检索结果-南通市图书馆

CRMPs与海马神经元生长锥微管和微丝相互作用的研究

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

CRMPs与海马神经元生长锥微管和微丝相互作用的研究

作者：高媛暨南大学

学位级别：硕士

目的：探讨大鼠海马神经元CRMPs与生长锥微管和微丝的相互作用。材料和方法：取孕17d的SPF级SD孕鼠，采用梯度蔗糖离心的方法提取生长锥，透射电镜和扫描电镜观察分离物的形态，免疫荧光和免疫印迹检测GAP-43的表达。采用多重免疫荧光... 详细信息

目的：探讨大鼠海马神经元CRMPs与生长锥微管和微丝的相互作用。材料和方法：取孕17d的SPF级SD孕鼠，采用梯度蔗糖离心的方法提取生长锥，透射电镜和扫描电镜观察分离物的形态，免疫荧光和免疫印迹检测GAP-43的表达。采用多重免疫荧光技术分析CRMPs与微管和微丝在海马组织中以及在神经元中的共定位情况，免疫共沉淀技术确定CRMPs能否与微管和微丝发生相互作用，通过对CRMP5的干扰和过表达观察其对微管和微丝的影响。结果：（1）梯度浓度蔗糖离心把脑组织悬液分离为3层，上层密度小，浓度位于上清至0.75mol/L蔗糖之间，中层密度较大，浓度位于0.75～1.0mol/L蔗糖之间，下层密度最大，浓度位于1.0～2.66mol/L蔗糖之间;扫描电镜见分离物颗粒均为白色、大小不一、形状不规则的颗粒，上层较中、下层颗粒体积大;透射电镜见上层分离物为大量着色浅的空泡状结构，颗粒大小较均匀，中、下层分离物为大量着色深的致密颗粒及不规则形态的细胞碎片，颗粒大小不均匀;免疫荧光及免疫印迹证实分离物中均有大量GAP-43表达，上层分离物几乎无GFAP表达，中、下层有少量GFAP表达。（2）在海马组织中，CRMPs与微管和微丝的共定位均在CA1-CA3区中央部分最多，在CA1-CA3区边缘部分及CA4区较多，DG区最少，两者共定位系数差异无统计学意义;在神经元中，CRMPs与微管的共定位主要位于神经元胞质、突起主干及突起分支处，放大观察生长锥，共定位主要位于C区，P区、T区微管分布较少，CRMPs与微丝的共定位主要位于神经元胞质、突起主干、突起分支处及生长锥，放大观察生长锥，共定位位于整个生长锥，C区、T区、P区微丝分布均较多，以神经元或以生长锥为对象时，CRMPs与微丝的共定位系数均高于微管，两者共定位系数差异均具有统计学意义;免疫共沉淀试验证实CRMPs与微管和微丝均可发生相互结合;神经元中CRMP5过表达时，微管和微丝表达量均增多，并且在P区增多最明显，CRMP5被干扰时，微管和微丝表达量均减少，也在P区减少最明显。结论：（1）梯度蔗糖离心可以依据颗粒的大小分离脑组织的不同组分，获取的分离物最上层内的组分经鉴定为生长锥;（2）CRMPs在海马组织中与微管和微丝共存相同的部位;（3）CRMPs在体内可与微管和微丝发生相互结合，并可影响微管和微丝的表达量及分布，CRMPs可能通过介导细胞骨架的相互作用来调节神经元突起的生长。

关键词： CRMPs 生长锥微管微丝电镜免疫荧光免疫印迹免疫共沉淀

用免疫荧光细胞化学法观察肿瘤细胞内的微丝分布

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

上海第二医科大学学报 1991年第3期11卷 210-214页

作者：赵雁飞郭寿延赵涵芳上海第二医科大学病理学教研室

文章介绍了从鸡砂囊平滑肌中提取肌动蛋白抗原及抗肌动蛋白血清的制备,并用自制抗血清应用于间接免疫荧光染色技术,观察体外培养的5种正常细胞和3种肿瘤细胞株内的微丝结构。观察结果提示正常细胞中微丝的数量、分布,形态与细胞的不同... 详细信息

