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长链非编码rna母系表达基因8靶向微小rna-497-5p调控血管瘤血管内皮细胞的增殖和凋亡

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安徽医药 2021年第9期25卷 1756-1761页

作者：张蕾林莹波乔娟王云璐河南中医药大学护理学院河南郑州450046 广东茂名健康职业学院广东茂名525000

目的探讨长链非编码rna母系表达基因8(MEG8)靶向微小rna(miR)-497-5p对血管瘤血管内皮细胞的增殖和凋亡的影响。方法实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-pCR)检测河南中医药大学第一附属医院2017年1月至2018年6月收集的52例血管瘤组织... 详细信息

目的探讨长链非编码rna母系表达基因8(MEG8)靶向微小rna(miR)-497-5p对血管瘤血管内皮细胞的增殖和凋亡的影响。方法实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-pCR)检测河南中医药大学第一附属医院2017年1月至2018年6月收集的52例血管瘤组织和与其对应的瘤旁正常皮肤组织中MEG8和miR-497-5p的表达水平。血管瘤血管内皮细胞HemEC分为si-NC组、si-MEG8组、miR-NC组、miR-497-5p组、si-MEG8+anti-miR-NC组、si-MEG8+anti-miR-497-5p组。四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT法)检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡率,蛋白质印迹法(Westernblotting)检测细胞周期蛋白D1(cyclinD1)和p21、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)和Bcl相关X(Bax)蛋白的表达水平。双荧光素酶报告基因实验验证MEG8和miR-497-5p的靶向关系。结果与瘤旁正常皮肤组织相比,血管瘤组织中MEG8表达水平[(0.82±0.08)比(0.33±0.03)]升高(p5),miR-497-5p表达水平[(0.34±0.03)比(0.84±0.08)]降低(p5)。与si-NC组比较,si-MEG8组HemEC细胞存活率[(39.61±4.06)%比(103.50±11.04)%]、cyclinD1和Bcl-2蛋白表达降低(p5),凋亡率[(26.57±2.73)%比(8.33±0.85)%]、p21和Bax蛋白表达升高(p5)。与miR-NC组比较,miR-497-5p组HemEC细胞存活率[(48.87±5.09)%比(104.11±10.64)%]、cyclinD1和Bcl-2蛋白表达降低(p5),凋亡率[(21.26±2.45)%比(8.33±0.85)%]、p21和Bax蛋白表达升高(p5)。MEG8和miR-497-5p直接特异性结合。与si-MEG8+anti-miR-NC组比较,si-MEG8+anti-miR-497-5p组HemEC细胞存活率[(86.10±8.81)%比(40.23±4.35)%]、cyclinD1和Bcl-2蛋白表达升高(p5),凋亡率[(15.32±1.67)%比(26.81±2.94)%]、p21和Bax蛋白表达降低(p5)。结论抑制MEG8通过靶向miR-497-5p能够抑制血管瘤血管内皮细胞增殖,促进细胞凋亡,进而遏制血管瘤的发生发展。

关键词：内皮细胞血管瘤母系表达基因8 微小rna-497-5p 细胞增殖凋亡

环状rna肌球蛋白轻链激酶靶向微小rna-497-5p调控结肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭

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安徽医药 2022年第7期26卷 1355-1360页

作者：宋德顺程华青岛市第八人民医院内镜诊疗科山东青岛266100

目的探讨环状rna肌球蛋白轻链激酶(circMYLK)对结肠癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响和可能机制。方法本研究2019年3月至2020年1月进行。实时荧光定量pCR(RT-qpCR)检测检测正常结肠上皮细胞(NCM460)和结肠癌细胞(SW480、SW620、Caco-2)中... 详细信息

