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微rna-21-5p靶向调控程序性死亡蛋白4对系统性红斑狼疮患者外周血B细胞增殖与凋亡的影响

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中华风湿病学杂志 2020年第3期24卷 186-191页

作者：魏晓颖魏新平王军涛王学珍河南省商丘市第一人民医院肾病风湿科 476100

目的探讨微rna(rna-21-5p)通过靶向程序性死亡蛋白4(pDCD4)对SLE患者外周血B细胞增殖与凋亡的调控作用.方法选择我院经临床确诊的SLE患者30例,采用梯度离心法提取外周血淋巴细胞(pBL),磁珠法分选B细胞后流式细胞术检测外周血B细胞比例... 详细信息

目的探讨微rna(rna-21-5p)通过靶向程序性死亡蛋白4(pDCD4)对SLE患者外周血B细胞增殖与凋亡的调控作用.方法选择我院经临床确诊的SLE患者30例,采用梯度离心法提取外周血淋巴细胞(pBL),磁珠法分选B细胞后流式细胞术检测外周血B细胞比例;采用电转染法将细胞分为空白对照组、mirna-21-5p阴性对照组、mirna-21-5p Inhibitor组、pDCD4阴性对照组、pDCD4 sirna组.于转染后48 h收集细胞.采用实时荧光定量(RT)-pCR法检测各组细胞mirna-21-5p及pDCD4 mrna的表达水平;采用蛋白质印迹法检测各组细胞pDCD4的蛋白表达;采用双荧光素酶靶标实验验证miR-21-5p和pDCD4的靶向关系;采用流式细胞仪检测各组细胞凋亡情况、采用CCK-8法检测各组细胞的增殖情况;采用蛋白质印迹法和RT-pCR法分别检测各组细胞Fas、FasL、CD40和CD40L的表达水平.采用独立样本t检验对2组间数据进行比较;采用单因素方差分析对多样本实验结果进行统计分析;抗dsDNA抗体阳性率比较采用χ^2检验.结果 SLE患者血清补体[C3 (0.85±0.11)g/L、C4 (0.54±0.09)g/L]较健康对照组[C3(1.16±0.17) g/L、C4(1.57±0.09) g/L]降低(t=7.524,p5;t=38.471,p5),而抗dsDNA抗体(47%)、IgG(15.46±0.75) g/L、IgA (2.68±0.20) g/L较健康对照组抗dsDNA抗体(17%)、IgG(11.95±0.80) g/L、IgA (2.16±0.11) g/L均升高(χ^2=4.427,p5;t=15.218,p5;t=10.125,p5);SLE患者外周血B细胞比例[(6.78±0.29)%]、mirna-21-5p表达水平(7.52±0.59)%较健康对照外周血B细胞比例[(2.03±0.24)%]、mirna-21-5p表达水平(3.60±0.62)均升高(t=59.064,p5;t=19.317,p5),而SLE患者外周血pDCD4基因表达水平(1.54±0.35)较健康对照(4.42±0.42)降低(t=19.126,p5);与空白对照组和mirna-21-5p NC组相比,mirna-21-5p Inhibitor组细胞增殖受到抑制,细胞凋亡比例升高(F=5.244,p5;F=37.903,p5);与空白对照组和pDCD4 NC组相比,pDCD4 sirna组细胞增殖能力增强,细胞凋亡比例减少(F=5.956,p5;F=25.431,p5).双荧光素酶报告基因实验分析结果显示,pDCD4是mirna-21-5p的靶基因.结论 mirna-21-5p可能通过抑制pDCD4的表达促进SLE患者外周血B细胞增殖,导致B细胞凋亡异常.mirna-21-5p可作为SLE治疗新的靶向基因.

关键词：红斑狼疮系统性 B淋巴细胞微rna-21-5p 程序性死亡蛋白4 增殖细胞凋亡

血浆微rna联合检测在前列腺癌中的诊断价值

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海军军医大学学报 2023年第1期44卷 14-20页

作者：蔡鹏吴叶晨陈曦张益萍马少泽朱小琼胡锦新殷建华曹廷虎海军军医大学(第二军医大学)海军医学系海军流行病学教研室上海200433 上海市宝山区中西医结合医院泌尿外科上海201900 安徽医科大学公共卫生学院营养与食品卫生学系合肥230032

目的分析前列腺癌患者血浆mirna的差异表达,探索血浆mirna联合检测在前列腺癌中的诊断潜能。方法应用基因表达汇编数据库获得前列腺癌患者血浆及血清差异表达的mirna,通过最近邻中心分类器曲线下面积优化模型(NCC-AUC)筛选出3个权重最高... 详细信息

