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德国小蠊变应原Bla g 2蛋白变复性的荧光光谱研究

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光谱学与光谱分析 2006年第12期26卷 2254-2257页

作者：朱健琦刘志刚黄海珍朱永烽徐宏深圳大学生命科学学院广东深圳518060 中国科学院应用化学研究所电分析化学国家重点实验室吉林长春130022

包涵体中的重组蛋白经抽提后可以在变性状态下纯化,而纯化后的复性过程是基因工程下游处理的重要环节。通过对变应原Bla g 2蛋白复性前后荧光光谱的比较和分析、变性剂(尿素和SDS)对复性后Blag 2蛋白的荧光滴定实验、以及复性后Bla g 2... 详细信息

包涵体中的重组蛋白经抽提后可以在变性状态下纯化,而纯化后的复性过程是基因工程下游处理的重要环节。通过对变应原Bla g 2蛋白复性前后荧光光谱的比较和分析、变性剂(尿素和SDS)对复性后Blag 2蛋白的荧光滴定实验、以及复性后Bla g 2在不同pH下的荧光光谱分析,推断出Bla g 2蛋白分子在不同环境下构象的变化及其光谱学特征,初步建立了一种新的检测重组变应原蛋白变复性的光谱实验方法。

关键词：德国小蠊变应原 Bla g 2 变性复性荧光光谱

真核表达与原核表达的德国小蠊变应原Bla g 2蛋白结构的光谱学研究

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光谱学与光谱分析 2006年第5期26卷 879-883页

作者：刘志刚朱健琦黄海珍徐宏深圳大学生命科学学院广东深圳518060 中国科学院长春应用化学研究所电分析化学国家重点实验室吉林长春130022

在基因工程技术中,采用原核表达系统获得的重组蛋白是以包涵体的形式存在,在细胞内聚集成无生物活性的不溶性颗粒,而采用真核表达系统收获的蛋白已经是经过正确的体内折叠的活性蛋白。文章分别用真核与原核表达系统表达重组变应原,通过... 详细信息

在基因工程技术中,采用原核表达系统获得的重组蛋白是以包涵体的形式存在,在细胞内聚集成无生物活性的不溶性颗粒,而采用真核表达系统收获的蛋白已经是经过正确的体内折叠的活性蛋白。文章分别用真核与原核表达系统表达重组变应原,通过对不同来源目的蛋白的荧光光谱和CD谱的比较和分析,对真核系统与原核系统表达出的Bla g2蛋白的高级构象进行研究,阐明了Bla g2在溶液中的二级结构,并推断出其三级结构组成类型。

关键词：德国小蠊变应原 Bla g 2 真核表达原核表达荧光光谱 CD谱

德国小蠊主要变应原Bla g 2在毕赤酵母菌中的表达

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2007年第2期25卷 120-123页

作者：刘志刚何毅华深圳大学过敏反应与免疫学研究所深圳518060

目的在毕赤酵母菌(Pichia pastoris)中表达德国小蠊主要变应原Blag2,以获得其可溶性蛋白。方法根据已知的Bla g 2基因序列设计带有酶切位点的引物。PCR扩增德国小蠊变应原Blag2基因,经酶切后将该基因连接到毕赤酵母真核表达载体pGAPZaA... 详细信息

目的在毕赤酵母菌(Pichia pastoris)中表达德国小蠊主要变应原Blag2,以获得其可溶性蛋白。方法根据已知的Bla g 2基因序列设计带有酶切位点的引物。PCR扩增德国小蠊变应原Blag2基因,经酶切后将该基因连接到毕赤酵母真核表达载体pGAPZaA,获重组质粒pGAPZaA-Blag2,该重组质粒线性化后,经电转化法转化毕赤酵母GS115,用PCR筛选出重组子并在YPD培养基中表达。用Ni2+亲和层析法纯化重组蛋白Bla g2,用蛋白质印迹(Western blotting)分析其免疫学活性。结果重组质粒pGAPZaA-Blag2转化毕赤酵母GS115后进行表达,十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS- PAGE)分析显示,重组蛋白Blag2表达产物以可溶性分子形式存在,相对分子质量(Mr)为45 000。培养3 d的表达量占上清总蛋白的50％。表达产物重组蛋白Blag2经Ni2+亲和层析纯化后,Western blotting分析,在约Mr 45 000处有1条明最的特异性条带,该蛋白具有免疫学活性。结论获得了真核表达的德国小蠊主要变应原重组蛋白Blag2,该蛋白以可溶性蛋白的形式分泌到培养液中,避免了原核表达的变复性过程。

