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微小rna-150在膀胱尿路上皮癌细胞BC-6中的作用机制研究

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中国临床药理学杂志 2019年第17期35卷 1893-1897页

作者：杨涛王刚郭留雄魏东邓新娜董春霞刘俊江河北省人民医院泌尿外科河北省人民医院肿瘤四科河北省人民医院肾内科

目的研究微小rna-150(miR-150)在膀胱尿路上皮癌细胞BC-6中的作用机制。方法 (1)将膀胱尿路上皮癌细胞株BC-6分为3组:空白对照组、miR-150抑制剂组和阴性对照组。miR-150抑制剂组和阴性对照组分别用Lipofectamine 2000将浓度均为100 nmo... 详细信息

目的研究微小rna-150(miR-150)在膀胱尿路上皮癌细胞BC-6中的作用机制。方法 (1)将膀胱尿路上皮癌细胞株BC-6分为3组:空白对照组、miR-150抑制剂组和阴性对照组。miR-150抑制剂组和阴性对照组分别用Lipofectamine 2000将浓度均为100 nmol·L-1的miR-150 inhibitors和无意义序列转染至细胞,空白对照组不做处理。(2)在空白对照组中,加入磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/丝苏氨酸蛋白激酶(Akt)信号通路抑制剂——LY294002,作为LY294002组。以细胞毒性检测试剂盒检测细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞凋亡,蛋白免疫印迹法检测Cleaved caspase-3、PI3K、Akt和磷酸化丝苏氨酸蛋白激酶(p-Akt)相对表达量。结果 (1) 48 h,miR-150抑制剂组、阴性对照和空白对照组细胞增殖率分别为(23. 97±3. 28)%,(98. 14±1. 34)%和(99. 86±1. 15)%;上述这3组的细胞凋亡率分别为(16. 32±3. 19)%,(1. 86±0. 24)%和(0. 79±0. 15)%;上述这3组的PI3K相对表达量分别为0. 21±0. 03,0. 53±0. 12和0. 56±0. 11;上述这3组的Akt相对表达量分别为0. 08±0. 01,0. 21±0. 05和0. 23±0. 04;上述这3组的p-Akt相对表达量分别为0. 70±0. 10,0. 69±0. 12和0. 72±0. 11;上述这3组的Cleaved caspase-3相对表达量分别为0. 58±0. 11,0. 23±0. 04和0. 24±0. 03。阴性对照组和miR-150抑制剂组与空白对照组比较,上述指标的差异均有统计学意义(均P 150表达能够抑制膀胱尿路上皮癌BC-6细胞株的增殖,并通过上调Cleaved caspase-3促进细胞凋亡,其调控作用可能与PI3K/Akt信号通路有关。

关键词：膀胱尿路上皮癌微小rna-150 增殖凋亡

微小rna-150在胆囊癌上皮-间充质转化中的作用及其机制

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中华实验外科杂志 2020年第10期37卷 1890-1893页

作者：李涛马利锋刘国超王建龙尹兆强张占学河北医科大学第二医院普通外科石家庄050061

目的:探讨微小rna(mirna,miR)-150与胆囊癌肿瘤上皮-间充质转化(EMT)的关系及其作用机制。方法:实时定量聚合酶链反应(qPCR)法检测河北医科大学第二医院2018年1月至2019年5月手术切除的30例胆囊癌肿瘤组织中miR-150的表达,以30例慢性胆... 详细信息