文章介绍了从鸡砂囊平滑肌中提取肌动蛋白抗原及抗肌动蛋白血清的制备,并用自制抗血清应用于间接免疫荧光染色技术,观察体外培养的5种正常细胞和3种肿瘤细胞株内的微丝结构。观察结果提示正常细胞中微丝的数量、分布,形态与细胞的不同时相、运动和形态变化有关。含肌动蛋白的微丝可呈现直纤维状的线型荧光或呈弥散的颗粒状荧光。肿瘤细胞内微丝的数量略有减少,排列稀疏,在细胞浆内分布不均匀。与正常细胞间存在一定差异。

关键词：肿瘤细胞微丝免疫荧光细胞化学

增强UV-B辐射对小麦叶肉细胞原生质体微丝骨架的影响

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

生物学杂志 2010年第6期27卷 33-36页

作者：翟菁如陈慧泽高丽美李永峰韩榕山西师范大学生命科学学院临汾041004

以增强UV-B(10.08 kJ/m2.d)辐射后的小麦幼苗叶肉细胞原生质体为材料,异硫氰酸荧光素标记的鬼笔环肽(FITC-Ph)为探针,利用激光共聚焦扫描显微镜,观察分析小麦叶肉细胞原生质体中微丝骨架的分布及形态变化。结果表明对照组中,叶肉细胞原... 详细信息

以增强UV-B(10.08 kJ/m2.d)辐射后的小麦幼苗叶肉细胞原生质体为材料,异硫氰酸荧光素标记的鬼笔环肽(FITC-Ph)为探针,利用激光共聚焦扫描显微镜,观察分析小麦叶肉细胞原生质体中微丝骨架的分布及形态变化。结果表明对照组中,叶肉细胞原生质体微丝呈现网状或平行状随机排列,形态上表现为纤维状结构。增强UV-B辐射处理后,原生质体中微丝的密集分布遭到破坏,纤丝状微丝消失,聚集成束,或呈点状、碎片状分布。

关键词：增强UV-B 小麦原生质体微丝激光共聚焦扫描显微镜

补肾通络法组方对骨性关节炎模型大鼠软骨细胞微丝结构的影响

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

补肾通络法组方对骨性关节炎模型大鼠软骨细胞微丝结构的影响

作者：何云欢安徽中医药大学

学位级别：硕士

1目的通过改良Hulth方法完成SD大鼠膝骨性关节炎模型的构建,观察补肾通络法组方对该模型大鼠膝关节软骨细胞骨架微丝结构的影响,进而探究补肾通络发组方治疗膝骨性关节炎的分子机制。2方法从动物饲养中心购买60只SD大鼠将其随机分为4组,... 详细信息

