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微小核糖核酸-548ah 靶向组蛋白去乙酰化酶4对乙型肝炎病毒复制和表达的影响

中华传染病杂志 2016年第5期34卷 274-279页

作者：邢同京徐洪涛陆欣星曹琳叶茂聪江苏省泰州市人民医院感染病科 225300

目的：探讨mirna‐548ah靶向组蛋白去乙酰化酶（HDAC ）4对 HBV复制和表达的影响。方法 mirna‐548ah模拟剂和抑制剂转染 HepG2，2，15细胞，荧光定量 PCR 检测转染前、后mirna‐548ah和 HDAC4 mrna的表达，蛋白质印迹检测 HepG2，2，1... 详细信息

目的：探讨mirna‐548ah靶向组蛋白去乙酰化酶（HDAC ）4对 HBV复制和表达的影响。方法 mirna‐548ah模拟剂和抑制剂转染 HepG2，2，15细胞，荧光定量 PCR 检测转染前、后mirna‐548ah和 HDAC4 mrna的表达，蛋白质印迹检测 HepG2，2，15细胞中 HDAC4蛋白的表达。生物信息学方法分析mirna‐548ah靶基因，构建含候选靶基因 HDAC4的3′UTR双荧光素酶表达载体，检测荧光素酶活性。ELISA测定细胞培养上清液中 HBsAg、HBeAg水平，荧光定量 PCR检测细胞培养上清液中 HBV DNA水平。两组间比较采用两样本均数 t检验，多组间比较采用方差分析并SNK‐q检验。结果在 HepG2，2，15和 HepG2细胞中，mirna‐548ah分别为5．74±0．02和2．96±0．40（t＝11．89，P＜0．01），HDAC4分别为9．38±0．39和18．13±0．34（ t＝29．39， P＜0．01）。转染mirna‐548ah抑制剂可抑制HepG2，2，15细胞中mirna‐548ah的表达（1．01±0．13，t＝15．48，P＜0．01）。与对照组比较，抑制剂组 HepG2，2，15细胞培养上清液中 HBsAg[（6．45±0．46） IU／mL比（2．60±0．20） IU／mL ，t＝7．48，P＜0．01]、HBeAg[（5．49±0．27） NCU／mL比（4．15±0．34） NCU／mL ，t＝3．10，P＜0．05]、HBV DNA[（3．93±0．06） lg拷贝／mL比（2．04±0．07） lg拷贝／mL ，t＝18．89，P＜0．01]水平均明显降低。转染mirna‐548ah模拟剂，HDAC4的表达水平明显降低（2．98±0．94）；转染抑制剂则表达水平明显升高（23．77±6．74），差异有统计学意义（F＝9．34， P＜0．01）。mirna‐548ah模拟剂对HepG2，2，15细胞中HDAC4蛋白表达有显著抑制作用（0．53±0．14比0．23±0．02，t＝3．58， P＝0．02），对psiCHECK‐HDAC4载体荧光素酶活性表达也有显著抑制作用（7．62±0．45比6．65±0．27，t＝3．18， P＝0．03）。结论 mirna‐548ah可通过调控靶基因HDAC4，促进HBV的复制和表达。

关键词：微小rna-548ah 肝炎病毒乙型组蛋白去乙酰化酶-4

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HepG2-hNTCP细胞模型的构建及在mirna-548ah调控乙型肝炎病毒研究中的应用

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中华医院感染学杂志 2021年第8期31卷 1154-1159页

作者：邢同京王学全田雄李阿利周妮浙江省台州医院感染病科浙江台州317000 浙江省台州医院公共科研平台浙江台州317000

目的构建并鉴定表达人钠离子-牛磺胆酸共转运蛋白(hNTCP)的HepG2-hNTCP细胞模型,探讨微小rna-548ah(miR-548ah)对乙型肝炎病毒复制和表达的影响。方法扩增重组慢病毒pWPI-hNTCP-Puro质粒,pWPI-hNTCP-Puro慢病毒感染HepG2细胞,聚合酶链反... 详细信息

目的构建并鉴定表达人钠离子-牛磺胆酸共转运蛋白(hNTCP)的HepG2-hNTCP细胞模型,探讨微小rna-548ah(miR-548ah)对乙型肝炎病毒复制和表达的影响。方法扩增重组慢病毒pWPI-hNTCP-Puro质粒,pWPI-hNTCP-Puro慢病毒感染HepG2细胞,聚合酶链反应(PCR)检测hNTCPmrna的表达水平,共聚焦显微镜检测hNTCP蛋白定位。Lipofectamine转染miR-548ah激动剂、miR-548ah抑制剂及阴性对照至细胞系。酶联免疫吸附测定检测HBsAg和HBeAg的表达水平,荧光定量PCR检测HBVDNA的表达,应用SPSS 17.0对数据进行分析。结果hNTCP mrna在HepG2hNTCP呈高水平表达。共聚焦荧光显微镜观察HepG2hNTCP中的hNTCP蛋白正常表达且主要定位在细胞膜上。与HepG2细胞比较,HBsAg和HBeAg在感染后HepG2-hNTCP细胞5天和7天后的表达水平存在差异,随培养天数呈上升趋势,具有统计学意义(P548ah激动剂组的表达水平升高,差异具有统计学意义(P548ah可促进HBV感染HepG2-hNTCP细胞模型中HBsAg的表达。

关键词：乙型肝炎病毒钠离子-牛磺胆酸共转运蛋白微小rna-548ah HepG2-hNTCP细胞模型

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