目的:探讨微小rna(mirna,miR)-150与胆囊癌肿瘤上皮-间充质转化(EMT)的关系及其作用机制。方法:实时定量聚合酶链反应(qPCR)法检测河北医科大学第二医院2018年1月至2019年5月手术切除的30例胆囊癌肿瘤组织中miR-150的表达,以30例慢性胆囊炎组织为对照;qPCR法同时检测组织中增殖细胞核抗原(PCNA)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)、基质金属蛋白酶(MMP)-9的mrna表达,分析miR-150与这些基因的关系。应用miR-150 mimics转染人胆囊癌细胞株GBC-SD,划痕实验及Transwell小室实验检测细胞迁移侵袭的改变;qPCR及蛋白质印迹法(Western blot)技术检测各基因mrna和蛋白的变化。两样本均数比较采用t检验。多样本均数比较时采用方差分析,方差分析后续的两两比较采用最小显著差异法(LSD)。两样本之间相关性比较采用线性相关分析。结果:胆囊癌组织中miR-150和E-cadherin的mrna表达均低于慢性胆囊炎组织(t=-7.035、-14.146,Prna与慢性胆囊炎组织比较均明显增强(t=3.813、9.339、5.616,P150表达与患者的肿瘤分化程度、临床分期、淋巴结转移有关(t=3.228、2.396、-2.604,P150与E-cadherin呈正相关(r=0.630,P150 mimics后GBC-SD细胞的迁移侵袭能力减弱(F=1965.860、114.940,P150表达降低是肿瘤进展的因素,其机制可能在于miR-150通过调节一些基因表达参与肿瘤EMT过程。

关键词：胆囊癌微小rna-150 上皮-间充质转化临床病理特征体外实验

微小rna-150在甲状腺乳头状癌组织的表达及其对肿瘤增殖和凋亡的影响

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中华实验外科杂志 2018年第3期35卷 516-518页

作者：卢秀波杨国煜樊玉霞刘洋王晓明耿祖仕郑州大学第一附属医院甲状腺外科 450052

目的观察微小rna（mirna，miR）-150在甲状腺乳头状癌（PTC）组织中的表达及其对甲状腺乳头状癌细胞株TPC-1生物学行为产生的影响。方法通过实时荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）分别检测不同分期的PTC组织及癌旁组织中的miR-150表达水... 详细信息

目的观察微小rna（mirna，miR）-150在甲状腺乳头状癌（PTC）组织中的表达及其对甲状腺乳头状癌细胞株TPC-1生物学行为产生的影响。方法通过实时荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）分别检测不同分期的PTC组织及癌旁组织中的miR-150表达水平；用脂质体2000（Lipofectamin^TM 2000）分别将miR-150类似物（miR-150 mimics）及空白载体（miR-150 scramble）稳定转染到甲状腺乳头状癌TPC-1细胞株中，通过细胞计数试剂盒（CCK-8）法和流式细胞仪技术分别检测miR-150对于TPC-1细胞增殖、凋亡的影响。结果PTC组织中miR-150的表达水平（0.573 8±0.050 9）显著低于癌旁组织中的水平（1.768 0±0.198 0）且差异有统计学意义（P＝0.000）；其表达水平随着肿瘤分期的增加而显著降低（P＝0.005）；CCK-8法检测：转染miR-150后的TPC-1细胞增殖能力显著低于空白对照组及空白载体组且差异有统计学意义（P＝0.001），对照组和空载组间差异无统计学意义（P＝0.070）；流式细胞仪检测结果显示miR-150组细胞凋亡率[（14.79±1.85）%]显著高于对照组[（4.90±0.51）%]及空载组[（5.79±1.00）%]且差异有统计学意义（P＝0.013），对照组和空载组间差异无统计学意义（P＝0.472）。结论miR-150在PTC组织中呈低表达且表达水平与肿瘤分期相关；miR-150能抑制PTC细胞的增殖、促进其凋亡，在PTC的发生发展中起到抑癌基因的重要作用。

关键词：甲状腺乳头状癌微小rna-150 增殖脱噬作用

微小rna-150对急性ST段抬高型心肌梗死患者经皮冠状动脉介入术后6月内主要不良心血管事件的预测价值

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中国动脉硬化杂志 2020年第6期28卷 527-532页