1目的通过改良Hulth方法完成SD大鼠膝骨性关节炎模型的构建,观察补肾通络法组方对该模型大鼠膝关节软骨细胞骨架微丝结构的影响,进而探究补肾通络发组方治疗膝骨性关节炎的分子机制。2方法从动物饲养中心购买60只SD大鼠将其随机分为4组,这4组包括JS(假手术)组、MX(模型)组、XY(西药,布洛芬)组,ZY(中药)组,每组各自分得15只。四组中,MX组、XY组、ZY组均采用改良Hulth方法进行模型的制作,(手术方法:离断SD大鼠右侧膝关节内侧副韧带、前交叉韧带,完整分离出内侧半月板),JS组的老鼠只切开关节囊。术后常规饲养六周,建立膝骨性关节炎动物模型,以X线是否符合骨关节炎的表现来确定造模是否成功,确定造模成功后第一天起开始给药。各组的用药剂量:JS组、MX组分别给予生理盐水(1ml/100g)灌胃;XY组给予布洛芬混悬液(1ml/100g)灌胃;ZY组给予中药(1ml/100g)灌胃;各组给药频率均为一天一次,连续灌胃6周。于喂药六周后,处死全部实验SD大鼠,取大鼠右股骨内外髁进行大体观察。大体观察后对所有右股骨髁进行常规脱钙、蜡块包埋和切片。对上述切片进行HE染色,观察右股骨内外髁软骨组织形态。同时采用改良Mankin’s评分法对软骨组织进行评定。取上述切片采用免疫荧光标记法对软骨细胞骨架微丝进行荧光染色,使用CLSM对微丝进行形态学观察和荧光强度的检测。3结果(1)大体观察:JS组右股骨内外侧髁软骨面光滑无退变。MX组右股骨内外侧髁软骨面退变严重。XY组右股骨内外侧髁软骨面退变明显,但外侧同内侧相比较轻。ZY组右股骨内侧髁软骨面轻度退变,外侧髁光滑无退变。(2)软骨组织学观察:JS组股骨内外侧髁软骨的四层结构完整,软骨细胞数量正常。MX组股骨内外侧髁部分区域软骨的四层结构均有损坏,软骨细胞的数量有所减少,内侧损伤较轻。XY组股骨内侧髁部分区域损伤到软骨肥大细胞层,细胞数量减少,外侧髁软骨损伤到中间层,细胞数量增多。ZY组股骨内侧髁软骨的表浅层有损伤,软骨细胞数量正常,外侧髁软骨同JS组无异。(3)微丝结构的观察:JS组股骨内外侧髁软骨的微丝为与细胞长轴平行的线状纤维。MX组股骨内外侧髁软骨微丝发生明显的固缩。XY组股骨内侧髁软骨微丝发生明显的固缩,外侧软骨微丝适度的增粗和固缩,但程度较内侧轻。ZY组股骨内外侧髁软骨的微丝与JS组相比保持着较好的线状形态。(4)Mankin’s评分:组间比较:对股骨内外侧髁软骨四组间的Mankin’s评分进行比较,四组不完全相等(p0.05),ZY和XY组内外侧髁的Mankin’s评分差异具有统计学意义(p微丝的定量分析:四组间股骨内外侧髁软骨细胞骨架微丝荧光定量分析,各组间内外侧髁的微丝含量差异均没有统计学意义(p>0.05)。4结论(1)骨性关节炎关节软骨细胞骨架微丝结构有形态学形变;(2)补肾通络组方可以抑制膝骨性关节炎关节软骨细胞微丝形变,对保护软骨组织完整有一定作用;(3)正常软骨与骨性关节炎软骨细胞骨架微丝的含量无变化。

关键词：补肾通络法骨性关节炎软骨细胞微丝

鼻咽癌细胞对HA的粘附作用及微丝的共聚焦显微镜观察

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

中国组织化学与细胞化学杂志 1997年第1期6卷 84-88页

作者：张钦明廖新波唐慰萍孙宁广东医学院病理学教研室

本文研究了人鼻咽癌上皮细胞系ＣＮＥ－２Ｚ对透明质酸（ＨＡ）的粘附作用及其粘附后微丝的改变，结果表明，鼻咽癌细胞粘附的ＯＤ值随ＨＡ浓度的升高而升高，３００μｇ／ｍｌ、１２５０μｇ／ｍｌ组与对照组比较有极显著性意义，Ｐ＜... 详细信息