目的分析前列腺癌患者血浆mirna的差异表达,探索血浆mirna联合检测在前列腺癌中的诊断潜能。方法应用基因表达汇编数据库获得前列腺癌患者血浆及血清差异表达的mirna,通过最近邻中心分类器曲线下面积优化模型(NCC-AUC)筛选出3个权重最高的mirna;收集上海市宝山区中西医结合医院诊治的45例前列腺癌患者(前列腺癌组)、40例慢性前列腺炎患者(前列腺炎组)和42例健康体检者(健康对照组)血浆样本,采用qpCR对候选血浆mirna表达水平进行检测;应用ROC曲线分析候选mirna单独及联合检测对前列腺癌的诊断价值。结果通过生物信息学分析,获得26个前列腺癌相关的差异表达mirna,经NCC-AUC进一步筛选,mirna-21-5p、mirna-5189-5p和mirna-6780a-5p权重最高,进入临床样本验证阶段。临床验证结果显示,血浆mirna-21-5p水平在健康对照组、前列腺炎组、前列腺癌组中依次升高,3组之间差异有统计学意义(prna-5189-5p水平低于前列腺癌组与健康对照组(p均rna-6780a-5p水平高于前列腺炎组和健康对照组(p均rna-21-5p和mirna-6780a-5p对前列腺癌均有较好的诊断潜能(p均5和0.787,灵敏度分别为95.6%和64.4%,特异度分别为41.5%和81.7%。mirna-21-5p与mirna-6780a-5p联合应用可有效提高对前列腺癌的诊断效能,AUC为0.830,灵敏度和特异度分别为82.2%和74.4%。结论血浆mirna-21-5p和mirna-6780a-5p均有成为前列腺癌诊断标志物的潜能,两者联合检测可提高对前列腺癌的诊断效能。

关键词：前列腺肿瘤微rna-21-5p 微rna-5189-5p 微rna-6780a-5p 诊断

转移性宫颈癌细胞衍生的外泌体miR-21-5p促进宫颈癌侵袭及转移

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新医学 2022年第12期53卷 891-898页

作者：杨翔陈烨郑玮李虎夏红广州市番禺区中心医院妇科广州511040 中山大学附属第一医院妇产科广州510080

目的探讨转移性宫颈癌组织的旁分泌作用对肿瘤细胞扩散的影响。方法选择22例转移性宫颈鳞癌患者的手术标本(癌组织和癌旁组织)和血清标本,以及22名健康体检者的血清标本,采用逆转录-实时荧光定量pCR(RT-qpCR)检测miR-21-5p在癌组织和癌... 详细信息

目的探讨转移性宫颈癌组织的旁分泌作用对肿瘤细胞扩散的影响。方法选择22例转移性宫颈鳞癌患者的手术标本(癌组织和癌旁组织)和血清标本,以及22名健康体检者的血清标本,采用逆转录-实时荧光定量pCR(RT-qpCR)检测miR-21-5p在癌组织和癌旁组织中的表达水平;分别转染miR-21-5p模拟物/抑制剂到宫颈癌SiHa细胞,采用RT-qpCR、细胞集落形成实验、Transwell迁移实验、噻唑蓝(MTT)比色法、蛋白免疫印迹法、双荧光素酶报告分析差异;采用高速离心法提取血清外泌体;采用纳米颗粒跟踪分析(NTA)技术、蛋白免疫印迹法、透射电子显微镜(TEM)对外泌体进行表征鉴定;采用RT-qpCR检测宫颈鳞癌患者和健康体检者血清外泌体中miR-21-5p的表达差异;采用受试者操作特征(ROC)曲线分析血清外泌体中miR-21-5p对肿瘤转移的诊断效能。结果miR-21-5p在转移性宫颈鳞癌组织中表达上调;miR-21-5p过表达能促进宫颈鳞癌SiHa细胞集落形成以及细胞增殖与迁移(p均21-5p可以靶向快速发育生长因子同源蛋白2抗体(SpRY2),对SpYR2的表达水平进行调控;miR-21-5p模拟物转染的SiHa细胞中,磷酸化丝裂原和应激激活的蛋白激酶、磷酸化核糖体S6蛋白激酶、磷酸化原癌基因C-RAF、磷酸化丝裂原活化蛋白激酶(MApK)激酶和磷酸化MApK蛋白的表达均上调(p均5)。miR-21-5p在宫颈鳞癌患者的血清外泌体中上调(p5)。血清外泌体评估宫颈癌转移的ROC曲线下面积为0.9375。结论转移性宫颈鳞癌患者组织中miR-21-5p通过外泌体传递促进肿瘤转移,其机制可能与靶向SpRY2/细胞外调节蛋白激酶/MApK信号通路有关。

关键词：宫颈癌微rna-21-5p 快速发育生长因子同源蛋白2抗体外泌体转移