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长链非编码rna LINC00662/微小rna-16-5p/wee1信号通路对肝细胞癌细胞增殖及凋亡的作用研究

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安徽医药 2023年第4期27卷 790-796页

作者：万焱罗煜王洁汤晓青郭玺徐斌昆明市第三人民医院肿瘤科云南昆明650000

目的探讨长链非编码rna linc00662(Lncrna linc00662)通过微小rna-16-5p(miR-16-5p)[/丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶1(wee1)]信号轴在肝细胞癌(HCC)细胞增殖及凋亡中的作用。方法该研究时间为2019年8月至2020年10月,体外培养正常肝细胞株LO2和... 详细信息

目的探讨长链非编码rna linc00662(Lncrna linc00662)通过微小rna-16-5p(miR-16-5p)[/丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶1(wee1)]信号轴在肝细胞癌(HCC)细胞增殖及凋亡中的作用。方法该研究时间为2019年8月至2020年10月,体外培养正常肝细胞株LO2和肝癌细胞株SK-HEp-1、HepG2、Huh-7和Li-7。采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-pCR)检测细胞中linc00662、miR-16-5p和wee1的表达。以HepG2细胞作为研究对象,设置shrna阴性对照(sh-NC)组、linc00662-shrna干扰(sh-linc00662)组、抑制剂阴性对照(inhibitor-NC)组、miR-16-5p抑制剂(miR-16-5p inhibitor)组、sirna阴性对照(si-NC)组、wee1-sirna干扰(siwee1)组、linc00662-shrna干扰联合miR-16-5p抑制剂(sh-linc00662+miR-16-5p inhibitor)组和miR-16-5p抑制剂联合wee1-sirna干扰(miR-16-5p inhibitor+si-wee1)组。CCK-8和克隆形成实验检测细胞增殖活性;流式细胞仪检测细胞凋亡水平;蛋白质印迹法检测凋亡相关蛋白[B细胞淋巴瘤-2基因(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白基因(Bax)]表达。双萤光素酶报告基因实验检测linc00662、miR-16-5p和wee1之间的相关性。结果pCR结果显示相比较LO2细胞,linc00662在SK-HEp-1、HepG2、Huh-7和Li-7细胞中普遍高表达[0.95±0.14比2.12±0.17、3.86±0.15、2.31±0.14、1.82±0.18,ppp16-5p并负调控miR-16-5p的表达。同时,miR-16-5p直接靶向结合wee1并负调控wee1的表达。下调miR-16-5p表达可以减轻敲低linc00662对肝癌细胞生长的抑制作用。此外,linc00662可能通过miR-16-5p/wee1通路发挥促癌作用。结论Linc00662是一种在肝癌细胞中上调的Lncrna,可以通过miR-16-5p/wee1轴促进肝癌细胞增殖并抑制细胞凋亡。

关键词：癌,肝细胞丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶1 微小rna-16-5p lncrna linc00662 增殖凋亡