作者：刘松年荆凌华伍星河南科技大学临床医学院河南科技大学第一附属医院急诊科河南省洛阳市472400

目的探究微小rna-150(miR-150)对急性ST段抬高型心肌梗死(STEMI)患者行经皮冠状动脉介入术(PCI)后主要不良心血管事件(MACE)的预测价值。方法选取我院2016年1月至2019年1月收治的130例确诊为STEMI并行急诊PCI治疗患者,依照患者PCI术后6... 详细信息

目的探究微小rna-150(miR-150)对急性ST段抬高型心肌梗死(STEMI)患者行经皮冠状动脉介入术(PCI)后主要不良心血管事件(MACE)的预测价值。方法选取我院2016年1月至2019年1月收治的130例确诊为STEMI并行急诊PCI治疗患者,依照患者PCI术后6月是否发生MACE分为MACE组(n=36)和非MACE组(n=94)。比较2组患者miR-150表达水平及临床一般资料。Logistic回归分析急性STEMI患者PCI术后6月发生MACE的危险因素。Spearman相关性分析miR-150与各危险因素的相关性。受试者工作特征曲线(ROC)分析miR-150对急性STEMI患者PCI术后6月内MACE的预测价值。结果 2组患者在性别、年龄、合并症(糖尿病、高血压、冠心病、高脂血症)、梗死部位、术后用药、急诊PCI时间、高密度脂蛋白胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇、总胆固醇、甘油三酯、血红蛋白比较差异无统计学意义(P>0.05)。MACE组心率(HR)、收缩压、舒张压、血小板、C反应蛋白(CRP)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、中性粒细胞/淋巴细胞比值(NLR)显著高于非MACE组,左心室射血分数(LVEF)、miR-150水平显著低于非MACE组,差异具有统计学意义(P=0.000)。多因素Logistic回归分析结果显示,年龄、高血压史、HR、LVEF、CRP、CK-MB、NLR、miR-150均为急性STEMI患者PCI术后6月发生MACE的独立危险因素。相关性分析结果显示,miR-150与高血压史、HR、CRP、CK-MB、NLR水平呈明显负相关性,与年龄、LVEF呈明显正相关性(P=0.000)。ROC曲线表明,miR-150诊断急性STEMI患者PCI术后6月内发生MACE的切点为0.23,曲线下面积为0.905(95%CI 0.871~0.939)。结论低水平miR-150为急性STEMI患者PCI术后6月内发生MACE的独立危险因素,检测miR-150水平可帮助评估急性STEMI患者预后。

关键词：微小rna-150 急性ST段抬高型心肌梗死经皮冠状动脉介入术主要不良心血管事件

微小rna-150及靶基因SRC激酶信号抑制剂1在下肢深静脉血栓中的表达及作用机制

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血管与腔内血管外科杂志 2024年第3期10卷 338-344页

作者：李孝成陈俞宏韦征霞柳州市人民医院血管外科广西柳州545001 柳州市中医院心胸血管外科广西柳州545001

目的探讨微小rna(mirna)-150及靶基因SRC激酶信号抑制剂1(SRCIN1)在下肢深静脉血栓(LEDVT)中的表达及作用机制。方法收集2022年1月至2023年1月柳州市人民医院收治的60例LEDVT患者的临床资料作为LEDVT组,另纳入同期进行体检的60例健康者... 详细信息

