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彩鲫Ran基因全长cDNA的克隆及其组织表达特异性分析

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Zoological Research 2003年第3期24卷 173-179页

作者：李常健刘军石耀华杨书婷桂建芳中国科学院水生生物研究所

根据Ran的保守区序列设计简并引物 ,结合SMARTcDNA合成及RACE PCR技术 ,克隆到彩鲫(Carassiusauratuscolorvariety)的Ran基因的cDNA全长 ,其编码区全长为 6 4 8bp ,编码 2 15个氨基酸。采用BLAST程序在NCBI数据库中对其进行同源基因搜... 详细信息

根据Ran的保守区序列设计简并引物 ,结合SMARTcDNA合成及RACE PCR技术 ,克隆到彩鲫(Carassiusauratuscolorvariety)的Ran基因的cDNA全长 ,其编码区全长为 6 4 8bp ,编码 2 15个氨基酸。采用BLAST程序在NCBI数据库中对其进行同源基因搜索 ,结果表明 ,其推测的编码氨基酸序列与斑马鱼和鲑鱼的Ran基因编码的氨基酸序列的同源性分别高达 98%和 97%。还对其编码区全长序列进行了原核表达 ,以经纯化的表达蛋白免疫家兔 ,制备出了具有较高特异性的多克隆抗体。采用Westernblotting进行的组织特异性分析表明 ,Ran蛋白在卵巢、精巢和肾中表达 ,在心、脑、肝、脾和肌肉中不表达。本工作为采用免疫耗竭法、免疫共沉淀、体外系统模拟等方法进一步研究鱼类Ran基因的生理功能及分离鉴定其结合蛋白提供了良好基础。

关键词：彩鲫克隆表达抗体 Ran基因特异性

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彩鲫hira基因片段的克隆及表达分析

水生生物学报 2007年第2期31卷 220-225页

作者：杜新征王玉凤桂建芳华中师范大学生命科学学院武汉430079 中国科学院水生生物研究所淡水生态与生物技术国家重点实验室武汉430072

hir/hira基因最先作为组蛋白基因表达的一种负调节因子从酵母中被鉴定出来。现已证实,HIRA包含一组保守的蛋白家族,广泛存在于低等真核生物、无脊椎动物和脊椎动物等多种生物体当中,为生命发育所必需。关于hira基因在动物发育过程中的... 详细信息

hir/hira基因最先作为组蛋白基因表达的一种负调节因子从酵母中被鉴定出来。现已证实,HIRA包含一组保守的蛋白家族,广泛存在于低等真核生物、无脊椎动物和脊椎动物等多种生物体当中,为生命发育所必需。关于hira基因在动物发育过程中的具体作用研究还不是很多,为了进一步探讨hira基因在鱼类发育过程中的作用,作者根据已知hira基因保守序列设计一对简并引物,分别以彩鲫基因组DNA和卵巢cDNA为模板克隆了彩鲫hira基因(Cahira)片段,该片段基因组序列为2181bp,基因组片段含有6个内含子,长度分别为118bp、275bp、372bp、84bp、472bp、86bp;cDNA序列为759bp,编码253个氨基酸,具有5个WD结构域。对其氨基酸序列进行比较,结果表明,彩鲫hira基因的氨基酸序列与河、爪蟾、鸡、小鼠、人的hira基因氨基酸序列具有非常高的同源性,分别高达92%、89%、89%、87%和88%。组织特异性表达分析表明,所检测的彩鲫组织除了精巢和肌肉中未检测到hira基因表达外,其余组织均有表达。其中卵巢和肝脏中表达很强,而在脑、心、脾、肾中表达较弱,说明该基因可能在维持卵巢和肝脏组织的功能方面起一定作用。

关键词：彩鲫 hira基因克隆组织表达

彩鲫ran基因原核表达蛋白多克隆抗体的制备

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淡水渔业 2006年第2期36卷 3-5页

作者：李常健蒋琼凤湖南科技学院生命科学与化学工程系湖南永州425006

采用SDS-PAGE分离纯化彩鲫(Carassius auratus gibelio)ran基因编码区cDNA全长序列的原核表达蛋白,并以此为抗原免疫家兔,制备了相应的多克隆抗体;W estern b lotting结果表明,该抗体效价为1∶1000,具有较高的特异性。并从抗原蛋白相对... 详细信息