关键词：德国小蠊 Bla g 2 变应原毕赤酵母表达免疫学鉴定

德国小蠊重组变应原(rBla g 2)治疗过敏性哮喘小鼠的实验研究

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2009年第2期27卷 115-119页

作者：沈小英朱清仙刘志刚李湘辉深圳大学医学院过敏反应与免疫学研究所深圳518060 南昌大学基础医学院南昌330006

目的探讨重组德国小蠊变应原(rBlag2)治疗过敏性哮喘小鼠的效果及机制。方法18只BALB/c小鼠随机均分为阴性对照组(A组)、哮喘模型组(B组)和重组蛋白rBlag2治疗组(C组)。B、C两组分别腹腔注射经Al(OH)3佐剂乳化的重组蛋白rBlag2,剂量为50... 详细信息

目的探讨重组德国小蠊变应原(rBlag2)治疗过敏性哮喘小鼠的效果及机制。方法18只BALB/c小鼠随机均分为阴性对照组(A组)、哮喘模型组(B组)和重组蛋白rBlag2治疗组(C组)。B、C两组分别腹腔注射经Al(OH)3佐剂乳化的重组蛋白rBlag2,剂量为50mg/(只·次),共3次,每次间隔1周。A组以50ml生理盐水代替变应原。末次致敏后2周,进行免疫治疗,C组腹腔注射rBlag2,100mg/(只·次),每两天1次,连续8次。A、B两组以PBS代替变应原。末次治疗后1周,将小鼠麻醉,B、C两组每鼠每天滴鼻50mgrBlag2,连续7d。A组以PBS代替变应原滴鼻。于最后1次滴鼻后24h检测各项指标:各组小鼠气道高反应性,支气管肺泡灌洗液(BALF)中细胞总数和细胞种类以及血清中rBlag2抗原特异性IgE和IgG2a的变化;HE染色观察小鼠肺组织的改变,免疫组化检测肺嗜酸粒细胞(EOS)B淋巴细胞瘤/白血病-2(Bcl-2)的表达。结果与B组相比,C组气道高反应检测中扩大间隙(Penh)值下降(P<0.05);血清中rBlag2特异性IgE降低,IgG2a增加(P<0.01);C组EOS细胞阳性数量明显减少,且Bcl-2蛋白阳性表达较弱。B组BALF的细胞总数和EOS数分别为(24.60±15.08)×105个/ml和(22.20±3.76)×105个/ml,而C组细胞总数[(14.30±4.95)×105个/ml]和EOS数[(5.20±1.56)×105个/ml]显著减少(P<0.01)。B组肺部气管周围炎性细胞聚集,肺组织上皮损伤,组织水肿,而C组肺部变应性炎症明显减轻。与A组相比,C组各项检测指标接近A组。结论rBlag2对小鼠过敏性哮喘有治疗作用,可能是EOS细胞凋亡在其中起重要作用。

关键词：德国小蠊重组变应原哮喘嗜酸粒细胞 B淋巴细胞瘤,白血病-2

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德国小蠊全基因组中微卫星分布规律

昆虫学报 2015年第10期58卷 1037-1045页

作者：王晨杜联明李鹏杨茗羽李午佼沈咏梅张修月岳碧松四川大学生命科学学院生物资源与生态环境教育部重点实验室成都610064 药用美洲大蠊四川省重点实验室成都610081

【目的】分析德国小蠊Blattella germanica全基因组中微卫星的数量和分布规律,并对外显子中含有微卫星的基因进行功能注释。【方法】使用微卫星搜索软件查找德国小蠊基因组中微卫星的数量、重复次数以及所有微卫星的位置信息,编写Pytho... 详细信息