目的探讨环状rna肌球蛋白轻链激酶(circMYLK)对结肠癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响和可能机制。方法本研究2019年3月至2020年1月进行。实时荧光定量pCR(RT-qpCR)检测检测正常结肠上皮细胞(NCM460)和结肠癌细胞(SW480、SW620、Caco-2)中circMYLK和微小rna-497-5p(miR-497-5p)表达水平。将circMYLK小干扰rna(si-circMYLK)、miR-497-5p模拟物分别转染SW480细胞,采用细胞计数试剂盒(CCK-8)、Transwell实验分别检测干扰circMYLK或过表达miR-497-5p对SW480细胞增殖、迁移和侵袭的影响。双荧光素酶报告基因实验和RT-qpCR确定circMYLK对miR-497-5p的调控作用。结果与NCM460细胞比较,结肠癌细胞中circMYLK表达(1.00±0.06比3.39±0.23、2.31±0.24、2.98±0.18)显著升高,miR-497-5p表达(1.00±0.08比0.36±0.04、0.63±0.05、0.54±0.05)显著降低(p5)。干扰circMYLK表达后SW480、细胞活力、迁移和侵袭细胞数显著降低(p5)。过表达miR-497-5p后SW480细胞活力、迁移和侵袭细胞数显著降低(p5)。circMYLK靶向负性调控miR-497-5p表达。抑制miR-497-5p表达能够逆转干扰circMYLK对SW480细胞增殖、迁移和侵袭的影响,恢复细胞活力、迁移和侵袭能力(p5)。结论结肠癌细胞中circMYLK呈高表达,干扰circMYLK通过靶向miR-497-5p能够抑制结肠癌细胞增殖、迁移和侵袭。

关键词：肌球蛋白轻链激酶结肠肿瘤微小rna-497-5p 增殖迁移侵袭

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miR-497-5p在前成骨细胞MC3T3-E1分化和矿化中的作用及机制探讨

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上海口腔医学 2023年第1期32卷 17-22页

作者：胡熹罗俊南昌大学第二附属医院口腔医学诊疗中心江西南昌330006 南昌大学附属口腔医院正畸科江西省口腔生物医学重点实验室江西南昌330006

目的:研究微小rna(miR)-497-5p在前成骨细胞MC3T3-E1分化和矿化中的作用,并探讨其相关机制。方法:取第3代MC3T3-E1细胞,分别转染miR-497-5p过表达质粒miR-497-5p mimics、低表达质粒miR-497-5p inhibitor和阴性对照质粒miR-497-5p NC,设为miR-497-5p mimics组、miR-497-5p inhibitor组和miR-497-5p NC组。取不做处理的细胞作为空白组。成骨诱导后14天,检测碱性磷酸酶(ALp)活性;免疫印迹法检测成骨分化相关蛋白骨钙素(OCN)、I型胶原(COL-I)蛋白表达量;茜素红染色法观察矿化情况;免疫印迹法检测Smad泛素化调节因子2(Smurf2)蛋白表达量;双荧光素酶实验验证miR-497-5p与Smurf2的靶向关系。采用SpSS 25.0软件包进行统计学分析。结果:与空白组、miR-497-5p NC组相比,miR-497-5p mimics组ALp活性显著增强,OCN、COL-I蛋白表达量及矿化结节面积构成比显著升高,Smurf2蛋白表达量显著降低(p5);miR-497-5p inhibitor组ALp活性显著减弱,OCN、COL-I蛋白表达量及矿化结节面积构成比显著降低,Smurf2蛋白表达量显著升高(p5);与Smurf2 3’-UTR-WT+miR-497-5p NC组、Smurf2 3’-UTR-MT+miR-497-5p mimics组和Smurf2 3’-UTR-MT+miR-497-5p NC组相比,Smurf2 3’-UTR-WT+miR-497-5p mimics组双荧光素酶活性值显著降低(p5)。结论:过表达miR-497-5p对前成骨细胞MC3T3-E1的分化和矿化具有促进作用,其作用机制可能与负性靶向调控Smurf2蛋白表达有关。

关键词：前成骨细胞微小rna-497-5p 分化矿化

Lncrna GABpB1-AS1靶向miR-497-5p在宫颈癌细胞中的免疫调控作用

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中国临床研究 2022年第9期35卷 1193-1199页

