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三七皂苷Fc对SD大鼠心室肌细胞钠离子通道电流的影响

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中国现代应用药学 2022年第9期39卷 1162-1167页

作者：钟飞李梦婷杜娅娅许正新扬州大学医学院药学系江苏扬州225000 江苏省重点动物传染病和人畜共患病预防控制共创中心江苏扬州225001 江苏省中西医结合老年病防治重点实验室江苏扬州225001 江苏省非编码RNA基础与临床转化重点实验室江苏扬州225009

目的探究三七皂苷Fc(notoginsenoside Fc,N-Fc)对SD大鼠心室肌细胞钠离子通道电流的影响。方法使用Langendorff恒温恒压灌流装置通过酶解法急性分离SD大鼠心室肌细胞,采用标准全细胞膜片钳技术观察并记录不同浓度的N-Fc对大鼠心室肌细... 详细信息

目的探究三七皂苷Fc(notoginsenoside Fc,N-Fc)对SD大鼠心室肌细胞钠离子通道电流的影响。方法使用Langendorff恒温恒压灌流装置通过酶解法急性分离SD大鼠心室肌细胞,采用标准全细胞膜片钳技术观察并记录不同浓度的N-Fc对大鼠心室肌细胞钠通道电流(I_(Na))及其动力学特征的影响。结果5μmol·L^(–1)的N-Fc对I_(Na)无明显影响,随着药物浓度的增加,10,20,50μmol·L^(–1)的N-Fc可使钠峰值电流由给药前的(–87.49±3.40)pA/pF依次下降为(–62.91±2.37),(–49.30±1.27),(–34.68±3.21)pA/pF(P心室肌细胞的I_(Na),并能显著影响其激活、失活及失活后恢复的动力学特征。

关键词：三七皂苷Fc 膜片钳钠通道心室肌细胞 SD大鼠

2型糖尿病大鼠心室肌细胞离子通道功能和表达变化

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中国病理生理杂志 2021年第2期37卷 210-217页

作者：刘沛明郑丹琳张利周梦园练飞鸿邝素娟杨慧饶芳邓春玉华南理工大学医学院广东广州510006 华南理工大学生物科学与工程学院广东广州510006 广东省人民医院(广东省医学科学院)医学研究部临床药理重点实验室广东广州510080

目的:探讨2型糖尿病大鼠心室肌细胞离子通道电流及其相关蛋白表达的改变。方法:采用Zucker糖尿病肥胖(Zucker diabetic fatty,ZDF)大鼠建立2型糖尿病大鼠模型,Zucker瘦型(Zucker lean,ZL)大鼠为对照组。采用急性酶解法分离大鼠单个心室... 详细信息

目的:探讨2型糖尿病大鼠心室肌细胞离子通道电流及其相关蛋白表达的改变。方法:采用Zucker糖尿病肥胖(Zucker diabetic fatty,ZDF)大鼠建立2型糖尿病大鼠模型,Zucker瘦型(Zucker lean,ZL)大鼠为对照组。采用急性酶解法分离大鼠单个心室肌细胞,采用全细胞膜片钳技术记录其动作电位、L型钙通道电流(I_(Ca-L))及瞬时外向钾电流(I_(to))的变化;提取大鼠心肌组织蛋白,采用Western blot检测心肌细胞肥大标志物β-肌球蛋白重链(β-myosin heavy chain,β-MHC)和心房钠尿肽(atrial natriuretic peptide,ANP),以及L型钙通道(Cav1.2)和钾通道(Kv4.3)的蛋白表达水平。结果:用高脂饮食诱导ZDF大鼠成功建立2型糖尿病模型;与ZL大鼠相比,ZDF大鼠心室肌细胞的动作电位时程显著延长,I_(Ca-L)和I_(to)密度显著降低[峰值分别为(−5.96±0.37)pA/pF vs(−4.92±0.30)pA/pF,(12.43±0.86)pA/pF vs(7.48±0.58)pA/pF,均P肌细胞肥大,心室肌细胞动作电位时程延长,I_(Ca-L)和I_(to)密度及其相关蛋白表达水平降低,提示糖尿病大鼠心室肌细胞发生电生理重构。

