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心肌肌钙蛋白I-c复合物酶联免疫检测方法的建立

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复旦学报（自然科学版） 2005年第4期44卷 517-523页

作者：李瑞朱乃硕复旦大学生命科学学院微生物学及微生物工程系复旦金鹰生物医药研发中心上海200433

为了制备抗人心肌肌钙蛋白I(cTnI)单克隆抗体、建立检测人cTnI链酶亲和素-生物素双抗体夹心酶联免疫吸附测定(ELISA)方法,用基因工程表达的人cTnI免疫雌性BALB/c小鼠,以杂交瘤技术制备得到三株特异性抗人cTnI的单克隆抗体记为6G3,6A6,3... 详细信息

为了制备抗人心肌肌钙蛋白I(cTnI)单克隆抗体、建立检测人cTnI链酶亲和素-生物素双抗体夹心酶联免疫吸附测定(ELISA)方法,用基因工程表达的人cTnI免疫雌性BALB/c小鼠,以杂交瘤技术制备得到三株特异性抗人cTnI的单克隆抗体记为6G3,6A6,3G9.三株杂交瘤细胞中6G3和6A6为IgG1,3G9为IgG2b,腹水效价分别为4 × 10-5,4×10-5和10-5.亲和常数为5.0×109,6.4×109和3.8×109 *** blotting结果表明6G3和6A6能够识别cTnI-c复合物.把6G3抗体生物素化并制备抗cTnI,cTnc和cTnI-c的大鼠多克隆抗体.以多抗作为固相捕捉抗体,生物素化6G3抗体作为检测抗体,建立检测cTnI的双抗体夹心ELISA方法并初步应用于临床病人标本检测.以cTnI-c复合物多抗捕捉检测方法具有良好的灵敏度、特异性和准确性,灵敏度为0.9 ng/mL,较包被其他抗体捕捉方法提高1～2倍.批内变异系数为5.03%,回收率为94.56%.测定17例AMI病人和18例血清样本临床诊断结果符合率为100%.

关键词：心肌肌钙蛋白I 心肌肌钙蛋白c 单克隆抗体酶联免疫吸附测定生物素

电针预处理对急性心肌缺血再灌注改进模型大鼠的影响

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中华中医药杂志 2019年第5期34卷 2002-2006页

作者：戴求福伍舒扬辛娟娟刘群陆凤燕周晨陈安莉高俊虹赵玉雪喻晓春景向红中国中医科学院针灸研究所北京100700

目的:在改进大鼠心肌缺血再灌注模型的基础上,给予电针预处理,观察针刺内关穴对大鼠急性心肌缺血再灌注模型的预防性治疗作用。方法:SD大鼠随机分为正常组、模型组、电针预处理组,选择大鼠双侧"内关"穴进行连续3d的电针预处理后,通过改... 详细信息

目的:在改进大鼠心肌缺血再灌注模型的基础上,给予电针预处理,观察针刺内关穴对大鼠急性心肌缺血再灌注模型的预防性治疗作用。方法:SD大鼠随机分为正常组、模型组、电针预处理组,选择大鼠双侧"内关"穴进行连续3d的电针预处理后,通过改进的造模方法建立缺血再灌注损伤模型,记录心电变化,并于再灌注结束后,进行伊文思蓝-TTc双染色及心律失常评分,采用多重荧光Western Blot法检测损伤局部心肌组织中Troponin c/Ⅰ蛋白相对表达量及其比值。结果:模型组和电针预处理组大鼠心脏结扎以后ST段显著性上抬,呈典型的"墓碑"样变。电针预处理组自再灌1min后ST段逐渐降低至正常组相应水平,与模型组对应时间点ST段幅值比较均降低(PcTnⅠ相对表达量显著降低(PcTnc/Ⅰ的比值显著升高(PcTnc、cTnⅠ相对表达量及cTnc/Ⅰ的比值均降低。与模型组比较,电针预处理组的cTnc相对表达量及cTnc/Ⅰ的比值显著降低(PcTnⅠ相对表达量则显著升高(P心肌缺血再灌注模型更加稳定可靠,而电针预处理能够有效的降低心肌缺血再灌注导致的心肌损伤。