作者：孙清华任婕王亚菲田琴贵州医科大学临床医学院贵州贵阳550004 贵州医科大学附属医院妇科贵州贵阳550004

目的探讨E6、E7可能通过长链非编码rna GA结合蛋白1-AS1(Lncrna GABpB1-AS1)/mirna-497-5p实现对程序性死亡配体1(pD-L1)在人乳头瘤病毒(HpV)16阳性原代宫颈癌细胞株(H16CC)中的免疫调控作用。方法使用免疫共沉淀法(Co-Ip)验证宫颈癌... 详细信息

目的探讨E6、E7可能通过长链非编码rna GA结合蛋白1-AS1(Lncrna GABpB1-AS1)/mirna-497-5p实现对程序性死亡配体1(pD-L1)在人乳头瘤病毒(HpV)16阳性原代宫颈癌细胞株(H16CC)中的免疫调控作用。方法使用免疫共沉淀法(Co-Ip)验证宫颈癌细胞中HpV E6、E7蛋白和pD-L1蛋白是否有直接作用。基于癌症基因组图谱(TCGA)的宫颈癌数据分析hsa-miR-497-5p与预后的关系。构建miR-497-5p mimics和inhibitor转染H16CC后,通过western blot方法检测pD-L1的表达情况;构建E6、E7 sirna,经脂质体转染H16CC,通过qRT-pCR方法检测细胞中Lncrna GABpB1-AS1、miR-497-5p表达的情况,同时构建E6、E7基因表达质粒,在HpV阴性细胞株(HNCC)表达E6、E7,qRT-pCR法检测其细胞中Lncrna GABpB1-AS1、miR-497-5p的表达;通过软件及双荧光素酶活性实验确定miR-497-5p与pD-L1、Lncrna GABpB1-AS1与miR-497-5p有无直接靶向关系。结果 HpV E6、E7和pD-L1蛋白无直接作用;通过TCGA的数据发现hsa-miR-497-5p高表达的宫颈癌患者预后较好;pD-L1的表达与miR-497-5p呈负相关(p5);抑制H16CC细胞株中E6、E7表达后,Lncrna GABpB1-AS1表达下调,miR-497-5p与之反向变化(p5);而过表达HNCC细胞株中E6、E7后,Lncrna GABpB1-AS1表达上调,miR-497-5p表达下调,差异有统计学意义(p5);双荧光素酶活性实验证实miR-497-5p与pD-L1、miR-497-5p与Lncrna GABpB1-AS1存在靶向结合关系。结论 miR-497-5p能抑制pD-L1蛋白的表达水平,E6、E7蛋白与Lncrna GABpB1-AS1表达呈正向调控关系,与miR-497-5p表达呈负向调控关系,Lncrna GABpB1-AS1/miR-497-5p可能介导HpV E6、E7对pD-L1在HpV感染宫颈癌中的免疫调控作用。

关键词：宫颈癌人乳头瘤病毒人乳头瘤病毒16阳性原代宫颈癌细胞株长链非编码rna GA结合蛋白1-AS1 微小rna-497-5p 程序性死亡配体1

miR-497-5p对人宫颈癌细胞增殖的抑制作用及机制

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山东医药 2017年第5期57卷 15-18页

作者：张君高兰阳詹平毛熙光西南医科大学附属医院四川泸州646000

目的探讨miR-497-5p对人宫颈癌细胞(He La)增殖的抑制作用及机制。方法将对数生长期人宫颈癌He La细胞随机分为两部分,第一部分细胞随机分为四组:miR-497-5p mimics NC+IKCa1 3'端非翻译区(3'-URT)野生型双荧光素酶重组质粒载体(IKCa1-... 详细信息