采用SDS-PAGE分离纯化彩鲫(Carassius auratus gibelio)ran基因编码区cDNA全长序列的原核表达蛋白,并以此为抗原免疫家兔,制备了相应的多克隆抗体;W estern b lotting结果表明,该抗体效价为1∶1000,具有较高的特异性。并从抗原蛋白相对分子质量、每次注射蛋白量、注射方式、注射途径等诸方面对该技术的要点进行了介绍。

关键词：彩鲫 ran基因原核表达蛋白多克隆抗体

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彩鲫的人工繁殖及鱼苗培育试验

科学养鱼 2011年第1期33卷 70-71页

作者：喻梅尹静张茜江苏徐州市水产科学研究所 221018

彩鲫是一种较为原始的金鱼种类,体型侧扁而细长,形态特征与普通鲫鱼相似,但个体较小。彩鲫约有二十多个品种,一般以尾型的不同作为分类的依据,可分为普通尾彩鲫（也称草金鱼）与燕尾彩鲫（或称剪尾彩鲫）两类,体色有纯白、纯红、

关键词：彩鲫培育试验人工繁殖鱼苗形态特征鱼种类金鱼鲫鱼

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彩鲫与建鲤杂交F_1体色的初步研究

水产科学 2015年第2期34卷 100-103页

作者：刘文骁陈宏石河子大学动物科技学院新疆石河子832000

利用建鲤和彩鲫正反交获得了鲤鲫F1(彩鲫♀×建鲤♂)和鲫鲤F1(建鲤♀×彩鲫♂)两个杂交群体,将两个杂交群体各分为两组,分别在室内水族箱和室外池塘中饲养6个月后,通过显微镜对鳞片黑色素细胞的数量进行统计,利用丙酮抽提液对鳞片红色... 详细信息

利用建鲤和彩鲫正反交获得了鲤鲫F1(彩鲫♀×建鲤♂)和鲫鲤F1(建鲤♀×彩鲫♂)两个杂交群体,将两个杂交群体各分为两组,分别在室内水族箱和室外池塘中饲养6个月后,通过显微镜对鳞片黑色素细胞的数量进行统计,利用丙酮抽提液对鳞片红色素细胞的吸光值进行测定。结果发现,鲤鲫F1的红色素细胞吸光值与彩鲫接近(P>0.05),黑色素细胞数值极显著低于建鲤(P鲫鲤F1红色素细胞吸光值极显著低于彩鲫(P<0.01),黑色素细胞值显著低于建鲤(P<0.05)。

关键词：建鲤彩鲫杂交后代体色

银鲫与彩鲫卵母细胞cDNA文库构建及周期蛋白A_1的cDNA克隆

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水生生物学报 2000年第6期24卷 573-581页

作者：樊连春谢京汪洋桂建芳中国科学院水生生物研究所淡水生态与生物技术国家重点实验室武汉430072

分别取行天然雌核发育繁殖的银鲫和两性生殖的彩鲫的卵母细胞为材料 ,提取总RNA ,分离mRNA ,进而反转录合成cDNA并定向插入λgtllSfi Not克隆载体 ,经体外包装构建了银鲫与彩鲫卵母细胞的表达型cDNA文库。测试结果表明库容量分别达到 3 ... 详细信息

分别取行天然雌核发育繁殖的银鲫和两性生殖的彩鲫的卵母细胞为材料 ,提取总RNA ,分离mRNA ,进而反转录合成cDNA并定向插入λgtllSfi Not克隆载体 ,经体外包装构建了银鲫与彩鲫卵母细胞的表达型cDNA文库。测试结果表明库容量分别达到 3 1× 1 0 6(银鲫 )和 1 6× 1 0 6(彩鲫 )。进一步人工合成CyclinA1 保守引物 ,采用PCR扩增文库的方法 ,克隆了银鲫 (1 61 6bp)与彩鲫 (1 62 6bp)的CyclinA1 全长cDNA。序列分析结果表明 :两种鱼编码区长度均为 1 1 73bp ,起始于一个包含在脊椎动物起始密码子ANNATG基元内ATG的单一开放读码框 ,编码 391个氨基酸 ;5’ -端非编码区长度也同为 70bp ,3-’端非编码区长度略有不同 ,银鲫为 373bp ,而彩鲫则为 383bp ;二者 3’ -端均带有AATAAA的Poly(A)加尾信号以及 2 4bp(银鲫 )和 2 7bp(彩鲫 )的Poly(A)尾巴。比较银鲫、彩鲫和金鱼与人、爪蟾CyclinA1氨基酸序列同源性的结果表明 ,CyclinA1 在人、爪蟾与鱼类之间具有较高同源性 ;而在银鲫、彩鲫和金鱼之间 ,CyclinA1 仅在周期蛋白框外存在 5个氨基酸的差异 ,且这些差异均是由个别碱基的变异造成的。