脓毒症并发急性肾损伤患者外周血单个核细胞中微小rna-16-5p、干扰素诱导跨膜蛋白3表达及临床意义

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临床肾脏病杂志 2023年第1期23卷 45-51页

作者：陈旋武汉市蔡甸区人民医院武汉430000

目的检测脓毒症及脓毒症并发急性肾损伤(sepsis-associated acute kidney injury,S-AKI)患者外周血单个核细胞中微小rna-16-5p(microrna-16-5p,miR-16-5p)、干扰素诱导跨膜蛋白3(interferon-induced transmembrane protein,IFITM3)表达情况,分析两者对S-AKI患者的临床意义。方法本研究以2019年2月至2021年2月武汉市蔡甸区人民医院确诊的脓毒症患者为研究对象,共纳入106例,将合并急性肾损伤(acute kidney injury,AKI)的脓毒症患者作为AKI组(52例),未合并AKI的患者为非AKI组(54例)。收集所有患者的血液样本3 mL并分离单核细胞,利用实时荧光定量技术检测外周血单个核细胞中miR-16-5p、IFITM3 mrna的表达水平,酶联免疫吸附法测定外周血中白细胞介素1β(interleukin-1β,IL-1β)水平,全自动生化分析仪检测外周血中胱抑素(cysteine,Cys)和尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)水平;比较两组间的临床指标及miR-16-5p、IFITM3 mrna表达水平,pearson法分析miR-16-5p、IFITM3 mrna分别与BUN、Cys水平的相关性,以及miR-16-5p与IFITM3 mrna表达水平的相关性,采用多元线性回归分析S-AKI患者miR-16-5p、IFITM3 mrna表达水平的影响因素,受试者工作特性曲线(receiver operator characteristic curves,ROC)评估miR-16-5p和IFITM3 mrna对脓毒症患者发生S-AKI的诊断价值。结果AKI组患者急性生理学与慢性健康状况评分系统Ⅱ(acute physiology and chronic health evaluationⅡ,ApACHEⅡ)评分(15.67±4.39比13.31±3.56)、序贯器官衰竭评分(sequential organ failure assessment,SOFA)评分(5.62±1.28比4.89±1.41)、IL-1β[(22.03±5.78)mg/L比(10.44±3.05)mg/L]、Cys[(2.72±0.45)mg/L比(1.98±0.31)mg/L]和BUN[(7.93±2.24)μmol/L比(4.49±2.07)μmol/L]水平均高于非AKI组患者(p5),AKI组患者的miR-16-5p(1.64±0.30比1.17±0.28)表达水平显著上调,IFITM3 mrna(2.87±0.62比4.06±0.92)及蛋白(1.63±0.41比3.15±0.85)(r=0.560,p5)水平呈正相关,IFITM3 mrna表达水平与IL-1β(r=-0.754,p5)、Cys(r=-0.554,p5)、BUN(r=-0.695,p5)水平呈负相关,miR-16-5p与IFITM3 mrna的表达水平呈负相关(r=-0.496,p5);多元线性回归分析结果显示,IL-1β升高、Cys升高是miR-16-5p、IFITM3 mrna表达水平的影响因素(p5);miR-16-5p、IFITM3 mrna单一检测诊断脓毒症患者发生S-AKI的曲线下面积(area under the curve,AUC)分别为0.876(95%CI:0.809~0.944)、0.874(95%CI:0.811~0.938),miR-16-5p和IFITM3 mrna联合检测的AUC为0.956(95%CI:0.929~0.992)。结论S-AKI患者中miR-16-5p表达上调,IFITM3表达下调,与S-AKI的病理过程密切相关,可能通过促进炎症反应加重肾损伤,有助于早期诊断S-AKI,为临床治疗S-AKI提供了有希望的靶点。

关键词：脓毒症急性肾损伤微小rna-16-5p 干扰素诱导跨膜蛋白3

联合检测血清长链非编码rna小核仁rna宿主基因16和微小rna-16-5p对胃癌的诊断价值

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中国医药 2021年第10期16卷 1475-1479页

作者：杨季彭波李军陈雯雯李周彤昕武汉市第三医院检验科 430000 武汉市第三医院消化内科 430000

目的探讨血清长链非编码rna小核仁rna宿主基因16(lncrna SNHG16)联合微小rna(miR)-16-5p检测对胃癌的诊断价值。方法选取武汉市第三医院2018年1月至2020年1月收治的102例胃癌患者作为胃癌组,另选取同期102名体检健康者为对照组。对比2... 详细信息