本文研究了人鼻咽癌上皮细胞系ＣＮＥ－２Ｚ对透明质酸（ＨＡ）的粘附作用及其粘附后微丝的改变，结果表明，鼻咽癌细胞粘附的ＯＤ值随ＨＡ浓度的升高而升高，３００μｇ／ｍｌ、１２５０μｇ／ｍｌ组与对照组比较有极显著性意义，Ｐ＜０．０１；癌细胞粘附的ＯＤ值随培养时间延长而升高，２４０ｍｉｎ组及１２０ｍｉｎ组与６０ｍｉｎ组比较有极显著性意义，Ｐ＜０．０１。ＬＳＭ观察ＨＡ浓度为３００μｇ／ｍｌ时培养４ｈ和２４ｈ的癌细胞微丝的分布明显不同，培养４ｈ的癌细胞呈圆形，微丝均匀地分布于胞浆内；培养２４ｈ的癌细胞呈不规则形，微丝主要分布于与ＨＡ的粘附面上。上述结果提示ＨＡ可促进鼻咽癌细胞粘附。

关键词：鼻咽癌粘附透明质酸微丝共聚焦显微镜

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

微管微丝交联因子1的结构与功能

细胞生物学杂志 2008年第2期30卷 187-190页

作者：骞爱荣胡丽芳商澎西北工业大学生命科学学院空间生物实验模拟技术国防重点学科实验室西安710072

微管微丝交联因子1(microtubule actin cross-linking factor 1,MACF1)是一种新的细胞骨架交联蛋白,属于血影斑蛋白(spectraplakin)家族成员之一,包含3个基本结构域即N末端结构域、杆状结构域及C末端结构域。其主要功能是交联微丝微管... 详细信息

微管微丝交联因子1(microtubule actin cross-linking factor 1,MACF1)是一种新的细胞骨架交联蛋白,属于血影斑蛋白(spectraplakin)家族成员之一,包含3个基本结构域即N末端结构域、杆状结构域及C末端结构域。其主要功能是交联微丝微管细胞骨架,参与细胞信号转导、蛋白质运输、胚胎发育以及疾病发生等过程。近年来,MACF1在细胞骨架动力学过程中的作用备受关注。现就该分子的结构与功能的最新研究进展进行综述。

关键词：微管微丝交联因子1 细胞骨架信号转导微丝微管

玉米小斑病菌C小种致病特性及HMC毒素对细胞骨架微丝分布影响的研究

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

玉米小斑病菌C小种致病特性及HMC毒素对细胞骨架微丝分布影响的研...

作者：陈颖河北师范大学

学位级别：硕士

玉米小斑病(Southern blight of corn)是当前国内外玉米生产区普遍流行的一种真菌性病害，在致病过程中能产生对其寄主植物具有致病活性的代谢产物，即致病毒素。本研究首先从玉米小斑病菌C小种致病力的恢复、HMC毒素的产生与培养条件... 详细信息

玉米小斑病(Southern blight of corn)是当前国内外玉米生产区普遍流行的一种真菌性病害，在致病过程中能产生对其寄主植物具有致病活性的代谢产物，即致病毒素。本研究首先从玉米小斑病菌C小种致病力的恢复、HMC毒素的产生与培养条件的关系、玉米小斑病菌C小种致病过程与钙信号系统的关系、HMC毒素对同核异质玉米叶肉细胞原生质体的影响四个方面对玉米小斑病菌C小种致病特性进行了研究。结果表明：玉米小斑病菌C小种可采用PDA培养基与寄主叶片连续共培养的方法提高产孢量和致病力;黑暗、静止培养有利于毒素的产生;毒素的提取过程中，洗脱液的改进提高了毒素的纯度，相应地提高了毒素的致病力;钙信号途径抑制剂EGTA、Verapamil、KN-93对玉米小斑病菌分生孢子萌发和附着胞的形成过程具有抑制作用，说明钙信号途径参与了小斑病菌分生孢子萌发和附着胞的形成过程，且这种参与表现在孢子萌发和附着胞形成过程的早期;HMC毒素对C细胞质玉米叶肉细胞原生质体具有破坏作用，可使原生质体破裂、瓦解，而对N细胞质玉米叶肉细胞原生质体的破坏作用不明显，说明玉米小斑病菌C小种对C细胞质玉米的原生质体具专化破坏作用。微丝是细胞骨架的重要成分，从细胞水平来说，许多生物学过程，需要有细胞骨架的参与。本研究还利用荧光标记和激光共聚焦显微镜相结合的方法，研究了HMC毒素对同核异质体玉米根冠细胞微丝骨架分布的影响。结果表明：HMC毒素可破坏C细胞质玉米根冠细胞微丝的分布，80μg／ml的HMC毒素使微丝的分布受到严重破坏，但同浓度的HMC毒素对N细胞质玉米根冠细胞的微丝分布的影响不明显，说明HMC毒素对C细胞质玉米根冠细胞微丝分布的影响具有专化性。HMC毒素对细胞骨架微丝分布的影响和细胞松弛素B的作用相似，但两者的机制可能不同。