关键词：雌核发育银鲫彩鲫 cDNA文库周期蛋白A1

天然雌核发育银鲫与两性生殖彩鲫卵母细胞中蛋白激酶基因表达差异的比较

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科学通报 1999年第10期44卷 1055-1059页

作者：谢京朱燕张帆桂建芳中国科学院水生生物研究所武汉大学生命科学学院

采用mRNA差异显示方法 ,以蛋白激酶基因家族保守区设计 5′引物 ,比较天然雌核发育银鲫和两性生殖彩鲫卵母细胞中蛋白激酶基因的表达 .结果表明 ,以引物T12 MA ,T12 MC和T12 MG合成的cDNA第 1链分别再经蛋白激酶特异引物扩增所得到的PC... 详细信息

采用mRNA差异显示方法 ,以蛋白激酶基因家族保守区设计 5′引物 ,比较天然雌核发育银鲫和两性生殖彩鲫卵母细胞中蛋白激酶基因的表达 .结果表明 ,以引物T12 MA ,T12 MC和T12 MG合成的cDNA第 1链分别再经蛋白激酶特异引物扩增所得到的PCR条带数目和分布模式各不相同 .从胶上总共回收并克隆了 2 1个cDNA片段 ,对其中 3个做了Northern杂交验证 ,有 2个在彩鲫卵母细胞中特异表达 ,另 1个在银鲫中特异表达 .

关键词：蛋白激酶银鲫彩鲫卵母细胞蛋白激酶

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彩鲫与红鲫杂交种体色遗传的初步研究

中国水产科学 1999年第1期6卷 33-36页

作者：徐伟白庆利刘明华沈俊宝中国水产科学研究院黑龙江水产研究所

通过彩鲫与红鲫杂交、回交以及不同体色彩鲫（杂交种）自交、杂交，对其子代的体色性状进行了统计学分析。彩鲫与红鲫的体色遗传说明彩色受显性基因控制，红色受隐性基因控制；不同体色彩鲫自交、杂交，其后代的体色分离特性为肉色显性... 详细信息

通过彩鲫与红鲫杂交、回交以及不同体色彩鲫（杂交种）自交、杂交，对其子代的体色性状进行了统计学分析。彩鲫与红鲫的体色遗传说明彩色受显性基因控制，红色受隐性基因控制；不同体色彩鲫自交、杂交，其后代的体色分离特性为肉色显性，红色隐性，亲本体色在后代中可以积累增加；肉色、红色彩鲫与眼睛颜色、闪光鳞数具遗传相关性。

关键词：彩鲫红鲫杂交后代体色遗传

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彩鲫与建鲤杂交F1代生物学特性研究

彩鲫与建鲤杂交F1代生物学特性研究

作者：刘文骁石河子大学

学位级别：硕士

本文为了探讨彩鲫与建鲤杂交F1代生物学特性进行了六个试验。挑选体格健壮、健康的亲本日本彩鲫与建鲤,亲本分别从河南洛阳和江苏无锡引入,于2013年4月23日,人工注射绒毛膜促性腺激素、促黄体素释放激素和多潘立酮催产。亲本鱼于2013年4... 详细信息