目的探讨miR-497-5p对人宫颈癌细胞(He La)增殖的抑制作用及机制。方法将对数生长期人宫颈癌He La细胞随机分为两部分,第一部分细胞随机分为四组:miR-497-5p mimics NC+IKCa1 3'端非翻译区(3'-URT)野生型双荧光素酶重组质粒载体(IKCa1-wt)转染组、miR-497-5p mimics+IKCa1-wt转染组、miR-497-5p mimics NC+3'-URT突变型双荧光素酶重组质粒载体(IKCa1-mut)转染组、miR-497-5p mimics+IKCa1-mut转染组,分别转染相应质粒48 h,用双荧光素酶报告基因检测系统检测He La细胞荧光素酶活性。第二部分细胞随机分为三组:miR-497-5p mimics转染组、miR-497-5p mimics NC转染组和空白对照组,分别转染相应质粒,用qRT-pCR技术检测细胞IKCa1 mrna表达,Western boltting法检测细胞IKCa1蛋白表达,CCK-8法检测细胞增殖能力。结果第一部分细胞中的miR-497-5p mimics+IKCa1-wt转染组荧光素酶活性较其他三组降低(p均5),其他三组间比较差异无统计学意义(p均>0.05),证实miR-497-5p与IKCa1 3'-URT存在特异性结合位点。第二部分细胞中的miR-497-5p mimics转染组IKCa1 mrna、蛋白的相对表达量较其他两组降低(p均5),其他两组比较差异无统计学意义(p均>0.05)。第二部分细胞培养24、48、72、96 h,miR-497-5p mimics转染组增殖能力均较其他两组降低(p均5),其他两组比较差异无统计学意义(p均>0.05)。结论 miR-497-5p可以通过负向调控IKCa1基因表达以抑制宫颈癌细胞增殖。

关键词：子宫颈癌微小rna-497-5p 中电导钙激活性钾离子通道 IKCa1基因 He La细胞细胞增殖

Lncrna GABpB1-AS1/miR-497-5p轴对宫颈癌细胞增殖和侵袭能力的调控作用

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LncRNA GABPB1-AS1/miR-497-5p轴对宫颈癌细胞增殖和侵袭能力的调...

作者：孙清华贵州医科大学

学位级别：硕士

目的:探讨Lncrna GABpB1-AS1和miR-497-5p在宫颈癌细胞中的表达以及它们之间的互作关系,同时探索Lncrna GABpB1-AS1/miR-497-5p对宫颈癌细胞增殖和侵袭能力的影响。方法:1.通过Lnc Base、Starbase等预测软件,寻找miR-497-5p上游的Lncrna。2.分别采用RT-pCR法检测宫颈癌细胞中GABpB1-AS1和miR-497-5p的表达水平。3.采用gain or loss of function(正反调控)策略,分别上调和下调Lncrna GABpB1-AS1、miR-497-5p,探索它们表达变化对细胞增殖和侵袭能力的影响。4.采用挽救实验进一步探索Lncrna GABpB1-AS1对miR-497-5p的调控作用。5.通过Starbase数据库预测Lncrna GABpB1-AS1和miR-497-5p的作用位点,构建荧光素酶报告基因质粒:Lnc GABpB1-AS1 3’UTR野生型报告质粒和Lnc GABpB1-AS1 3’UTR突变型报告质粒,利用双荧光素酶活性实验确定Lncrna GABpB1-AS1和miR-497-5p有无直接靶向作用关系。6.对miR-497-5p在宫颈癌中的靶点进行预测,并对这些靶点的功能进行信号通路富集分析。结果:*** Base数据库预测发现Lncrna GABpB1-AS1上可能有miR-497-5p的结合位点。2.宫颈癌细胞中检测到GABpB1-AS1呈现显著高表达,而miR-497-5p显著低表达。3.抑制GABpB1-AS1的表达后,检测到宫颈癌细胞的增殖能力下降,侵袭能力降低;反之,上调miR-497-5p表达后,检测到宫颈癌细胞的增殖能力下降,侵袭能力降低。4.挽救实验证实,GABpB1-AS1变化对宫颈癌细胞增殖能力和侵袭能力的影响,可被miR-497-5p变化减弱。5.双荧光素酶活性实验证实miR-497-5p与Lncrna GABpB1-AS1之间存在直接靶向关系。6.筛选到miR-497-5p在宫颈癌中靶点172个,它们可能富集在proteoglycans in cancer;Neurotrophin signaling pathway;Hedgehog signaling pathway等多条功能不同的信号通路中。结论:*** GABpB1-AS1在宫颈癌细胞中高表达,可能发挥癌基因作用。***-497-5p在宫颈癌细胞中低表达,可能发挥抑癌基因作用。***-497-5p与Lncrna GABpB1-AS1存在直接靶向关系。*** GABpB1-AS1可能通过靶向miR-497-5p而调控宫颈癌细胞增殖和侵袭能力。5.筛选到Lncrna GABpB1-AS1/miR-497-5p轴可能调控的蛋白172个,可能富集到多条功能各异的信号通路中。