关键词：玉米小斑病菌C小种 HMC毒素玉米雄性不育细胞质钙信号途径孢子萌发附着胞激光共聚焦显微镜微丝

CRMP4与微丝相互作用介导海马神经元突起生长和树突棘形成的研究

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

CRMP4与微丝相互作用介导海马神经元突起生长和树突棘形成的研究

作者：叶永恒暨南大学

学位级别：硕士

目的:探讨CRMP4是否能与微丝发生相互作用并明确结合部位,以及如何影响神经元的轴突、树突及树突棘发育。方法:首先构建GST-CRMP4及其截短片段原核质粒,然后进行体外表达其融合蛋白,利用pull-down实验分析CRMP4与微丝的结合部位;最后构... 详细信息

目的:探讨CRMP4是否能与微丝发生相互作用并明确结合部位,以及如何影响神经元的轴突、树突及树突棘发育。方法:首先构建GST-CRMP4及其截短片段原核质粒,然后进行体外表达其融合蛋白,利用pull-down实验分析CRMP4与微丝的结合部位;最后构建CRMP4及其截短片段的真核质粒,转染至原代培养的海马神经元,观察CRMP4与微丝结合后对神经元突起生长及树突棘形成的作用。结果:(1)构建重组原核质粒酶切结果显示,酶切条带大小与预期的相符,CRMP4的截短片段GST-CRMP4ΔN323、GST-CRMP4ΔC471测序结果与预期的序列完全吻合,无突变发生;(2)原核表达系统表达相应的CRMP4及其截短片段质粒的融合蛋白,融合蛋白分子量分别为90.7k Da、53 k Da、77 k Da,与预期大小一致;(3)用体外表达的CRMP4及其截短片段质粒的与脑组织蛋白提取液进行的pull down实验,结果显示,GST-CRMP4、GST-CRMP4ΔN323可以成功层析出肌动蛋白;(4)构建重组真核质粒酶切结果显示,酶切条带大小与预期的相符,CRMP4的截短片段CRMP4ΔN323、CRMP4ΔC471测序结果与预期的序列完全吻合,无突变发生(5)将构建成功的CRMP4及其截短质粒和对应的空载体使用钙磷转染法转染至原代培养的海马神经元,然后通过免疫细胞化学来观察发现CRMP4与微丝结合后可以促进神经元突起生长及树突棘形成。结论:(1)成功构建了CRMP4截短片段的原核和真核表达载体;(2)体外成功表达了GST-CRMP4及其截短片段的融合蛋白;(3)GST-CRMP4、GST-CRMP4△N323与微丝蛋白结合,但GST-CRMP4△C471不与微丝蛋白结合,说明CRMP4与微丝的结合位点位于C末端的471-570氨基酸中;(4)真核质粒CRMP4和CRMP4△N323通过微丝相互作用促进神经元突起生长及树突棘形成。

