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染色体微切割、微分离、微克隆技术及其研究进展

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遗传 2000年第4期22卷 258-261页

作者：戢福云余其兴武汉大学生命科学学院遗传学系武汉430072

自1981年染色体微切割及微克隆技术创建以来 ,该技术已广泛应用于人类及动植物遗传学、医学、进化学等研究领域 ,主要包括构建特定染色体或染色体区域的DNA文库、制备染色体描绘探针池以研究染色体重排和染色体进化等。本文对该技术的... 详细信息

自1981年染色体微切割及微克隆技术创建以来 ,该技术已广泛应用于人类及动植物遗传学、医学、进化学等研究领域 ,主要包括构建特定染色体或染色体区域的DNA文库、制备染色体描绘探针池以研究染色体重排和染色体进化等。本文对该技术的产生、发展及某些研究进展作一综述。

关键词：染色体微切割微分离微克隆

霍奇金淋巴瘤组织中H/RS细胞与其背景细胞的微切割及其IgH基因重排检测

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第一军医大学学报 2004年第3期24卷 286-289页

作者：周新华赵彤沈新明余江朱梅刚第一军医大学病理学教研室广东广州510515 第一军医大学南方医院普外科广东广州510515

目的从基因水平探讨霍奇金淋巴瘤(HL)组织中H/RS细胞(Hodgkin and Reed-Sternberg cells)是否起源于B细胞、H/RS细胞的克隆性以及与背景淋巴细胞的相互关系。方法对33例经典霍奇金淋巴瘤(cHL)石蜡刮片组织进行IgH基因重排分析,并对其中... 详细信息

目的从基因水平探讨霍奇金淋巴瘤(HL)组织中H/RS细胞(Hodgkin and Reed-Sternberg cells)是否起源于B细胞、H/RS细胞的克隆性以及与背景淋巴细胞的相互关系。方法对33例经典霍奇金淋巴瘤(cHL)石蜡刮片组织进行IgH基因重排分析,并对其中6例重排阳性的病例经B细胞特异性激活蛋白(BSAP)免疫标记,将标记阳性的H/RS细胞和背景淋巴细胞进行微切割后进一步行IgH基因重排分析。结果16例石蜡刮片组织IgH基因重排阳性。对6例经BSAP标记的cHL成功进行了微切割,其中19管H/RS细胞中,有14管出现重排阳性,细胞数目不同的各管阳性率无显著性差异(P=0.290);12管背景淋巴细胞有2管出现重排阳性,H/RS细胞与背景淋巴细胞的阳性率有显著性差异(P=0.002)。结论支持H/RS细胞来源于B细胞的理论,认为部分背景淋巴细胞可能具有瘤性增生活性,参与H/RS细胞的前体细胞组成。

关键词：霍奇金淋巴瘤 H/RS细胞背景细胞微切割 IgH 基因重排检测

在石蜡切片中进行微切割-PCR-银染的方法

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中华医学遗传学杂志 2000年第6期17卷 429-431页

作者：黄智达黄琼来茂德浙江大学医学院病理教研室杭州310031

目的　探索在石蜡切片中应用微切割 - PCR-银染技术 ,检测大肠癌的微卫星不稳定性和杂合性缺失。方法　用微切割技术在 2 8例石蜡切片中提取淋巴细胞和间质细胞、癌旁粘膜腺管、不典型增生腺管、腺瘤腺管和腺癌细胞 ,每例至少包含 3种... 详细信息

目的　探索在石蜡切片中应用微切割 - PCR-银染技术 ,检测大肠癌的微卫星不稳定性和杂合性缺失。方法　用微切割技术在 2 8例石蜡切片中提取淋巴细胞和间质细胞、癌旁粘膜腺管、不典型增生腺管、腺瘤腺管和腺癌细胞 ,每例至少包含 3种类型细胞 ,经蛋白酶 K消化后 ,直接用于 PCR扩增 ,产物进行8%变性聚丙烯酰胺凝胶电泳 -银染。共进行了 TGF-βR (A) 1 0 、h MSH2 (A) 2 6 - Bat2 6 ,h MSH3(A) 8,h MSH6(C) 84个微卫星位点的检测。结果　 h MSH3(A) 8和 h MSH6 (C) 8位点在 2 8例标本全部扩增出目的片段 ,而TGF-βR (A) 1 0 和 h MSH2 (A) 2 6 位点则分别有 2 3例、2 2例扩增出目的片段 ,且 h MSH2 (A) 2 6 位点有 5例癌细胞呈阳性 ,其中 1例同时有腺瘤细胞阳性。结论　微切割 - PCR-银染技术应用于石蜡切片 ,可获得较满意的结果。

关键词：微切割石蜡切片大肠癌微卫星不稳定性 PCR

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植物染色体微切割、微收集及微扩增技术应用

实验室研究与探索 2010年第7期29卷 11-13,26页

作者：高居荣崔法封德顺李兴锋王洪刚山东农业大学农学院国家小麦改良中心泰安分中心作物生物学国家重点实验室山东泰安271018

为使染色体微切割、微收集、微扩增技术在植物精细遗传图谱及物理图谱构建中有效应用,利用SLuCUT全自动激光显微切割系统对普通小麦"中国春"和中间燕麦草染色体进行了微切割、微收集和微克隆研究。结果表明,SLuCUT-A全自动激光显微切割... 详细信息

为使染色体微切割、微收集、微扩增技术在植物精细遗传图谱及物理图谱构建中有效应用,利用SLuCUT全自动激光显微切割系统对普通小麦"中国春"和中间燕麦草染色体进行了微切割、微收集和微克隆研究。结果表明,SLuCUT-A全自动激光显微切割系统使植物染色体的微切割、微分离和微收集技术操作简单、快速准确、污染轻、样本不被降解等;DOP-PCR微量扩增条件适于普通小麦和中间燕麦草微量染色体的高效扩增,通过非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳可以快速、准确地分析判断微扩增产物的来源。