【目的】分析德国小蠊Blattella germanica全基因组中微卫星的数量和分布规律,并对外显子中含有微卫星的基因进行功能注释。【方法】使用微卫星搜索软件查找德国小蠊基因组中微卫星的数量、重复次数以及所有微卫星的位置信息,编写Python脚本对微卫星进行定位,并通过Blast2Go和KASS程序对外显子中含有微卫星的基因进行功能注释。【结果】共找到1~6碱基重复类型的微卫星序列604 386个,总长度15 301 255 bp,约占全基因组序列(约2.04 Gb)的0.75%,分布频率为1/3.37 kb,微卫星序列的长度主要在12~60个碱基长度范围内。不同类型的微卫星中,三碱基(226 876)重复类型微卫星数量最多,占微卫星总数的37.54%;四碱基(150 355)重复类型次之,占微卫星总数的24.88%;其余依次是单碱基(141 167)、二碱基(60 877)、五碱基(21 570)和六碱基(3 541)重复类型,分别占微卫星总数的23.36%,10.07%,3.57%和0.59%。出现最多的重复拷贝类别有:ATT,AAT,A,T,AAAT,ATTT和AT,共411 789个微卫星,占微卫星总数的68.13%,这7种类别的微卫星数量均大于30 000个。共有2 372个微卫星在外显子上,它们分别位于1 481个基因上。GO功能注释结果表明,其中434条归类于细胞组分(cellular component),402条归类于分子功能(molecular function),660条归类于生物学过程(biological process)。KEGG通路分析结果表明,与新陈代谢相关的基因最多(380个),其次是与机体系统相关的(276个),与遗传信息进程相关的基因最少(92个)。【结论】本研究为进一步系统深入分析德国小蠊微卫星功能及微卫星分子标记筛选打下了基础。

关键词：德国小蠊微卫星生物信息学功能注释基因组外显子

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德国小蠊成、幼虫自动分离器的研制

中国媒介生物学及控制杂志 2007年第3期18卷 196-197页

作者：岳永杰孙养信阮春来陕西省疾病预防控制中心鼠布生防科西安710054

目的将成虫和幼虫在自然状态下自动分离。方法将附着于锯齿形纸片上的德国小蠊成、幼虫连同纸片一起放入分离器一侧的缸中,另一侧缸中放入食物和水进行引诱。结果第4天蜚蠊的成、幼虫分离率在50%以上,第6天可达90%以上。结论自然状态下... 详细信息

目的将成虫和幼虫在自然状态下自动分离。方法将附着于锯齿形纸片上的德国小蠊成、幼虫连同纸片一起放入分离器一侧的缸中,另一侧缸中放入食物和水进行引诱。结果第4天蜚蠊的成、幼虫分离率在50%以上,第6天可达90%以上。结论自然状态下,该分离器依靠食物和水的引诱作用,能够将德国小蠊成、幼虫自动分离,所获幼虫龄期基本一致。

关键词：德国小蠊成虫幼虫分离器

德国小蠊的抗药性及多功能氧化酶在抗性中的作用

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浙江农业大学学报 1999年第3期25卷 303-306页

作者：张大羽程家安吴慧明毛杭军浙江大学植物保护系浙江杭州310029

通过敏感性测定、增效作用试验和酶活力测定，分析了德国小蠊对拟除虫菊酯类药剂的抗药性以及多功能氧化酶在抗药性中的作用，结果表明采自杭州的德国小蠊品系对二氯苯醚菊酯、溴氰菊酯和氯氰菊酯的抗性系数分别是敏感品系的６７．１... 详细信息