关键词：坍塌反应调节蛋白微丝神经元生长锥树突棘原核表达

OsVPE3及微丝在介导水稻糊粉层细胞程序性死亡中的作用机制

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

OsVPE3及微丝在介导水稻糊粉层细胞程序性死亡中的作用机制

作者：张鹤婷海南大学

学位级别：硕士

细胞程序性死亡（programmed cell death,PCD）贯穿于植物的生长发育过程,是一种由基因控制且自主有序的死亡方式。禾谷类作物糊粉层PCD是种子萌发中的一个关键环节。研究证实,微丝结构的变化会影响液泡的形态,而且,液泡加工酶（vacuola... 详细信息

细胞程序性死亡（programmed cell death,PCD）贯穿于植物的生长发育过程,是一种由基因控制且自主有序的死亡方式。禾谷类作物糊粉层PCD是种子萌发中的一个关键环节。研究证实,微丝结构的变化会影响液泡的形态,而且,液泡加工酶（vacuolar processing enzyme,VPE）在液泡的形态及液泡化进程中起着重要的作用。本研究以’优Ⅱ128’品种的水稻（Oryza sativa L.）种子为实验材料,通过药理学、生物化学、细胞形态学和分子生物学等手段,采用荧光标记及荧光染色等方法,并结合实时荧光定量PCR技术和激光共聚焦扫描显微技术,检测全水稻种子及其胚、胚乳和糊粉层中的四种OsVPEs,以及在糊粉层中起主要作用的OsVPE;观察及检测水稻糊粉层细胞中液泡形态和微丝结构变化,同时,测定并分析水稻糊粉层细胞的存活率、OsVPE3相对表达水平及VPE活性水平,探讨OsVPE3及微丝对水稻糊粉层细胞程序性死亡的影响及其作用机制。结果表明:（1）在与水稻种子萌发相关的四种OsVPEs中,OsVPE3相对表达水平及VPE活性水平最高,即在水稻种子萌发过程中起相对重要作用的是OsVPE3。与萌发水稻全种子及其胚和胚乳相比,糊粉层中的OsVPE3相对表达水平及VPE活性水平也达到最高,并且随着种子萌发,糊粉层的OsVPE3相对表达水平发生相应变化;（2）水稻糊粉层中的VPE活性变化趋势与caspase-1的活性变化趋势呈现一致性。caspase-1专一性抑制剂Ac-YVAD-CMK可有效抑制VPE、caspase-1及 caspase-3 活性,而 caspase-3 专一性抑制剂 Ac-DEVD-CHO 只抑制 caspase-3活性,推测OsVPE3具有类似caspase-1的活性,不具有类似caspase-3的活性,但水稻糊粉层的OsVPE3可能通过类似caspase-3起作用;（3）GA可通过上调水稻糊粉层OssVPE3的相对转录水平及VPE活性水平,促进水稻糊粉层PCD进程,而ABA则显著降低OsVPE3相对表达水平及VPE活性,即ABA与GA存在拮抗作用,可逆转GA促进PCD的作用,从而延缓PCD的发生;（4）在整个液泡融合过程中都伴随着微丝结构的变化,即发生微丝的解聚与聚合。促进或抑制微丝解聚会加快或延缓液泡融合进程;同时,抑制VPE活性会延缓微丝的解聚,从而延迟液泡融合,因此,VPE可以通过微丝介导调节水稻糊粉层液泡的融合;（5）促进微丝解聚有助于诱导OsVPE3相对转录水平及VPE活性水平的上调,加快水稻糊粉层PCD进程;抑制VPE活性或类似caspase-1活性则逆转微丝解聚对VPE活性的上调效应,进而延缓水稻糊粉层PCD进程,推测微丝介导OsVPE3调控水稻糊粉层PCD的发生。综上结果证实,激活OsVPE3及解聚微丝均可加速水稻糊粉层细胞程序性死亡的发生。水稻糊粉层中的GA诱导OsVPE3,而OsVPE3进一步激活类似caspase-3,并且,OsVPE3通过与微丝协同作用调控水稻糊粉层PCD的进程。

关键词： OsVPE3 微丝细胞程序性死亡 caspase-1 caspase-3 水稻糊粉层