本文为了探讨彩鲫与建鲤杂交F1代生物学特性进行了六个试验。挑选体格健壮、健康的亲本日本彩鲫与建鲤,亲本分别从河南洛阳和江苏无锡引入,于2013年4月23日,人工注射绒毛膜促性腺激素、促黄体素释放激素和多潘立酮催产。亲本鱼于2013年4月24日凌晨2点30分左右产卵交配,孵化池水温控制在28-30℃,自然孵化得到鲤鲫F1(建鲤♀×彩鲫♂)和鲫鲤F1(彩鲫♀×建鲤♂)代。试验分别在动科院营养试验室和新疆石河子大学试验农场特种水产研究所养殖进行。本研究包括以下内容:一、彩鲫与建鲤杂交F1代形态特征研究;二、初步研究了彩鲫与建鲤杂交F1代体色的变化;三、彩鲫与建鲤杂交F1肠道绒毛显微观察;四、彩鲫与建鲤杂交F1内脏器官生长和肠道免疫性能研究;五、彩鲫与建鲤杂交F1代与亲本肌肉物理学与组织学指标的比较研究;六、彩鲫与建鲤杂交F1代生殖细胞染色体初步观察研究。试验一分别从大学试验室随机取样50尾,对体型指数、可量性状、可数性状和肥满度分析比较。结果表明:在体型指数体长/全长中,鲫鲤F1偏向母本,而在体高/体长中,鲤鲫F1偏向母本;头高/体高、头高/头长、尾柄长/尾柄高都偏向建鲤,头长/体长这一体型指数处于亲本之间,属于杂交性状;试验二将两个杂交群体各分为两组分别在室内水族箱和室外池塘中饲养6月龄后,通过显微镜对鳞片黑色素细胞的数量进行统计,利用丙酮抽提液对鳞片红色素细胞的吸光值进行测定。结果显示:鲤鲫F1代的红色素细胞吸光值与彩鲫接近(P>0.05),黑色素细胞数值极显著低于建鲤(P鲫鲤F1代红色素细胞吸光值极显著低于彩鲫(P彩鲫亲本、鲤鲫F1(建鲤♀×彩鲫♂)和鲫鲤F1(彩鲫♀×建鲤♂)各50条,每组试验鱼日龄相近。每组选5条体重相近的鱼测量肠长和肠重,并制作肠切片,计算肠重指数、肠长指数、肠道皱襞高度、绒毛长、绒毛宽、肌层厚度数据。数据结果采用SPSS(17.0)软件中的LSD法进行显著性检验。结果显示:以彩鲫做父本的F1的消化水平高于以彩鲫做母本的F1,且鲫做父本的F1的消化水平高于两个亲本;试验四随机取样建鲤亲本、彩鲫亲本、鲤鲫F1(建鲤♀×彩鲫♂)和鲫鲤F1(彩鲫♀×建鲤♂)各5尾,测定前、中、后肠上皮内淋巴细胞数量以及肠长指数、肠体指数、脾脏指数和肝胰脏指数;试验发现:杂交后代肠长指数、肠体指数、脾脏指数、肝胰脏指数与亲本相比较差异显著,且各项数据显著高于杂交亲本的;彩鲫亲本和建鲤亲本的肠上皮内淋巴细胞与杂交后代相比数量较多;试验五随机取样四种鱼各3尾,分析比较正反交后代和亲本的p H值、滴水损失、熟肉率、肌纤维直径、肌纤维密度、肌纤维面积数据。结果表明:彩鲫与建鲤杂交F1代的p H值、熟肉率、滴水损失、肌纤维密度、肌纤维面积等多数指标逊于亲代,而以彩鲫作母本获得的子代肌纤维直径最小,表明其肉质最好;试验六随机选取四种鱼各20条,取出试验鱼精巢或卵巢,观察试验鱼的性腺细胞组织结构,发现:由于试验用鱼仅12月龄,尚未达到完全性成熟,不能鉴定其在完全性成熟后能否达到可育状态。从卵巢切片看出,卵细胞处于初级卵母细胞前期,其状态正常,但不能判断出能否可育。从精巢切片看出,精母细胞、精小囊、间质细胞、支持细胞均处于正常状态,有大量精子细胞,但由于鱼尚未达到完全性成熟状态,精子细胞未出现变态现象,不能判断其能否变态成为可育的精子。综合以上试验结果表明:杂交后代生长性能出现离散现象,控制体色的基因来自母本;在培养彩鲫和建鲤的杂交F1时,考虑其肠道生长情况应该选择以彩鲫作为父本;杂交后代的肠道黏膜免疫性能介于两亲代之间,但内脏器官生长强于亲代,体现出了杂种优势;鲫鲤F1(建鲤♀×彩鲫♂)红色个体(比例较少)既有较快的生长速度又有鲜艳的体色,是生长快速、肉质鲜美,观赏和食用兼用鱼种;鲤鲫F1(彩鲫♀×建鲤♂)色泽鲜艳、生长性能尽管不如建鲤,仍然是较好的观赏鱼种。

关键词：彩鲫建鲤生长性能体色肠道内脏器官肉质性腺