通过敏感性测定、增效作用试验和酶活力测定，分析了德国小蠊对拟除虫菊酯类药剂的抗药性以及多功能氧化酶在抗药性中的作用，结果表明采自杭州的德国小蠊品系对二氯苯醚菊酯、溴氰菊酯和氯氰菊酯的抗性系数分别是敏感品系的６７．１倍，１８．１倍和１１．８倍，利用多功能氧化酶的抑制剂── 氧化胡椒基丁醚作为增效剂测定抗性品系对二氯苯醚菊酯的增效作用，增效３．６９倍，离体酶活力测定的结果表明，抗性品系中多功能氧化酶活力明显高于敏感品系，由此认为，德国小蠊的杭州品系已对拟除虫菊酯药剂产生了抗药性，多功能氧化酶活力增强是导致德国小蠊抗药性产生和发展的重要原因。

关键词：德国小蠊抗药性多功能氧化酶

德国小蠊精氨酸激酶基因的克隆、表达及免疫活性测定

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2011年第3期29卷 191-194页

作者：闫浩夏立新陈家杰刘娇邓志琼易海涛刘小平深圳大学医学院过敏反应与免疫学研究所深圳518060 中南大学湘雅二医院长沙410011

目的克隆德国小蠊精氨酸激酶(arginine kinase,AK)全长基因,表达、纯化重组AK蛋白,并研究蛋白的免疫反应性。方法提取德国小蠊总RNA,反转录为cDNA,设计特异性引物,PCR克隆德国小蠊AK片段,将测序正确的目的片段克隆至原核表达载体pET-28a... 详细信息

目的克隆德国小蠊精氨酸激酶(arginine kinase,AK)全长基因,表达、纯化重组AK蛋白,并研究蛋白的免疫反应性。方法提取德国小蠊总RNA,反转录为cDNA,设计特异性引物,PCR克隆德国小蠊AK片段,将测序正确的目的片段克隆至原核表达载体pET-28a中,在大肠埃希菌(***)BL21(DE3)中用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,通过镍离子亲和层析纯化目的蛋白。用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测目的蛋白表达和纯化结果,用蛋白质印迹(Western blotting)分析重组AK蛋白的免疫反应性。结果德国小蠊AK基因开放阅读框全长为1071bp,编码356个氨基酸,GenBank登录号为FJ514482。与GenBank中已登录的德国小蠊序列(登录号为EU429466)比对,同源性达97.2%。重组质粒pET-28a-AK在*** BL21(DE3)中获得高效表达,重组蛋白相对分子质量(Mr)约为45 000,主要以可溶性形式表达,经亲和层析获得目的蛋白。Western blotting分析结果表明,重组AK蛋白可被过敏性患者血清识别,免疫反应性良好。结论成功获得德国小蠊精氨酸激酶全长基因,重组AK蛋白具有良好的免疫反应性。

关键词：德国小蠊精氨酸激酶过敏原克隆

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德国小蠊触角感器的扫描电镜观察

昆虫知识 2009年第5期46卷 755-760页

作者：刘迅农向群张泽华李照会中国农业科学院植物保护研究所植物病虫害生物学国家重点实验室北京100094 山东农业大学植物保护学院山东泰安271018

用电子显微镜观察德国小蠊Blattella germanica(L.)雌成虫、雄成虫、老熟若虫和低龄若虫的触角,发现其上分布有大量感器,为刺形感器(Ⅰ、Ⅱ型)、锥形感器、毛形感器、弧形感器、帽形感器、边缘感器和椭圆感器。其中刺形感器(Ⅰ、Ⅱ型)... 详细信息

用电子显微镜观察德国小蠊Blattella germanica(L.)雌成虫、雄成虫、老熟若虫和低龄若虫的触角,发现其上分布有大量感器,为刺形感器(Ⅰ、Ⅱ型)、锥形感器、毛形感器、弧形感器、帽形感器、边缘感器和椭圆感器。其中刺形感器(Ⅰ、Ⅱ型)、锥形感器、毛形感器、弧形感器和边缘感器在各种虫态均有分布,帽形感器仅见于成虫触角鞭节上。在各种不同虫态中,雌雄成虫含有所有种类的感器,老熟若虫触角亚节数最多,低龄若虫的各类感器的感毛长度和基部横径普遍较小。

关键词：德国小蠊触角感器扫描电镜形态学分布