关键词： 2型糖尿病心室肌细胞离子通道电流电生理重构

异牡荆素对大鼠心室肌细胞瞬时外向钾电流的影响

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中国中药杂志 2017年第24期42卷 4864-4869页

作者：任静娜饶本龙马宏昕沙毛毛匡怡许正新扬州大学医学院药学系江苏扬州225001

探究异牡荆素对大鼠心室肌细胞瞬时外向钾通道电流的影响。该实验采用MTT检测法探究异牡荆素的安全范围,结果显示该药物的IC5010~30μmol·L^(-1),而膜片钳实验所选用的药物浓度1~3μmol·L^(-1)均在该安全范围之内。此外,采用主动脉逆... 详细信息

探究异牡荆素对大鼠心室肌细胞瞬时外向钾通道电流的影响。该实验采用MTT检测法探究异牡荆素的安全范围,结果显示该药物的IC5010~30μmol·L^(-1),而膜片钳实验所选用的药物浓度1~3μmol·L^(-1)均在该安全范围之内。此外,采用主动脉逆行灌流单酶解法得到单个心室肌细胞,应用全细胞膜片钳技术引导、记录大鼠心室肌细胞瞬时外向钾电流(Ito)并分析在给予异牡荆素(IV)前后该电流特征的变化。当IV终浓度低于0.1μmol·L^(-1)时,其对Ito无明显影响,但随着浓度的升高(≥0.3μmol·L^(-1)),Ito峰值逐渐降低[由给药前的(32.32±2.9)p A/p F分别降为(25.83±4.3)p A/p F,1μmol·L^(-1)IV和(19.51±3.5)p A/p F,3μmol·L^(-1)IV],呈现出浓度依赖性抑制现象。在1~3μmol·L^(-1)浓度内,IV使Ito的I-V曲线明显下移。激活曲线结果显示,IV可使最大半数激活电位(V1/2)向正值方向移动[给药前V1/2为(19.59±1.6)m V,给药后V1/2分别升高(22.81±1.7)m V,1μmol·L^(-1)IV;(28.86±1.4)m V,3μmol·L^(-1)IV],同时激活曲线右移。Ito稳态失活曲线的最大半数失活电位(V1/2):给药组(-61.81±1.3)m V,1μmol·L^(-1)和(-71.50±1.4)m V,3μmol·L^(-1)较给药前(-51.43±0.99)m V显著降低。而就失活后恢复曲线的失活时间常数(τ)而言,给药后的τ较给药前明显升高[给药前(94.89±0.73)ms;给药后(118.5±1.5)ms,1μmol·L^(-1);(162.4±1.4)ms,3μmol·L^(-1)],IV使Ito的失活后恢复曲线右移,提示其能延长瞬时外向钾通道的失活后恢复时间。异牡荆素对大鼠心室肌细胞的Ito具有明显的抑制作用。

关键词：乳鼠异牡荆素心室肌细胞膜片钳 2相折返瞬时外向钾电流

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大蒜素对心力衰竭兔心室肌细胞的作用

中华急诊医学杂志 2018年第7期27卷 729-734页

作者：柯俊李泱陈锋朱超王晓萍陈本敦李世峰龚峥福建省立医院急诊内科福建医科大学省立临床医学院福建省急救中心福建省急诊医学研究所福州350001 解放军总医院心内科北京100853

目的观察大蒜素（allicin,All）对心力衰竭兔心室肌细胞动作电位和L-型钙电流的作用，探讨药物抗心衰后心律失常的机制。方法选取雄性新西兰大白兔45只，随机（随机数字法）分为3组：假手术组（sham组）、心衰组（HF组）、心衰＋大蒜素... 详细信息

