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微滴数字聚合酶链反应法检测晚期肺腺癌患者血浆循环肿瘤DNA表皮生长因子受体基因突变的临床价值研究

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中华医学杂志 2018年第29期98卷 2336-2340页

作者：马丽吕嘉林李琨王敬慧杨新杰李曦张卉张权秦娜张树才首都医科大学附属北京胸科医院、北京市结核病胸部肿瘤研究所肿瘤内科 101149 首都医科大学附属北京胸科医院、北京市结核病胸部肿瘤研究所病理科 101149

目的探讨微滴数字聚合酶链反应法（ddPCR）检测晚期肺腺癌患者血浆循环肿瘤脱氧核糖核酸（ctDNA）中表皮生长因子受体（EGFR）基因突变的临床价值.方法收集2015年5月至2017年4月在北京胸科医院确诊的初治晚期肺腺癌患者共136例,突变... 详细信息

目的探讨微滴数字聚合酶链反应法（ddPCR）检测晚期肺腺癌患者血浆循环肿瘤脱氧核糖核酸（ctDNA）中表皮生长因子受体（EGFR）基因突变的临床价值.方法收集2015年5月至2017年4月在北京胸科医院确诊的初治晚期肺腺癌患者共136例,突变扩增系统（ARMS）检测肺癌肿瘤组织中EGFR基因突变情况;ddPCR和ARMS技术检测血浆中EGFR的基因突变情况.EGFR敏感突变患者均接受比较不同检测技术的符合率.EGFR敏感突变患者一线接受EGFR酪氨酸激酶抑制剂（EGFR-TKI）口服治疗.通过生存分析比较不同技术检测EGFR基因突变患者无进展生存时间（PFS）.结果 136例肺癌肿瘤组织样本中,共检测到111例EGFR敏感突变（81.6％）,其中含Exon21 L858R突变48例（43.2％）,含Exon19 del突变59例（53.2％）,其他突变4例（3.6％）.ARMS检测血浆EGFR基因突变的敏感度为58.6％,特异度为96.0％.ddPCR检测血浆EGFR突变的敏感度为79.3％,特异度为100％,与肿瘤组织检测的符合率达83.1％（Kappa=0.685,P〈0.001）.Kaplan-Meier生存分析显示,在组织检测EGFR基因突变的亚组分析中,与单一技术检测阳性的病例相比,ddPCR和ARMS两种技术均为阳性的患者无进展生存时间最短（11.6个月比14.8个月,χ^2=2.517,P=0.026）.结论作为一种可靠的、高敏感度和特异度的技术,ddPCR有望应用于检测血浆ctDNA EGFR基因突变情况,血液检测EGFR基因突变可预测患者对EGFR-TKI的疗效.

关键词：肺肿瘤数字微滴聚合酶链反应表皮生长因子受体基因突变循环肿瘤脱氧核糖核酸突变扩增系统

循环肿瘤细胞分离及外周血EGFR检测的相关研究分析

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循证医学 2016年第1期16卷 46-48,52页

作者：王洁张秋怡中国医学科学院肿瘤医院北京100021 广东省人民医院肿瘤中心广东省医学科学院广东省肺癌研究所广州510080

目前，病理活检是肺癌患者临床诊断的金标准，也是基因分型诊断的金标准。但由于活检的有创性，临床上往往难以进行多次活检获得足够的组织标本，而“液体活检”循环肿瘤细胞（circulatingtumorcell，CTC）和循环肿瘤DNA（circulatingtu... 详细信息

目前，病理活检是肺癌患者临床诊断的金标准，也是基因分型诊断的金标准。但由于活检的有创性，临床上往往难以进行多次活检获得足够的组织标本，而“液体活检”循环肿瘤细胞（circulatingtumorcell，CTC）和循环肿瘤DNA（circulatingtumorDNA，ctDNA），因操作方便、无创、全面地反应整体情况，近年来成为研究热点。

关键词：肺癌液体活检循环肿瘤细胞循环肿瘤 DNA

Real-time PCR检测肝细胞癌患者循环肿瘤细胞技术体系的建立及围手术期循环肿瘤细胞变化的临床研究

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中国科技成果 2017年第14期18卷 31-35页

作者：王天然高杰欧洋崔凯李胜上海机场出入境检验检疫局虹桥办事处上海200335 烟台毓璜顶医院肝胆外二科山东烟台264000 济南大学/山东省医学科学院医学与生命科学学院山东济南250200 山东大学附属山东省肿瘤医院肝胆外科山东济南250117