目的探讨微小rna(mirna)-150及靶基因SRC激酶信号抑制剂1(SRCIN1)在下肢深静脉血栓(LEDVT)中的表达及作用机制。方法收集2022年1月至2023年1月柳州市人民医院收治的60例LEDVT患者的临床资料作为LEDVT组,另纳入同期进行体检的60例健康者作为对照组。采集两组受试者的外周静脉血,并分离内皮祖细胞。通过荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测mirna-150的表达水平,利用生物信息学分析和双荧光素酶报告基因实验验证mirna-150的靶基因,采用蛋白质印迹法(Western blot)检测SRCIN1蛋白的表达,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)实验检测内皮祖细胞增殖情况。结果与对照组相比,LEDVT组内皮祖细胞中mirna-150的相对表达量明显降低(P﹤0.01)。生物信息学分析和双荧光素酶报告基因实验证实SRCIN1是mirna-150的靶基因;在野生型SRCIN1中,与转染mirna-NC的细胞相比,转染mirna-150 agomir细胞的荧光素酶活性明显降低(P﹤0.01)。在突变型SRCIN1中,mirna-150对SRCIN1的负向调控作用消失。Western blot检测结果显示,与mirna-150antagomir组内皮祖细胞相比,mirna-150 agomir组内皮祖细胞中SRCIN1蛋白的表达水平降低(P﹤0.05);与对照组相比,LDVT组内皮祖细胞中SRCIN1蛋白的表达水平升高(P﹤0.05)。MTT实验检测结果显示,与mirna-150antagomir组相比,mirna-150 agomir组的吸光度(OD)值在48、72 h时均明显升高(P﹤0.01)。结论mirna-150在内皮祖细胞中的表达水平降低可能与LEDVT的发生、发展有关。高表达的mirna-150可能通过靶向SRCIN1促进内皮祖细胞的增殖,从而达到治疗LEDVT的目的。

关键词：下肢深静脉血栓微小rna-150 SRC激酶信号抑制剂1 内皮祖细胞

微小rna-150在脓毒症患者外周血白细胞的表达及其临床意义

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中国呼吸与危重监护杂志 2011年第4期10卷 360-364页

作者：曾小莉张韶岩张京岚李凤梅马雪莲米玉红首都医科大学附属北京安贞医院检验科北京100029 首都医科大学附属北京安贞医院胸外科北京100029 首都医科大学附属北京安贞医院SICU 北京100029 首都医科大学附属北京安贞医院EICU 北京100029

目的观察脓毒症患者外周血白细胞中微小rna-150（miR-150）的表达变化,探讨其与脓毒症免疫细胞因子水平及严重程度的关系。方法采用实时定量PCR（qRT-PCR）检测40例脓毒症患者、20例全身性炎症反应综合征（SIRS）患者和20例正常对照外... 详细信息

目的观察脓毒症患者外周血白细胞中微小rna-150（miR-150）的表达变化,探讨其与脓毒症免疫细胞因子水平及严重程度的关系。方法采用实时定量PCR（qRT-PCR）检测40例脓毒症患者、20例全身性炎症反应综合征（SIRS）患者和20例正常对照外周血白细胞中miR-150表达量,并评价mirna检测的稳定性和线性。酶联免疫吸附法测定TNF-α和IL-10浓度,序贯器官衰竭估计（SOFA）评分系统评价脓毒症患者的严重程度。对miR-150与白细胞总数、TNF-α、IL-10和SOFA评分之间进行相关分析。结果外周血标本在4℃保存5 d,白细胞中miR-150表达量无明显变化;最低检出限为6.97 pg/μL rna,在6.97~6.97×104pg/μL rna之间有良好的线性关系（r=0.999）。脓毒症组miR-150表达量较正常对照组显著降低（P〈0.01）,白细胞总数、IL-10水平和IL-10/TNF-α比值显著升高（P〈0.05）;而脓毒症组与SIRS组间差异均无统计学意义（P〉0.05）。血清TNF-α水平在三组间差异均无统计学意义（P〉0.05）。脓毒症患者中,死亡组miR-150表达量较存活组显著降低（P〈0.05）,而IL-10水平和IL-10/TNF-α比值显著升高（P〈0.01）,TNF-α水平差异无统计学意义（P〉0.05）。脓毒症患者miR-150表达量与SOFA评分、血清TNF-α和IL-10呈显著负相关（r值分别为-0.619、-0.457和-0.431,P〈0.05）;与WBC无显著相关性（P〉0.05）。血清TNF-α、IL-10和IL-10/TNF-α比值与SOFA评分无显著相关性（P〉0.05）。结论脓毒症患者外周血miR-150表达量显著降低,其水平不但能反映机体炎症反应状态,而且在一定程度上能作为判断疾病严重程度及预后的指标。