目的观察大蒜素（allicin,All）对心力衰竭兔心室肌细胞动作电位和L-型钙电流的作用，探讨药物抗心衰后心律失常的机制。方法选取雄性新西兰大白兔45只，随机（随机数字法）分为3组：假手术组（sham组）、心衰组（HF组）、心衰＋大蒜素组（HF＋All组），每组15只。采用腹主动脉缩窄联合主动脉瓣反流术建立兔心衰模型，利用双酶法消化得到单个心室肌细胞，全细胞膜片钳记录动作电位和钙电流。观察心衰时和All对动作电位、L-型钙电流和门控机制的作用。数据采用pCLAMP10.2处理，用SPSS17.0软件进行统计学分析，多组间数据比较用ANOVA方差分析，组间两两比较用SNK-q检验。结果（1）心衰时，动作电位时程（APD）模型延长，APD50从sham组（93.4±4.7）ms延长至HF组（115.5±6.2）ms（n=15,P〈0.01），应用All30μmol/L后，降低至（105.2±5.5）ms（n=15,P〈0.05）。（2）心衰时，钙电流密度增加，在0mV去极化时，峰电流密度从sham组细胞的（-8.4±0.6）pA/pF增加至（-15.1±1.1）pA/pF（n=15，P〈0.01）。灌流All30μmol/L后，使电流密度降低为（-10.1±0.8）pA/pF（n=15，P〈0.01），且此效应呈电压依赖性和浓度依赖性。（3）门控机制研究显示，All降低心衰后钙电流密度的主要机制是加速心衰时通道稳态失活过程，同时减缓通道失活后恢复动力学。结论大蒜素减少心衰动物模型的心室肌细胞钙电流，提示可能成为潜在的心衰时抗心律失常药物。

关键词：大蒜素心力衰竭兔心室肌细胞动作电位 L-钙电流

大豆苷元对大鼠心室肌细胞I_(Na)的影响

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中国药理学通报 2019年第1期35卷 71-77页

作者：匡怡沙毛毛马宏昕任静娜饶本龙薛文君王嘉仪许正新扬州大学医学院药理学教研室江苏扬州225000

目的观察大豆苷元对大鼠心室肌细胞钠通道电流(I_(Na))的影响,探讨其抗心律失常的机制。方法 MTT比色法检测大豆苷元对心室肌细胞活力的影响;单酶解法分离大鼠单个心室肌细胞;全细胞膜片钳技术观察、记录、分析大豆苷元给药前后大鼠心... 详细信息

目的观察大豆苷元对大鼠心室肌细胞钠通道电流(I_(Na))的影响,探讨其抗心律失常的机制。方法 MTT比色法检测大豆苷元对心室肌细胞活力的影响;单酶解法分离大鼠单个心室肌细胞;全细胞膜片钳技术观察、记录、分析大豆苷元给药前后大鼠心室肌细胞I_(Na)及其动力学特征的变化。结果 MTT实验表明,大豆苷元的IC_(50) 30～100μmol·L^(-1),由此选定用于后续实验的药物浓度为0.3～10μmol·L^(-1)。膜片钳实验结果表明,当给予终浓度为0.3、1、3、10μmol·L^(-1)大豆苷元后,药物对I_(Na)呈浓度依赖性抑制现象;大豆苷元0.3μmol·L^(-1)时对I_(Na)作用的时间过程也具有一定影响,随时间推移缓慢减小;1、3、10μmol·L^(-1)大豆苷元使I-U曲线上移;在此同等条件下,激活曲线向去极化方向移动、稳态失活曲线向超极化方向移动和失活后恢复曲线的τ值延长。结论大豆苷元对大鼠心室肌Na^+通道有明显的抑制作用,这可能是其抗心律失常的机制之一。

关键词：乳鼠大豆苷元全细胞膜片钳技术钠离子通道心室肌细胞心律失常

抗钠钙交换体特异位点抗体对大鼠单个心室肌细胞钙瞬变的影响

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中国免疫学杂志 2017年第12期33卷 1795-1798页