关键词：宫颈癌微小rna-497-5p 长链非编码rna GA结合蛋白1-AS1 细胞增殖细胞侵袭

miR-497-5p在肝细胞癌组织中的表达水平及其对肝癌细胞增殖的影响

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广西医学 2023年第11期45卷 1310-1315,1325页

作者：俞立萍陈颖苏明琪张辉林宏坚上海交通大学医学院附属同仁医院肿瘤科上海市200336 上海交通大学医学院附属同仁医院肝胆外科上海市200336

目的探讨miR-497-5p在肝细胞癌组织中的表达水平及其对肝癌细胞增殖的影响。方法(1)选取46例肝细胞癌患者的肝细胞癌组织和癌旁组织,以及正常肝细胞株(THLE-3细胞)、人肝癌细胞株(SMCC7721细胞、MHCC97H细胞、LM3细胞、HepG2细胞、Hep3... 详细信息

目的探讨miR-497-5p在肝细胞癌组织中的表达水平及其对肝癌细胞增殖的影响。方法(1)选取46例肝细胞癌患者的肝细胞癌组织和癌旁组织,以及正常肝细胞株(THLE-3细胞)、人肝癌细胞株(SMCC7721细胞、MHCC97H细胞、LM3细胞、HepG2细胞、Hep3B细胞),检测miR-497-5p表达水平;取上述组织,检测胰岛素样生长因子1受体(IGF-1R)mrna表达水平。比较不同miR-497-5p表达水平的肝细胞癌患者的临床病理特征。(2)将LM3细胞和HepG2细胞分为阴性对照组、miR-497-5p模拟物组和miR-497-5p+IGF-1R组进行实验。将miR-497-5p对照物、miR-497-5p模拟物分别转染至阴性对照组、miR-497-5p模拟物组细胞,将过表达IGF-1R慢病毒、miR-497-5p模拟物先后转染至miR-497-5p+IGF-1R组细胞。转染后48 h,检测3组细胞增殖情况,以及阴性对照组、miR-497-5p模拟物组细胞的IGF-1R mrna表达水平。(3)应用TargetScan在线预测软件和双荧光素酶报告实验分析miR-497-5p与IGF-1R的关系。分析肝细胞癌组织中miR-497-5p表达水平与IFG-1R mrna表达水平的相关性。结果(1)肝细胞癌组织中miR-497-5p表达水平低于癌旁组织,且各人肝癌细胞株的miR-497-5p表达水平均低于正常肝细胞株(均p5)。相比于miR-497-5p高表达组,低表达组肿瘤大小>5 cm的患者比例、静脉侵犯的患者比例、TNM分期为Ⅱ~Ⅲ期的患者比例更高(均p5)。(2)miR-497-5p模拟物组LM3细胞培养48 h、72 h、96 h后的吸光度值均小于阴性对照组,HepG2细胞培养24 h、48 h、72 h、96 h后的吸光度值均小于阴性对照组(均p5)。无论是LM3细胞还是HepG2细胞,miR-497-5p模拟物组的IGF-1R mrna表达水平均低于阴性对照组(均p5)。miR-497-5p+IGF-1R组LM3细胞培养48 h、72 h、96 h后的吸光度值均大于miR-497-5p模拟物组,miR-497-5p+IGF-1R组HepG2细胞培养72 h、96 h后的吸光度值均大于miR-497-5p模拟物组(均p5)。(3)生物信息学预测和双荧光素酶报告实验结果提示IGF-1R是miR-497-5p的直接作用靶基因。肝细胞癌组织中IGF-1R mrna表达水平高于癌旁组织,且与miR-497-5p表达水平呈负相关(均p5)。结论miR-497-5p在肝细胞癌组织和人肝癌细胞系中表达下调,过表达miR-497-5p可以抑制肝癌细胞的增殖能力。miR-497-5p可能通过靶向调节IGF-1R抑制肝癌细胞的增殖,miR-497-5p可能是一种潜在的治疗肝癌的新靶点。