关键词：脓毒症微小rna-150 肿瘤坏死因子α 白细胞介素10 序贯器官衰竭估计评分

微小rna-150在肝细胞癌中的表达及其临床意义

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岭南现代临床外科 2015年第4期15卷 381-384页

作者：黄伟华金少文蓝球生褚忠华五华县人民医院普外科广东梅州514400 中山大学孙逸仙纪念医院胃肠外科广州510120

目的探讨微小rna(mi R)-150在肝细胞癌中的表达及其临床意义。方法实时荧光定量聚合酶链反应(q RT-PCR)检测肝癌及配对癌旁组织中mi R-150表达。原位杂交技术(ISH)进一步验证肝癌和配对癌旁组织mi R-150表达差异。将肝癌组织中mi R-150... 详细信息

目的探讨微小rna(mi R)-150在肝细胞癌中的表达及其临床意义。方法实时荧光定量聚合酶链反应(q RT-PCR)检测肝癌及配对癌旁组织中mi R-150表达。原位杂交技术(ISH)进一步验证肝癌和配对癌旁组织mi R-150表达差异。将肝癌组织中mi R-150表达与临床病理特征进行关联分析。Kaplan-Meier法检测mi R-150阴性组和阳性组生存曲线。Cox单因素回归模型分析mi R-150表达与患者术后总生存的相关性。结果 q RT-PCR结果显示:与癌旁组织相比,12例中有8例肝癌组织低表达mi R-150,肝癌组织中mi R-150表达明显降低(P=0.034)。ISH结果与q RT-PCR结果相一致,即肝癌组织大部分为阴性或弱阳性表达,62%癌旁组织ISH染色强度高于配对的肝癌组织(P150表达与AFP、肿瘤大小、TNM分期、组织学分级、脉管癌栓存在明显负相关(P150阳性组患者术后总生存明显高于mi R-150阴性组(P=0.004,Kaplan-Meier法)。Cox单因素回归分析提示肝癌组织低表达mi R-150是患者不良预后指标(P=0.005)。结论肝癌组织低表达mi R-150与肿瘤侵袭表型相关,提示不良预后。

关键词：微小rna-150 肝细胞癌预后

微小rna-150靶向c-Myb表达对T淋巴细胞白血病Jurkat细胞增殖的影响

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安徽医药 2022年第8期26卷 1615-1618页

作者：杨莉刘炜李彦格管玉洁毛彦娜郑州儿童医院、河南省儿童医院、郑州大学附属儿童医院血液肿瘤科河南郑州450000

目的探讨微小rna-150(miR-150)靶向c-Myb表达对人T淋巴细胞白血病(T-LL)Jurkat细胞增殖的影响。方法体外培养人Jurkat细胞,分为空白对照组(不转染)、阴性对照组(转染negative control-miR-150)和miR-150过表达组(转染hsamiR-150 mimic)。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测Jurkat细胞中miR-150及c-Myb表达;人胆囊收缩素/缩胆囊素八肽(CCK-8)法检测Jurkat细胞增殖;流式细胞仪检测各组Jurkat细胞凋亡情况;双荧光素酶报告基因实验检测miR-150和c-Myb的靶向关系;蛋白质印迹法(Western blotting)检测各组Jurkat细胞中c-Myb、增殖细胞核抗原(PCNA)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达情况。结果空白对照组与阴性对照组Jurkat细胞中miR-150表达水平、c-Myb mrna及蛋白表达水平、OD值、细胞凋亡率、及PCNA、Bax蛋白水平差异无统计学意义(P>0.05);与空白对照组相比,miR-150过表达组Jurkat细胞中miR-150表达水平[(1.42±0.14)比(1.03±0.09)]、凋亡率[(20.79±1.15)%比(8.76±0.74)%]、Bax蛋白表达水平[(0.65±0.18)比(0.42±0.13)]显著升高(Prna[(0.66±0.14)比(0.98±0.09)]及蛋白表达水平[(0.37±0.06)比(0.64±0.12)]、OD值[(0.25±0.06)比(0.46±0.09)]、PCNA蛋白表达水平[(0.33±0.07)比(0.56±0.11)]显著降低(P150的靶基因。结论miR-150靶向c-Myb表达抑制Jurkat细胞增殖并诱导其凋亡。