关键词：染色体微切割微收集微克隆

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染色体微切割、微克隆技术及其应用

吉林农业大学学报 2002年第1期24卷 21-24页

作者：毛健民白宝璋周口师范学院生物系河南周口466000 吉林农业大学农学院吉林长春130118

介绍了染色体微切割、微克隆技术的原理及主要方法。

关键词：染色体微切割微克隆植物

向日葵染色体核型分析及单染色体微切割、微分离和微克隆

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向日葵染色体核型分析及单染色体微切割、微分离和微克隆

作者：闫素丽内蒙古农业大学

学位级别：硕士

向日葵是重要的油料作物,对其染色体进行核型分析,微切割、微分离单染色体并建立单染色体文库,可以为向日葵高密度遗传图谱的构建及重要基因的分离等奠定基础。本研究以内葵杂3号三交种和单交种为材料,摸索了向日葵染色体制片技术并进... 详细信息

向日葵是重要的油料作物,对其染色体进行核型分析,微切割、微分离单染色体并建立单染色体文库,可以为向日葵高密度遗传图谱的构建及重要基因的分离等奠定基础。本研究以内葵杂3号三交种和单交种为材料,摸索了向日葵染色体制片技术并进行了核型分析,微分离了随体染色体,建立了完整的单条染色体DNA文库,主要研究内容及结果如下: 1.用0.05%秋水仙素、0.002mol.L-18-羟基喹啉及4℃低温对向日葵根尖进行预处理,结果以0.05%秋水仙素和0.002mol.L-18-羟基喹啉处理效果较好,可以得到染色体分散好,着丝点清晰的标本片。 2.核型分析结果表明:内葵杂3号三交种和单交种的染色体数均为2n=34,且各有一对随体染色体。三交种第2对和第10对染色体为近中部着丝粒染色体,其余为中部着丝粒染色体,第2对具有随体,染色体相对长度变异范围4.092%-7.729%,核型公式为2n=2x=34=30m+4sm(2sat);单交种全部为中部着丝粒染色体,第4对染色体具随体,染色体相对长度变异范围3.661%-8.128 %,其核型公式为:2n=2X=34=34m(2sat)。 3.在国内外首次进行了向日葵的单染色体分离。本文采用玻璃针法显微分离了内葵杂3号三交种和单交种的随体染色体,经两轮LA-PCR扩增得到250-1500bp的DNA片段;Southern杂交表明,扩增片段与向日葵基因组DNA之间有同源性,证明向日葵随体染色体DNA已经被成功扩增。 4.将三交种和单交种随体染色体扩增片段克隆到pGEM?T?Easy上,建立了各自的单染色体文库。三交种获得2.26×105个克隆,PCR检测、酶切鉴定确定片段在200-700bp之间,平均插入片段大小为535bp;单交种获得2.57×105个克隆,PCR检测、酶切鉴定确定片段在200-500bp之间,平均插入片段大小为480bp。

关键词：向日葵染色体核型分析微切割微分离微克隆

植物染色体微分离、微切割与微克隆技术的研究进展

同方学位论文库评论

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亚热带农业研究 2007年第3期3卷 235-240页

作者：申艳红陈晓静福建农林大学园艺学院

介绍了染色体微分离、微切割与微克隆技术的发展历史;综述了植物染色体微分离、微切割和微克隆技术的研究进展及其应用与展望。

关键词：染色体微分离微切割微克隆

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人类染色体中的微切割与微克隆技术

内蒙古民族大学学报（自然科学版） 2003年第2期18卷 151-153页

作者：赵宗孝张丽伟邵小影刘春梅内蒙古民族大学临床医学院内蒙古通辽028041

微切割、微克隆是分子生物学的一项新技术 ,它对于基因的标记与分离、DNA文库的重组及遗传图谱的绘制都发挥着重要作用 .笔者介绍了这项技术在人类染色体中的应用情况 .

关键词：人类染色体微切割微克隆分子生物学基因克隆分子标记 DNA文库遗传图谱

应用自制微切割工具切割石蜡组织行PCR-银染

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诊断病理学杂志 2004年第5期11卷 360-361页

作者：王丽江甘润良黄幼生周建国龚邵新南华大学肿瘤研究所湖南衡阳421001

微切割技术是通过显微操作系统对欲选取的材料(组织、细胞群、细胞、细胞内组分或染色体区带等)进行切割分离并收集用于后续研究的技术.该方法尽可能地排除了背景细胞的干扰,大大提高了分子生物学检测手段的精确度[1].近年来,微切割-PCR... 详细信息

微切割技术是通过显微操作系统对欲选取的材料(组织、细胞群、细胞、细胞内组分或染色体区带等)进行切割分离并收集用于后续研究的技术.该方法尽可能地排除了背景细胞的干扰,大大提高了分子生物学检测手段的精确度[1].近年来,微切割-PCR-银染技术在肿瘤发病机制研究中的应用越来越多,但是目前从石蜡包埋组织中提取基因组DNA还有一定难度,在数量和质量上都不能令人满意[2].国外也有多种微切割-PCR技术的报导,但多以激光捕获微切割(LCM)为主[3],仪器设备昂贵,推广较困难.我们长期摸索在石蜡切片中用自制工具行微切割-DNA提取-PCR-银染的技术,总结出一套较高效、经济、稳定的技术方法.

关键词：微切割肿瘤 PCR 细胞分子生物学检测显微操作银染技术基因组DNA 染色体 LCM