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结合colored SiNPs编码定量免疫层析技术的研究

结合colored SiNPs编码定量免疫层析技术的研究

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作者：俞琼琼浙江工商大学

学位级别：硕士

免疫层析法(Immunochromatographic assay,ICA)是一种常用的分析检测技术,操作简便、特异性强、快速经济,无需大型仪器设备和专业技术人员,结果判断直观可靠,可适用于实时、现场检测。目前,免疫层析法已广泛应用于出入境检验检疫、环境... 详细信息

免疫层析法(Immunochromatographic assay,ICA)是一种常用的分析检测技术,操作简便、特异性强、快速经济,无需大型仪器设备和专业技术人员,结果判断直观可靠,可适用于实时、现场检测。目前,免疫层析法已广泛应用于出入境检验检疫、环境监测、食品质量安全、医学检测等领域。现阶段,商品化免疫层析条以单重检测、定性检测为主,但实际样品可能存在两种或多种待测物,因此开发多重免疫层析法、实现定量分析十分必要。本研究以本室自主研发的彩色二氧化硅纳米微球(colored silica nanoparticles,colored SiNPs)为标记物,结合Image J分析软件改进免疫层析法,实现定量检测乙型肝炎表面抗原(HBsAg);以盐酸克伦特罗(Clebuterol,CLE)和莱克多巴胺(Ractopamine,RAC)为模式待测物,构建对两种物质的编码识别和双重定量检测免疫层析法。具体研究如下:1、结合red SiNPs免疫探针改进免疫层析夹心法定量检测HBsAg为改进免疫层析法并实现定量检测,本研究构建一种以红色二氧化硅纳米微球(red SiNPs)为Ab标记物,以HBsAg为检测模型的免疫层析夹心法。经羧基活化red SiNPs生成red SiNPs-COOH,可增加与富含-NH2的鼠抗HBsAg单克隆抗体(anti-HBsAg mAb)偶联强度及偶联率,制成免疫探针,用于HBsAg检测。HBsAg浓度在5～500 ng/mL范围内,与T线灰度值峰面积成线性关系,线性方程为y=370.6118+9.6673x(R2=0.9962),灵敏度为0.97 ng/mL。本研究为临床诊断和食品安全分析提供了一种简便的定量检测方法。2、结合red and blue SiNPs免疫探针改进免疫层析竞争抑制法编码识别CLE、RAC为改进免疫层析法,实现对两种待测物质同时检测,本研究制备red SiNPs和蓝色二氧化硅纳米微粒(blue SiNPs),活化后制成免疫标记探针,改进免疫层析竞争抑制法,实现在单一 T线编码识别CLE、RAC。最佳检测条件下,灵敏度CLE为3ng/mL,RAC为2ng/mL,与同类药物小分子无交叉反应,特异性好。与传统胶体金免疫层析法相比,结合red and blue SiNPs改建的免疫层析竞争抑制法,可编码识别CLE、RAC,实现双重检测,快速、简便、经济,便于推广应用。3、结合blue and purple SiNPs免疫探针改进免疫层析竞争抑制法编码定量检测CLE和RAC为改进免疫层析法实现双重定量检测,本研究制备blue SiNPs和紫色二氧化硅纳米微球(purple SiNPs),经活化后制备免疫标记探针:anti-CLE mAb-blue SiNPs和anti-RAC mAb-purple SiNPs,检测CLE和RAC。CLE、RAC分别在0.50～8 ng/mL和0.50～8 ng/mL范围内,其浓度和相应T线灰度值峰面积呈线性关系,线性方程为y=5617.2-5486.4x(R2=0.952)和y=2062.3-1961.3x(R2=0.924),灵敏度CLE为0.172 ng/mL,RAC为0.065 ng/mL。与传统胶体金免疫层析法相比,本方法可同时检测两种有害物质并实现定量分析,且可通过更换抗原抗体对,将其发展为一个通用的分析检测系统,为食品安全分析提供新的思路和方法。以上研究表明,本论文结合免疫colored SiNPs和Image J分析软件所改建的3种免疫层析法,可实现对HBsAg和CLE/RAC定性、定量快速检测,为食品安全分析和体外诊断提供研究模型,为现场检测拓展应用提供理论依据。

关键词：免疫层析技术彩色二氧化硅纳米微球编码识别编码定量检测 HBsAg 盐酸克伦特罗莱克多巴胺

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