关键词：白血病,T细胞微小rna-150 c-Myb Jurkat细胞细胞增殖

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Linc00152/微小rna-150/β-连环蛋白轴对非小细胞肺癌增殖、迁移和上皮-间充质转化的影响

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中华实验外科杂志 2021年第11期38卷 2183-2186页

作者：徐磊魏立贾向波姚文健胡帅赵璞张全务森河南省人民医院郑州大学人民医院胸外科河南省终末期肺疾病外科治疗工程研究中心河南省肺结节精准治疗工程研究中心河南省肺移植快速康复外科治疗工程研究中心450003

目的探讨Linc00152/微小rna(miR)-150/β-连环蛋白(β-catenin)轴对非小细胞肺癌增殖、迁移和上皮-间充质转化的影响。方法人非小细胞肺癌细胞A549随机分为Linc00152 KD组和长链非编码rna(lncrna)对照组,分别采用Linc00152短发卡rna(shR... 详细信息

目的探讨Linc00152/微小rna(miR)-150/β-连环蛋白(β-catenin)轴对非小细胞肺癌增殖、迁移和上皮-间充质转化的影响。方法人非小细胞肺癌细胞A549随机分为Linc00152 KD组和长链非编码rna(lncrna)对照组,分别采用Linc00152短发卡rna(shrna)和lncrna对照慢病毒感染,建立Linc00152敲降细胞系。采用噻唑蓝(MTT)、克隆形成实验、划痕实验和蛋白质印迹法(Western blot)分析Linc00152对细胞增殖、迁移和上皮-间充质转化的影响。采用生物信息学和双荧光素酶报告基因分析Linc00152和miR-150关系及其靶基因。采用Western blot分析靶基因蛋白表达水平。计量数据比较采用t检验。结果 lncrna对照组细胞Linc00152表达水平(1.24±0.22)明显高于Linc00152 KD组Linc00152表达水平(0.42±0.12),差异有统计学意义(t=4,819,Prna对照组细胞吸光值(2.11±0.18)明显高于Linc00152 KD组(1.75±0.12),差异有统计学意义(t=4,819,Prna对照组细胞迁移数量[(152.65±10.43)个]明显高于Linc00152 KD组[(97.47±9.43)个],差异有统计学意义(t=5.081,Prna对照组细胞上皮标志蛋白N-钙黏蛋白(N-cadherin)表达水平(1.23±0.11)明显低于Linc00152 KD组细胞(2.54±0.33),差异有统计学意义(t=4.909,Prna对照组细胞间质标志蛋白波形蛋白(Vimentin)和E-钙黏蛋白(E-cadherin)蛋白表达水平(1.02±0.09、1.03±0.11)明显高于Linc00152 KD组细胞(0.26±0.07、0.34±0.09),差异有统计学意义(t=4.127、3.298,Prna是miR-150,而miR-150的靶基因是β-catenin。lncrna对照组细胞miR-150表达水平(1.08±0.15)明显低于Linc00152 KD组miR-150表达水平(2.87±0.18),差异有统计学意义(t=3.179,Prna对照组细胞β-catenin蛋白表达水平(1.24±0.22)明显高于Linc00152 KD组β-catenin蛋白表达水平(0.42±0.12),差异有统计学意义(t=4.819,P150促进β-catenin表达。

关键词： Linc00152 非小细胞肺癌微小rna-150 β-连环蛋白增殖迁移