作者：白晓洁吴博威山西医科大学生理学系细胞生理学山西省重点实验室太原030001

目的:观察抗钠钙交换体(Sodium calcium exchanger,NCX)特异位点_(124)HNFTAGDLGPSTIVGSAAFNMF_(145)抗体对正常成年大鼠心室肌细胞钙瞬变的影响。方法:利用Langendorff灌流方法,分离得到单个大鼠心室肌细胞;负载荧光染料Fura-2/AM和2%牛血清白蛋白后,利用离子影像分析系统记录激发光为340 nm和380 nm时心室肌细胞成对系列图像,计算钙瞬变峰值(F340/F380)、细胞钙恢复90%时程(TR_(90))以及钙敏感性(F340/F380与细胞缩短数值的比值)。结果:抗NCX特异位点抗体可以增加正常成年大鼠单个心室肌细胞F340/F380,缩短TR_(90),对钙敏感性无显著影响;尼卡地平和KB-R7943分别预处理心室肌细胞可以抵消大部分抗体对F340/F380和TR_(90)的增加或缩短效应,联合使用二者预处理心室肌细胞后,该抗体对钙瞬变不再有显著影响。结论:抗NCX特异位点_(124)HNFTAGDLGPSTIVGSAAFNMF_(145)抗体可以增加心室肌细胞钙瞬变峰值,同时缩短细胞钙恢复时程,这种效应主要与其激动L-型Ca^(2+)通道和NCX的作用有关。

关键词： Na+-Ca2+交换体抗体钙瞬变心室肌细胞 L-型Ca2+通道

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荭草苷对大鼠心室肌细胞钠通道的影响

中国现代应用药学 2019年第18期36卷 2256-2261页

作者：王秀秀邹丽钱薇顾有为李立明许正新扬州大学医学院药理教研室江苏扬州225000 江苏省重点动物传染病和人畜共患病预防控制共创中心江苏扬州225001 江苏省中西医结合老年病防治重点实验室江苏扬州225001 江苏省非编码RNA基础与临床转化重点实验室江苏扬州225009

目的研究荭草苷(orientin,Ori)对大鼠心室肌细胞钠通道电流(INa)的影响,探讨Ori在离子通道层面的抗心律失常机制。方法使用Langendorff恒温恒压灌流装置、单酶解消化法分离大鼠心室肌细胞,应用全细胞膜片钳技术记录、观察不同浓度Ori作... 详细信息

目的研究荭草苷(orientin,Ori)对大鼠心室肌细胞钠通道电流(INa)的影响,探讨Ori在离子通道层面的抗心律失常机制。方法使用Langendorff恒温恒压灌流装置、单酶解消化法分离大鼠心室肌细胞,应用全细胞膜片钳技术记录、观察不同浓度Ori作用前后大鼠心室肌细胞钠通道电流(INa)的变化。结果低于2μmol·L^-1的Ori对INa无明显影响,3,10,30μmol·L^-1的Ori使INa的I-V曲线显著上移,峰值钠电流(INa-Peak)由给药前的(-81.49±3.9)pA/pF依次变为(-74.38±4.1)pA/pF,(-63.05±2.8)pA/pF和(-55.35±3.2)pA/pF;Ori使激活曲线右移、失活曲线左移,失活后恢复曲线显著右移,最大半数激活电位(V1/2-ac)由给药前的(-53.66±4.12)mV分别变为(-44.64±1.9)mV,(-38.95±1.7)mV和(-30.21±1.5)mV;最大半数失活电位(V1/2-in)由给药前的(-51.68±0.76)mV分别变为(-60.17±1.5)mV,(-68.51±1.4)mV和(-75.22±1.37)mV,恢复时间(τ)由给药前的(18.38±0.84)ms分别变为(24.53±1.4)ms,(35.25±1.3)ms和(68.75±1.58)ms。结论Ori能浓度依赖性抑制大鼠心室肌细胞的INa,并能显著影响其激活、失活及失活后恢复的动力学特征。

关键词：荭草苷全细胞膜片钳心室肌细胞钠通道电流心律失常

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五味子乙素对大鼠心室肌细胞钠电流的影响

中成药 2019年第11期41卷 2608-2613页

作者：邹丽王秀秀钱薇杨蕴智葛焱许正新扬州大学医学院江苏扬州225000 江苏省重点动物传染病和人畜共患病预防控制共创中心江苏扬州225001 江苏省中西医结合老年病防治重点实验室江苏扬州225001 江苏省非编码RNA基础与临床转化重点实验室江苏扬州225009