目的探讨血清长链非编码rna小核仁rna宿主基因16(lncrna SNHG16)联合微小rna(miR)-16-5p检测对胃癌的诊断价值。方法选取武汉市第三医院2018年1月至2020年1月收治的102例胃癌患者作为胃癌组,另选取同期102名体检健康者为对照组。对比2组血清lncrna SNHG16、miR-16-5p水平,分析血清lncrna SNHG16、miR-16-5p水平与胃癌患者临床及病理参数的关系,pearson相关性方法分析血清lncrna SNHG16与miR-16-5p水平的相关性,受试者工作特征(ROC)曲线分析血清lncrna SNHG16、miR-16-5p水平对胃癌的诊断价值。结果胃癌组血清lncrna SNHG16水平明显高于对照组,miR-16-5p水平明显低于对照组[(2.03±0.17)比(1.69±0.34)、(0.56±0.06)比(0.82±0.28)](均p rna SNHG16、miR-16-5p水平与TNM分期、侵袭程度、淋巴结转移、远处转移相关(均p pearson相关性分析结果显示,胃癌患者血清lncrna SNHG16与miR-16-5p水平呈负相关(r=-0.405,p rna SNHG16与miR-16-5p联合[曲线下面积(AUC)=0.903,95%置信区间0.854~0.940]诊断胃癌的AUC大于lncrna SNHG16(AUC=0.816,95%置信区间0.755~0.866)、miR-16-5p(AUC=0.826,95%置信区间0.766~0.875)单独检测。结论胃癌患者血清lncrna SNHG16水平显著提升,miR-16-5p水平显著降低,二者呈负相关,联合检测血清lncrna SNHG16和miR-16-5p水平可提升胃癌诊断价值。

关键词：胃癌长链非编码rna小核仁rna宿主基因16 微小rna-16-5p

食管癌组织miR-16-5p和FASN表达水平及临床意义

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热带医学杂志 2023年第9期23卷 1299-1304,1327,1342页

作者：殷洪敏朱水津黄敏王军上海健康医学院附属崇明医院消化科上海202150 上海健康医学院附属崇明医院普外科上海202150

目的探索微小rna-16-5p(miR-16-5p)、脂肪酸合成酶(FASN)在食管癌组织中的表达水平及临床意义。方法选取2017年2月-2020年1月上海健康医学院附属崇明医院收治的104例食管癌患者为研究对象,术中收集其癌组织与癌旁组织并采用实时荧光定量... 详细信息

目的探索微小rna-16-5p(miR-16-5p)、脂肪酸合成酶(FASN)在食管癌组织中的表达水平及临床意义。方法选取2017年2月-2020年1月上海健康医学院附属崇明医院收治的104例食管癌患者为研究对象,术中收集其癌组织与癌旁组织并采用实时荧光定量pCR(qRT-pCR)测定组织miR-16-5p、FASN表达量;免疫组化法检测组织中FASN蛋白表达情况;TargetScanHuman网站预测miR-16-5p与FASN的靶向关系;pearson法分析食管癌患者癌组织miR-16-5p与FASN水平的相关性;采用双荧光素酶报告实验验证miR-16-5p与FASN的靶向关系。依据miR-16-5p、FASN表达量平均值将食管癌患者分为miR-16-5p高表达组(≥0.82,n=53)与miR-16-5p低表达组(51),FASN高表达组(≥1.23,n=55)与FASN低表达组(plan-Meier生存曲线分析食管癌组织miR-16-5p、FASN表达情况与患者生存率之间的关系;采用Cox回归分析食管癌患者预后不良的危险因素。结果食管癌组织中miR-16-5p表达水平(0.82±0.14)低于癌旁组织(0.98±0.11),FASN表达(1.23±0.10)高于癌旁组织(1.01±0.09),差异均有统计学意义(t=9.164、16.676,p均54%(64/104),明显高于癌旁组织的17.31%(18/104),差异有统计学意义(χ^(2)=42.599,p5)。TargetScanHuman网站预测miR-16-5p与FASN存在结合位点;食管癌患者癌组织中miR-16-5p与FASN表达水平成负相关(r=-0.584,p16-5p与FASN存在靶向关系(F=144.623,p16-5p、FASN表达均与肿瘤直径(χ^(2)=5.525、3.905,p=0.019、0.048)、浸润深度(χ^(2)=8.255、7.638,p=0.004、0.006)、TNM分期(χ^(2)=8.792、8.521,p=0.003、0.004)、淋巴结转移(χ^(2)=8.054、9.697,p=0.005、0.002)、组织分化程度(χ^(2)=4.695、4.579,p=0.030、0.032)有关。miR-16-5p高表达组食管癌患者3年生存率(73.58%)高于miR-16-5p低表达组(43.14%),FASN高表达组食管癌患者3年生存率(45.45%)低于FASN低表达组(73.47%),差异均有统计学意义(χ^(2)=9.935、8.386,p=0.002、0.004)。多因素Cox回归分析表示,深层浸润(HR=2.116,p=0.033)、TNM分期为Ⅲ/Ⅳ期(HR=2.885,p=0.032)、淋巴结转移(HR=3.207,p=0.027)、FASN高表达(HR=4.104,p=0.006)均是食管癌患者预后不良的危险因素,miR-16-5p高表达是食管癌预后的保护因素(HR=0.559,p=0.012)。结论食管癌组织中miR-16-5p表达水平下调、FASN表达水平上调,二者均与食管癌患者临床病理特征及预后紧密相关。