本研究的目的是建立检测肝细胞癌患者外周血循环肿瘤细胞的Real-time PCR技术体系，研究肝细胞癌患者围手术期循环肿瘤细胞的变化情况。通过筛选出肝细胞癌CTCs特异性的靶基因并应用Real-timePcR检测靶基因（AFP、GPC3、CK18、CK19、CD... 详细信息

本研究的目的是建立检测肝细胞癌患者外周血循环肿瘤细胞的Real-time PCR技术体系，研究肝细胞癌患者围手术期循环肿瘤细胞的变化情况。通过筛选出肝细胞癌CTCs特异性的靶基因并应用Real-timePcR检测靶基因（AFP、GPC3、CK18、CK19、CD155）表达的特异性及灵敏度，建立Real-time PCR检测肝细胞癌CTCs技术体系，检测外周血中以mRNA为标记的CTC数目。确定了AFP、GPC3和CK19作为目标靶基因；针对25例肝细胞癌患者外周血的检测结果显示：外周血循环肿瘤细胞手术切除后较手术前靶基因表达量有所降低，但所筛选的AFP、GPC3、CK19三个基因在手术后1、5、5、7、10天没有检测到有统计学意义的变化。结果显示，HCC患者手术后外周血中CTCs较手术前有所降低，表明经手术切除肿瘤的治疗方式有可能预防HCC癌细胞的血行播散；在Sprinking实验中，以AFP、GPC3、CK19为检测靶基因的技术体系具有较高的特异性和灵敏度，可以作为研究HCC患者CTCs的目标靶基因。

关键词：肝细胞癌实时荧光定量PCR 循环肿瘤细胞 AFP GPC3 CK19

免疫治疗相关生物标志物在消化道肿瘤中的应用

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中国肿瘤临床 2022年第12期49卷 631-635页

作者：陈渝宏杨彪(综述) 廖正银(审校) 四川大学华西临床医学院华西医院腹部肿瘤科成都市610041

以程序性死亡-1(programmed death-1,PD-1)及程序性死亡配体1(programmed death-ligand 1,PD-L1)等免疫检查点抑制剂为代表的免疫治疗,使多种消化道肿瘤如胃癌、直肠癌、肝癌等能够获得持续缓解和生存获益,尤其是对有转移或者复发的患... 详细信息

以程序性死亡-1(programmed death-1,PD-1)及程序性死亡配体1(programmed death-ligand 1,PD-L1)等免疫检查点抑制剂为代表的免疫治疗,使多种消化道肿瘤如胃癌、直肠癌、肝癌等能够获得持续缓解和生存获益,尤其是对有转移或者复发的患者获益更多。但并非所有胃肠道肿瘤的患者对抗PD-1和抗PD-L1的治疗均有较好的反应。因此亟需其他生物标志物来识别对治疗有效和无效的患者,以更好地预测其临床疗效。PD-L1的表达已逐渐成为预测免疫治疗疗效的潜在生物标志物,但仅依靠PD-L1不足以对患者可能的临床结果进行分类。其他生物分子,如肿瘤突变负荷(tumor mutational burden,TMB)、微卫星不稳定(microsatellite instability,MSI)及循环肿瘤DNA(circulating tumor DNA,ctDNA)等也在进一步探索中。但由于这些分子自身的局限性,目前在消化系统肿瘤免疫治疗中尚缺乏较好的生物标志物来实现患者识别和筛选,尤其是肝癌。本文将对已发现的生物标志物进行总结,以期为临床治疗和探索其他新的生物标志物奠定基础。

关键词：生物标志物程序性死亡受体-1 肿瘤突变负荷微卫星不稳定性循环肿瘤 DNA

基于杂交链式反应和共价有机框架的新型荧光传感器用于ctDNA的高灵敏和选择性检测

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化学通报 2024年第4期87卷 456-463,385页

作者：赵璐王涛王超宇毛佳欣刘志雄李雅茹白云峰冯锋山西大同大学化学与化工学院化学生物传感山西省重点实验室大同037009 山西大同大学农学与生命科学学院大同037009