目的探讨五味子乙素对大鼠心室肌细胞钠电流(INa)的影响。方法应用Langendorff主动脉逆向灌流、单酶解法获得单个大鼠心室肌细胞,采用全细胞膜片钳技术记录不同浓度的五味子乙素对大鼠心室肌细胞膜上INa的影响。结果五味子乙素(>3μmol... 详细信息

目的探讨五味子乙素对大鼠心室肌细胞钠电流(INa)的影响。方法应用Langendorff主动脉逆向灌流、单酶解法获得单个大鼠心室肌细胞,采用全细胞膜片钳技术记录不同浓度的五味子乙素对大鼠心室肌细胞膜上INa的影响。结果五味子乙素(>3μmol/L)对INa可产生显著抑制作用(P心室肌细胞INa,对其激活、失活和失活后恢复动力学特征均有影响。

关键词：五味子乙素心室肌细胞膜片钳钠通道

胰高血糖素样肽-1抑制高糖诱导的新生大鼠心室肌细胞氧化应激效应

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生理学报 2011年第4期63卷 387-395页

作者：边云飞王冬雪杨慧宇肖传实山西医科大学第二医院心内科太原030001

本文旨在观察胰高血糖素样肽-1（glucagon like peptide-1,GLP-1）对高糖所致新生大鼠心室肌细胞氧化应激的影响,并探讨PI3K-Akt通路在其中所起的作用。将酶消化法分离的经α-肌动蛋白免疫荧光法鉴定的原代培养72~96h的新生大鼠心室肌... 详细信息

本文旨在观察胰高血糖素样肽-1（glucagon like peptide-1,GLP-1）对高糖所致新生大鼠心室肌细胞氧化应激的影响,并探讨PI3K-Akt通路在其中所起的作用。将酶消化法分离的经α-肌动蛋白免疫荧光法鉴定的原代培养72~96h的新生大鼠心室肌细胞分为5组：正常对照组、高糖组、高糖＋GLP-1组、高糖＋GLP-1＋LY294002（PI3K-Akt通路的抑制剂）组、高渗对照组。采用硫代巴比妥酸显色法测定细胞上清液中丙二醛（malonaldehyde,MDA）含量,用黄嘌呤氧化酶法测定细胞上清液中超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）的活性,运用PCR凝胶电泳检测NADPH P47phox亚基mRNA的变化,运用荧光显微镜及流式细胞术检测心室肌细胞内的ROS含量,运用流式细胞术及DNAladder法检测心室肌细胞的凋亡,Western blot检测各组心肌细胞Akt磷酸化水平。结果显示：（1）与正常对照组相比,高糖组细胞生长状态较差,搏动频率减慢甚至消失,细胞凋亡率显著增加,DNA ladder呈现凋亡独有的＂梯状图谱＂,胞浆MDA水平增高,上清液中SOD活性下降,心肌细胞内ROS活性明显增高,NADPH P47phox亚基mRNA表达增加,Akt磷酸化水平降低,差异有统计学意义（P〈0.05）;（2）葡萄糖浓度为25mmol/L的DMEM中加入终浓度10nmol/L的GLP-1培养72h后,与高糖组相比,细胞搏动频率较快,凋亡率明显减少,DNA梯状条带消失,接近正常基因组的DNA带形,MDA水平明显下降,SOD活性明显升高,心肌细胞NADPH P47phox亚基mRNA表达明显降低,Akt磷酸化水平升高,差异有统计学意义（P〈0.05）;PI3K-Akt通路的抑制剂LY294002可拮抗GLP-1对高糖所致心室肌细胞氧化应激损伤的保护作用,差异有统计学意义（P〈0.05）。以上结果提示,GLP-1可以逆转高糖所致的心室肌细胞氧化应激损伤及凋亡,对心室肌细胞起保护作用;PI3K-Akt通路的抑制剂LY294002可以阻断GLP-1对心室肌的保护作用,提示PI3K-Akt通路是GLP-1发挥保护作用的途径之一。

关键词：新生大鼠心室肌细胞高糖胰高血糖素样肽-1 PI3K信号转导途径 LY294002