关键词：食管癌微小rna-16-5p 脂肪酸合成酶预后

结直肠癌组织microrna-16-5p、microrna-493-5p表达与pI3K/Akt/mTOR信号通路和预后的关系研究

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国际检验医学杂志 2023年第18期44卷 2198-2203,2210页

作者：姚勇李森徐文龙朱俊佳盛华明东南大学医学院附属江阴医院肛肠外科江苏江阴214400 东南大学医学院附属江阴医院肿瘤科江苏江阴214400

目的探讨结直肠癌组织微小rna-16-5p(miR-16-5p)、microrna-493-5p(miR-493-5p)表达与磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(pI3K/Akt/mTOR)信号通路和预后的关系。方法选取2016年1月至2019年1月该院收治的126例接受根... 详细信息

目的探讨结直肠癌组织微小rna-16-5p(miR-16-5p)、microrna-493-5p(miR-493-5p)表达与磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(pI3K/Akt/mTOR)信号通路和预后的关系。方法选取2016年1月至2019年1月该院收治的126例接受根治性切除手术的结直肠癌患者,采用实时荧光定量聚合酶链反应(qpCR)检测癌组织及癌旁组织中miR-16-5p、miR-493-5p及pI3K/Akt/mTOR信号通路相关基因mrna的表达水平并进行比较,分析癌组织中miR-16-5p、miR-493-5p与pI3K/Akt/mTOR信号通路相关基因mrna及临床病理特征的关系。术后随访3年,采用Kaplan-Meier生存曲线分析miR-16-5p、miR-493-5p高表达和低表达患者的预后情况。结果总rna A260/A280为1.90,琼脂糖凝胶电泳提示28S与18S rrna带亮度比值均>1.5,总rna浓度750 ng/μL,说明rna纯度高、完整性较好。癌组织中miR-16-5p、miR-493-5p表达水平均低于癌旁组织,pI3K、Akt、mTOR mrna表达水平均高于癌旁组织(p5)。癌组织中miR-16-5p、miR-493-5p与pI3K、Akt、mTOR mrna表达水平均呈负相关(p5)。临床分期为Ⅲ期患者中miR-16-5p、miR-493-5p低表达者占比高于Ⅰ期和Ⅱ期(p5);低分化患者中miR-16-5p、miR-493-5p低表达患者占比高于中分化和高分化,且中分化患者中miR-16-5p、miR-493-5p低表达患者占比高于高分化(p5);有淋巴结转移患者中miR-16-5p、miR-493-5p低表达患者占比高于无淋巴结转移(p5);T4分期患者中miR-16-5p、miR-493-5p低表达患者占比高于T1和T2分期(p5),T3分期患者中miR-493-5p低表达患者占比高于T1分期(p5)。Kaplan-Meier生存曲线分析显示,miR-16-5p高表达和低表达患者3年累积生存率为93.22%、68.33%,生存率比较差异有统计学意义(p=0.017)。miR-493-5p高表达和低表达患者3年累积生存率为94.74%、67.74%,生存率比较差异有统计学意义(p=0.012)。结论 miR-16-5p、miR-493-5p在结直肠癌组织中表达下调,且与pI3K/Akt/mTOR信号通路呈负相关,miR-16-5p、miR-493-5p高表达患者的预后更好。

关键词：结直肠癌微小rna-16-5p 微小rna-493-5p 磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白信号通路预后