共价有机框架是近年来发展起来的一种高度结晶的多孔聚合物,由有机单元连接形成。由于其优异的孔隙率、模块性、结晶性和生物相容性,在传感领域显示出良好的应用前景。本文开发了一种基于杂交链式反应(HCR)和共价有机框架的新型荧光传... 详细信息

共价有机框架是近年来发展起来的一种高度结晶的多孔聚合物,由有机单元连接形成。由于其优异的孔隙率、模块性、结晶性和生物相容性,在传感领域显示出良好的应用前景。本文开发了一种基于杂交链式反应(HCR)和共价有机框架的新型荧光传感平台,用于高灵敏地检测循环肿瘤DNA(ctDNA)。ctDNA可以作为HCR的激活剂,通过触发发夹1(H1)和发夹2(H2)的自主交叉打开,激活HCR形成延伸的有缺口的双链DNA,导致荧光信号的变化,从而实现ctDNA的定量检测。HCR产物和荧光信号分别采用琼脂糖凝胶电泳和荧光光谱进行表征。在0~10 nmol/L范围内,ctDNA的浓度与荧光信号呈良好的线性关系,检测限为1.3nmol/L。该方法对ctDNA具有满意的选择性,并在人类血清样品检测中显示出良好的性能。该荧光传感平台为ctDNA的检测提供了新思路,在癌症早期诊断中显示出潜在的应用前景。

关键词：共价有机框架荧光检测杂交链式反应循环肿瘤 DNA 传感诊断

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液体活检在原发性肝癌中的研究进展

中华实验外科杂志 2020年第10期37卷 1979-1982页

作者：周江敏侯炳武王金林张志伟华中科技大学同济医学院附属同济医院肝脏外科武汉430030

原发性肝癌是临床上常见的恶性肿瘤之一,其发病率和死亡率高。虽然数十年来,肝癌的诊断和治疗在不断发展,但目前肝癌的诊断仍主要依赖于影像学、组织活检和甲胎蛋白(AFP)等肿瘤标志物。受限于上述检测手段的特异性和灵敏性,70%的患者在... 详细信息

原发性肝癌是临床上常见的恶性肿瘤之一,其发病率和死亡率高。虽然数十年来,肝癌的诊断和治疗在不断发展,但目前肝癌的诊断仍主要依赖于影像学、组织活检和甲胎蛋白(AFP)等肿瘤标志物。受限于上述检测手段的特异性和灵敏性,70%的患者在确诊时已经失去手术机会,故目前肝癌的整体预后仍然很差。因此,如何实现早期诊断,实施精准个体化治疗对提高肝癌的整体预后至关重要。液体活检主要包括循环肿瘤细胞(CTC)和游离DNA(cfDNA),以其微创,取材方便,可重复检测,动态监测等优势,有望在早期诊断、动态监测、评估预后和治疗效果、药物筛选等方面发挥重要作用。

关键词：液体活检循环肿瘤细胞游离 DNA 循环肿瘤 DNA 原发性肝癌

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液体活检在肺癌诊疗中的应用

实用医院临床杂志 2023年第5期20卷 18-21页

作者：陈长强马丽芳王佳谊上海市胸科医院检验科上海200030

肺癌是目前我国发病率和死亡率最高的恶性肿瘤之一,早期肺癌患者多无明显症状,而约60%的肺癌患者在初诊时即有远处转移,晚期患者5年生存率不高。因此,临床亟需可用于肺癌早期筛查和诊断、个体化治疗监测、预后评估及耐药监测等方面的新... 详细信息

肺癌是目前我国发病率和死亡率最高的恶性肿瘤之一,早期肺癌患者多无明显症状,而约60%的肺癌患者在初诊时即有远处转移,晚期患者5年生存率不高。因此,临床亟需可用于肺癌早期筛查和诊断、个体化治疗监测、预后评估及耐药监测等方面的新兴肿瘤标志物。相较于传统的组织活检,液体活检因其无创、样本易获得、重复性高、可反映肿瘤的整体状态等优势,能够实现对肿瘤实时监测,已成为近年研究的热点。本文就液体活检在肺癌临床诊疗中的应用作一综述。

关键词：肺癌液体活检循环肿瘤细胞循环肿瘤 DNA 外泌体