关键词：肝细胞癌微小rna-497-5p 胰岛素生长因子1受体细胞增殖

胶质瘤组织lncrna SNHG25、miR-497-5p表达与临床特征及预后的关系研究

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国际检验医学杂志 2024年第12期45卷 1463-1468页

作者：段晓伟张宁王晶高立威刘秀杰王喜旺于国渊邯郸市中心医院神经外二科河北邯郸056000

目的探讨胶质瘤组织长链非编码rna(lncrna)小核仁rna宿主基因(SNHG)25、微小rna(miR)-497-5p表达与临床特征及预后的关系。方法选择2019年1月至2020年1月该院收治的157例胶质瘤患者为胶质瘤组,同期该院100例因颅脑损伤接受手术治疗的患... 详细信息

目的探讨胶质瘤组织长链非编码rna(lncrna)小核仁rna宿主基因(SNHG)25、微小rna(miR)-497-5p表达与临床特征及预后的关系。方法选择2019年1月至2020年1月该院收治的157例胶质瘤患者为胶质瘤组,同期该院100例因颅脑损伤接受手术治疗的患者为对照组。分别取术中切除的胶质瘤组织和正常脑组织检测lncrna SNHG25、miR-497-5p表达水平,术后随访3年。分析lncrna SNHG25表达水平与miR-497-5p的相关性,lncrna SNHG25、miR-497-5p表达水平与患者临床特征和预后的关系。结果与对照组比较,胶质瘤组lncrna SNHG25表达水平升高(p497-5p表达水平降低(prna SNHG25表达水平升高,miR-497-5p表达水平降低(prna SNHG25表达水平与miR-497-5p呈负相关(r=-0.370,prna SNHG25高表达组累积生存率低于lncrna SNHG25低表达组(p497-5p低表达组累积生存率低于miR-497-5p高表达组(prna SNHG25高表达是胶质瘤患者预后不良的危险因素(p497-5p高表达则是保护因素(prna SNHG25表达水平升高,miR-497-5p表达水平降低,且与肿瘤最大径增大、WHO中枢神经系统肿瘤分级高有关,可导致胶质瘤患者不良预后。

关键词：胶质瘤长链非编码rna 小核仁核糖核酸宿主基因微小rna-497-5p

精神分裂症患者血清miR-497-5p和CSMD1表达水平与认知功能相关性研究

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精神医学杂志 2023年第5期36卷 461-464页

作者：柯伟程诗雨叶仕能黄石市精神病医院湖北黄石435000

目的探讨精神分裂症患者血清微小核糖核酸-497-5p(miR-497-5p)和CSMD1基因的表达水平与认知功能的相关性。方法以110例精神分裂症患者(观察组)作为观察对象,选择同期98名体检健康人群作为对照组,定量反转录聚合酶连锁反应法检测血清miR-... 详细信息

目的探讨精神分裂症患者血清微小核糖核酸-497-5p(miR-497-5p)和CSMD1基因的表达水平与认知功能的相关性。方法以110例精神分裂症患者(观察组)作为观察对象,选择同期98名体检健康人群作为对照组,定量反转录聚合酶连锁反应法检测血清miR-497-5p和CSMD1的表达水平,采用认知功能成套测验(MCCB)和斯特鲁普(Stroop)色词测验检测受试者的认知功能,采用pearson相关分析观察组血清miR-497-5p与CSMD1表达水平的相关性;采用Spearman相关分析观察组血清miR-497-5p、CSMD1表达水平与认知功能评分的相关性。结果观察组较对照组血清miR-497-5p表达水平升高,CSMD1表达水平及MCCB、Stroop色词测验评分均降低(p497-5p与CSMD1表达水平呈负相关(p5);观察组血清miR-497-5p表达水平与pANSS呈正相关(pp单词测验评分均呈负相关(ppANSS呈负相关(pp单词测验评分均呈正相关(p497-5p水平升高、CSMD1水平降低,且与认知功能障碍有关。

关键词：精神分裂症微小rna-497-5p CSMD1基因认知功能