超声介导载miR-16-5p微泡联合树突状细胞疫苗对小鼠肝癌皮下移植瘤生长的影响

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实用肝脏病杂志 2022年第1期25卷 17-21页

作者：时牛宋洁崔天庆云宇婷郭瑞芳吴昆内蒙古自治区人民医院消化内科呼和浩特市010017 内蒙古自治区人民医院临床营养中心呼和浩特市010017 内蒙古科技大学包头医学院第一附属医院消化内科不详

目的研究采用超声介导载miR-16-5p微泡联合树突状细胞(DC)疫苗处理对小鼠肝癌皮下移植瘤生长的影响。方法制备载miR-16-5p的高分子微泡和DC疫苗。在30只小鼠用HepG2细胞建立肝癌皮下移植瘤模型,再随机分为对照组、空微泡、miR-16-5p微泡... 详细信息

目的研究采用超声介导载miR-16-5p微泡联合树突状细胞(DC)疫苗处理对小鼠肝癌皮下移植瘤生长的影响。方法制备载miR-16-5p的高分子微泡和DC疫苗。在30只小鼠用HepG2细胞建立肝癌皮下移植瘤模型,再随机分为对照组、空微泡、miR-16-5p微泡、DC疫苗和miR-16-5p微泡联合DC疫苗处理组,每组6只。观察各组小鼠肿瘤生长情况,绘制肿瘤生长曲线并计算抑瘤率,采用实时荧光定量RT-pCR法检测肿瘤组织miR-16-5p水平。采用ELISA法检测血清免疫球蛋白G(IgG)、IFN-γ、TGF-β、IL-2和IL-10水平。结果制备的高分子微泡呈球形,平均粒径为1.31μm;对照组、空微泡、miR-16-5p微泡、DC疫苗和联合处理组小鼠肿瘤体积分别为(5973.2±257.4)mm^(3)、(5912.3±248.3)mm^(3)、(4873.7±281.5)mm^(3)、(4954.9±276.3)mm^(3)和(2225.8±201.4)mm^(3),瘤体质量分别为(4.4±0.4)g、(4.2±0.3)g、(2.8±0.2)g、(2.7±0.2)g和(0.9±0.2)g,差异显著(p5);各组小鼠肿瘤组织miR-16-5p水平分别为(1.02±0.06)、(1.05±0.03)、(7.81±0.97)、(1.08±0.07)和(8.08±1.06),提示微泡组和联合组显著高于其他各组(p5);与对照组或空微泡处理组比,其他三组血清IgG、IFN-γ和IL-2水平均显著升高,其中联合组水平最高,而其他三组血清TGF-β和IL-10水平均显著降低,其中联合组水平最低(均p5)。结论采用超声介导载miR-16-5p微泡联合DC疫苗处理对小鼠肝癌皮下移植瘤生长具有协同的抑制作用,可能与增强了小鼠对肿瘤的免疫效应有关。

关键词：肝癌皮下移植瘤超声介导载微泡微小rna-16-5p 树突状细胞疫苗小鼠

糖尿病肾脏疾病患者血清miR-16-5p水平变化及其意义

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山东医药 2017年第31期57卷 55-58页

作者：张琳唐平易周俊刘立亚唐东兴南华大学附属第二医院湖南衡阳421001 衡阳市中医医院(南院) 湖南医药学院

目的观察糖尿病肾脏疾病(DKD)患者血清微小rna-16-5p(miR-16-5p)的水平变化,并探讨其意义。方法 DKD患者53例(观察组),其中尿蛋白正常者16例、DKDⅢ期者19例、Ⅳ期者12例、Ⅴ期者6例,另选50例健康体检者作为对照组。采用实时荧光定量pC... 详细信息