关键词：电针预处理心肌缺血再灌注内关心肌肌钙蛋白c 心肌肌钙蛋白Ⅰ

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左西孟旦治疗中重度心力衰竭的疗效

江苏医药 2013年第15期39卷 1840-1841页

作者：祝兴超侯小锋雍永宏江阴市中医院江苏省214400 南京医科大学第一附属医院

随着老龄化社会的到来,心力衰竭的发病率明显增高,心力衰竭已成为老年人患病和死亡的主要原因之一。在我国治疗心力衰竭的药物包括正性肌力药、利尿剂、血管扩张剂、血管紧张素转换酶抑制剂、β2受体阻滞剂等。左西孟旦选择性与心肌肌... 详细信息

随着老龄化社会的到来,心力衰竭的发病率明显增高,心力衰竭已成为老年人患病和死亡的主要原因之一。在我国治疗心力衰竭的药物包括正性肌力药、利尿剂、血管扩张剂、血管紧张素转换酶抑制剂、β2受体阻滞剂等。左西孟旦选择性与心肌肌钙蛋白c的N-末端结合,稳定心肌钙键,增强心肌肌钙蛋白c对钙离子的敏感性,增强心肌收缩力,但不提高细胞内的钙离子浓度,对心率影响较小,

关键词：中重度心力衰竭左西孟旦血管紧张素转换酶抑制剂治疗心肌肌钙蛋白c β2受体阻滞剂钙离子浓度疗效

重组cTnI-cTnc复合抗原的制备及其性能验证

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中国生物制品学杂志 2020年第5期33卷 530-534页

作者：武强史定刚丁建静美康生物科技股份有限公司浙江宁波315104

目的采用***表达系统分别表达心肌肌钙蛋白I(cardiac troponin I,cTnI)和cTnc,制备cTnI-cTnc二元复合蛋白,并验证其抗原性能。方法将合成的cTnI和cTnc基因片段分别插入pET-22b和pET-28a原核表达载体,构建重组表达质粒,并分别转化*** BL2... 详细信息

目的采用***表达系统分别表达心肌肌钙蛋白I(cardiac troponin I,cTnI)和cTnc,制备cTnI-cTnc二元复合蛋白,并验证其抗原性能。方法将合成的cTnI和cTnc基因片段分别插入pET-22b和pET-28a原核表达载体,构建重组表达质粒,并分别转化*** BL21(DE3),IPTG诱导表达。将表达的cTnI和cTnc蛋白经Ni2+螯合亲和层析和离子交换层析两步纯化后,在ca2+存在的条件下按摩尔比1︰1混合,制备cTnI-cTnc二元复合蛋白。采用双抗夹心ELISA法检测复合蛋白的抗原反应性;将cTnI单体和cTnI-cTnc复合蛋白稀释后,均分别于4和37℃条件下放置14 d,检测cTnI抗原放置前后的浓度变化,验证其储存稳定性。结果纯化的cTnI和cTnc重组蛋白的SDSPAGE纯度均达90%以上。与对照抗原(8Ic63二元复合抗原)比较,cTnI-cTnc复合蛋白与抗体反应信号较强,且能够同时被cTnI和cTnc抗体识别;经37℃热加速试验后,cTnI单体蛋白浓度降低约80%,而cTnI-cTnc复合蛋白的浓度变化幅度在±15%间。结论制备的cTnI-cTnc二元复合蛋白具有良好的抗原反应性和储存稳定性,为下一步制备反应性良好和储存稳定的cTnI检测质控校准品提供了可靠的原料。

关键词：心肌肌钙蛋白I 心肌肌钙蛋白c 大肠埃希菌复合抗原抗原反应性储存稳定性