８１．４％，一步纯化倍数为６．６。降低盐浓度，提高盐水相酸度，能使酶从吐温８０固相反萃到盐水相。

关键词：三嗪类染料吐温80 萃取体系心肌黄酶猪心肌

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克鲁氏梭状芽孢杆菌的研究进展

食品工业科技 2012年第15期33卷 401-405页

作者：丁雪松赵辉黑龙江大学生命科学学院黑龙江哈尔滨150080 农业微生物技术教育部工程研究中心黑龙江哈尔滨150500

克鲁氏梭状芽孢杆菌在厌氧条件下产己酸,将其应用于浓香型白酒发酵,可使其主体香己酸乙酯更加突出。克氏梭菌在厌氧条件下代谢产生的心肌黄酶、磷酸转乙酰酶、醛脱氢酶、硫解酶可作为生化试剂、酮体中毒的解毒酶、还可以降解石油烃污染... 详细信息

克鲁氏梭状芽孢杆菌在厌氧条件下产己酸,将其应用于浓香型白酒发酵,可使其主体香己酸乙酯更加突出。克氏梭菌在厌氧条件下代谢产生的心肌黄酶、磷酸转乙酰酶、醛脱氢酶、硫解酶可作为生化试剂、酮体中毒的解毒酶、还可以降解石油烃污染物,应用于生物燃料电池、生物传感器等。重点阐述克氏梭菌产酸条件及这些酶类在性质及用途等方面的国内外研究进展。

关键词：克氏梭菌心肌黄酶磷酸转乙酰酶醛脱氢酶硫解酶