目的观察糖尿病肾脏疾病(DKD)患者血清微小rna-16-5p(miR-16-5p)的水平变化,并探讨其意义。方法 DKD患者53例(观察组),其中尿蛋白正常者16例、DKDⅢ期者19例、Ⅳ期者12例、Ⅴ期者6例,另选50例健康体检者作为对照组。采用实时荧光定量pCR技术检测血清miR-16-5p,ROC曲线分析血清miR-16-5p水平对DKD的诊断价值,pearson相关分析法分析其与空腹血糖(FpG)、糖化血红蛋白(HbA1c)、尿白蛋白/肌酐比值(UACR)、24 h尿白蛋白量的相关性。结果观察组及对照组血清miR-16-5p水平分别为0.45±0.25、1.00±0.30,两组比较,p16-5p水平分别为0.65±0.29、0.32±0.22、0.30±0.16、0.48±0.12,尿蛋白正常者、DKDⅤ期者与DKDⅢ期者、Ⅳ期者比较,p均5。血清miR-16-5p水平预测DKD的ROC曲线下面积为0.931(95%CI:0.883~0.980),以miR-16-5p水平0.665为截断点,其诊断DKD的灵敏度为86.0%、特异度为88.7%。观察组血清miR-16-5p与FpG、HbA1c、UACR、24 h尿白蛋白量均呈负相关(r分别为-0.71、-0.43、-0.53、-0.72,p均16-5p水平降低,且随病情严重程度变化而变化,检测此指标有助于DKD的诊断及病情严重程度判断。

关键词：糖尿病糖尿病肾脏疾病微小rna-16-5p

糖尿病肾病患者尿液miR-16-5p的表达水平及其意义

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湘南学院学报（医学版） 2017年第4期19卷 16-20页

作者：唐平易张琳唐东兴刘立亚衡阳市中医医院南院南华大学附属第二医院肾内科湖南衡阳421001 湖南医药学院湖南怀化418000

目的通过检测糖尿病肾病(DKD)患者尿液miR-16-5p的表达水平,探讨尿液miR-16-5p的表达变化与DKD病情的关系。方法收集合并DKD的2型糖尿病患者107例(病例组)和健康体检者32例(对照组)的临床资料,采用实时荧光定量pCR方法检测尿液miR-16-5... 详细信息

目的通过检测糖尿病肾病(DKD)患者尿液miR-16-5p的表达水平,探讨尿液miR-16-5p的表达变化与DKD病情的关系。方法收集合并DKD的2型糖尿病患者107例(病例组)和健康体检者32例(对照组)的临床资料,采用实时荧光定量pCR方法检测尿液miR-16-5p表达水平,进行比较,并运用受试者工作曲线(ROC曲线)分析尿液miR-16-5p表达水平诊断DKD的价值;彩超测量肾脏最大横切面面积及各级血管阻力指数;分析尿液miR-16-5p与空腹血糖(FpG)、糖化血红蛋白(Hb Alc)、尿白蛋白/尿肌酐比值(UACR)及肾脏超声指标的相关性。结果DKD病例组尿液miR-16-5p的相对表达水平(0.52±0.26)明显低于对照组(1.00±0.23)(p16-5p水平对于DKD的诊断ROC曲线下面积为0.920,取0.780为诊断界点,诊断的灵敏度和特异度分别为85.8%和90.9%;病例组尿液miR-16-5p的表达水平与FpG、Hb Alc、UACR均呈负相关(r分别为-0.77、-0.56、-0.61,p均pp均16-5p表达明显下调,其下调与病情密切相关,对疾病有重要的诊断价值,可能是糖尿病肾病的重要生物学标志。

关键词： 2型糖尿病糖尿病肾病微小rna-16-5p 尿液

miR-16-5p、IRAK2基因对关节炎软骨细胞增殖、凋亡的影响及其机制

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山东医药 2019年第36期59卷 37-41页

作者：于云祥龚泰芳刘小涛柯文李彬彬湖北省十堰市太和医院

目的观察miR-16-5p、IRAK2基因对脂多糖(LpS)诱导的胎鼠骨关节炎软骨细胞增殖、凋亡的影响,并探讨其机制。方法剪取胎鼠膝关节获取软骨细胞,常规传代培养。通过靶基因预测网站starBase预测miR-16-5p靶基因,采用荧光素酶报告基因实验进... 详细信息

目的观察miR-16-5p、IRAK2基因对脂多糖(LpS)诱导的胎鼠骨关节炎软骨细胞增殖、凋亡的影响,并探讨其机制。方法剪取胎鼠膝关节获取软骨细胞,常规传代培养。通过靶基因预测网站starBase预测miR-16-5p靶基因,采用荧光素酶报告基因实验进行验证。取对数生长期软骨细胞分成8组。LpS组加入LpS诱导骨关节炎软骨细胞模型,NC组加入等量培养基;LpS+miR-16-5p组转染miR-16-5p模拟物(miR-16-5p mimics)后加入LpS,LpS+miR-con组转染对照模拟物(miR-con)后加入LpS;LpS+si-IRAK2组转染IRAK2 sirna(si-IRAK2)后加入LpS,LpS+si-con组转染对照sirna(si-con)后加入LpS;LpS+miR-16-5p+pcDNA-IRAK2组转染miR-16-5p mimics、IRAK2过表达质粒(pcDNA-IRAK2)后加入LpS,LpS+miR-16-5p+pcDNA-con组转染miR-16-5p mimics、对照质粒(pcDNA-con)后加入LpS。采用qRT-pCR法检测NC组、LpS组细胞中miR-16-5p、IRAK2 mrna;采用MTT法测算各组细胞增殖能力(以细胞存活率表示细胞增殖能力);采用流式细胞仪检测各组细胞凋亡情况,计算细胞凋亡率;采用Western Blotting法检测各组细胞中IRAK2、细胞周期蛋白1(CyclinD1)、B淋巴细胞瘤-2相关蛋白(Bax)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)蛋白。结果LpS组细胞中miR-16-5p、IRAK2 mrna的相对表达量分别为1.00±0.10、4.01±0.41,NC组分别为5.33±0.53、0.85±0.09,两组相比,p均5。LpS组、NC组细胞存活率分别为63.03%±6.31%、100.00%±10.26%,LpS+miR-16-5p组、LpS+miR-con组分别为93.16%±9.32%、65.46%±6.53%,LpS+si-IRAK2组、LpS+si-con组分别为91.46%±9.15%、60.45%±6.05%,LpS+miR-16-5p+pcDNA-IRAK2组、LpS+miR-16-5p+pcDNA-con组分别为68.08%±6.81%、93.16%±9.31%,两组间相比,p均5。LpS组、NC组细胞凋亡率分别为28.46%±2.85%、1.59%±0.16%,LpS+miR-16-5p组、LpS+miR-con组分别为5.09%±0.51%、30.01%±3.02%,LpS+si-IRAK2组、LpS+si-con组分别为4.88%±0.50%、29.10%±2.91%,LpS+miR-16-5p+pcDNA-IRAK2组、LpS+miR-16-5p+pcDNA-con组分别为20.89%±2.10%、6.15%±0.62%,两组间相比,p均5。LpS组细胞中IRAK2、CyclinD1、Bax、Bcl-2蛋白相对表达量分别为1.20±0.12、0.40±0.04、0.90±0.09、0.25±0.03,NC组分别为0.35±0.05、1.00±0.10、0.10±0.02、0.85±0.09,两组相比,p均5;LpS+miR-16-5p组分别为0.90±0.09、0.28±0.03、0.75±0.08、0.10±0.02,LpS+miR-con组分别为0.42±0.05、0.92±0.09、0.30±0.05、0.88±0.08,两组相比,p均5;LpS+si-IRAK2组分别为0.55±0.06、0.92±0.09、0.30±0.03、0.80±0.08,LpS+si-con组分别为1.20±0.12、0.42±0.05、0.90±0.09、0.32±0.05,两组相比,p均5;LpS+miR-16-5p+pcDNA-IRAK2组分别为1.10±0.10、0.55±0.05、0.80±0.08、0.42±0.05,LpS+miR-16-5p+pcDNA-con组分别为0.52±0.05、0.92±0.09、0.32±0.05、0.84±0.05,两组相比,p均5。结论LpS诱导的胎鼠骨关节炎软骨细胞中miR-16-5p低表达、IRAK2高表达,上调miR-16-5p表达、下调IRAK2基因表达均可促进软骨细胞增殖、抑制细胞凋亡,其作用机制可能与CyclinD1、Bax、Bcl-2蛋白表达有关。

关键词：微小rna 微小rna-16-5p IRAK2基因骨关节炎软骨细胞细胞增殖细胞凋亡细胞实验