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当归六黄颗粒成型工艺、质量评价及其抗甲亢肾损伤作用机制研究

当归六黄颗粒成型工艺、质量评价及其抗甲亢肾损伤作用机制研究

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作者：于前长春中医药大学

学位级别：硕士

目的:当归六黄汤出自金代李东垣的《兰室秘藏》,本文在课题组前期研究工作基础上,通过单因素试验结合响应面法,以吸湿率、成型率、溶化率、休止角为考察指标,筛选优化当归六黄颗粒成型工艺,为其进一步生产及临床应用奠定基础。通过当归... 详细信息

目的:当归六黄汤出自金代李东垣的《兰室秘藏》,本文在课题组前期研究工作基础上,通过单因素试验结合响应面法,以吸湿率、成型率、溶化率、休止角为考察指标,筛选优化当归六黄颗粒成型工艺,为其进一步生产及临床应用奠定基础。通过当归六黄颗粒当归等药材的薄层鉴别方法、多成分含量测定方法的建立及水分、粒度、溶化性等检查,对当归六黄颗粒进行质量评价。建立指纹图谱,探寻饮片-颗粒量值传递,旨在传承和弘扬经典名方,为后续应用提供理论基础。基于网络药理学建立甲亢肾损伤大鼠模型,通过一般指标检测和HE染色切片验证当归六黄颗粒对甲亢肾损伤大鼠的药效作用,通过蛋白质印迹法(Western blotting)探寻当归六黄颗粒对甲亢引起的肾损伤改善作用机制,为当归六黄颗粒的进一步开发研究提供理论依据。方法:(1)遵循古籍记载,结合现代研究,通过单因素试验结合响应面法,以吸湿率、成型率、堆密度、休止角为考察指标,筛选优化当归六黄颗粒成型工艺;对当归六黄颗粒进行一般项检查,建立当归、黄芩、黄连、黄芪薄层鉴别方法,建立HPLC多成分含量测定方法;(2)利用指纹图谱探寻饮片-颗粒中色谱峰的传递,进行主成分分析;计算指标性成分含量转移率;(3)运用TCMSP等数据库和相关文献筛选当归六黄颗粒的化学成分,取交集靶基因筛选出的主要作用靶点,构建PPI网络,对当归六黄颗粒改善甲亢肾损伤相关靶基因进行富集分析;建立甲亢肾损伤大鼠模型,观察大鼠甲状腺和肾组织HE染色切片,并采用酶联免疫吸附法测定血清中cAMP(环磷酸腺苷)、cGMP(环磷酸鸟苷)、T3(血清三碘甲状腺原氨酸)、T4(血清甲状腺素)、TSH(促甲状腺素),肾组织中CAT(过氧化氢酶)、SOD(超氧化物歧化酶)、MDA(丙二醛)表达水平变化,采用蛋白质印迹法(Western blotting)对当归六黄颗粒改善甲亢大鼠肾损伤作用机制进行研究。结果:(1)当归六黄颗粒成型工艺为:按1 kg处方量计,取当归、生地黄、熟地黄、黄连、黄柏、黄芩各125 g,黄芪250 g,加8倍量水煎煮60分钟,滤过,再加入6倍量水煎煮60分钟,滤过,合并煎液,减压干燥,得干浸膏,以药辅比1:1.5加入糊精,80%乙醇作为润湿剂,制粒,干燥,整粒,制得当归六黄颗粒。颗粒一般项检查均合格;当归、黄芩、黄连、黄芪薄层鉴别方法均无阴性干扰,稳定可行;三批颗粒中毛蕊花糖苷、盐酸黄柏碱、木兰花碱、阿魏酸、黄连碱、表小檗碱、药根碱、盐酸小檗碱、巴马汀、黄芩苷、槲皮素、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素平均含量分别为0.0470、4.0990、0.7470、0.1080、1.2620、0.1200、0.8190、4.2020、1.2830、10.4340、2.3620、2.7110、0.1080 mg/g;(2)12批颗粒指纹图谱相似度良好,方法学考察均合格,确定20个共有峰,其中当归4个峰,地黄3个峰,熟地4个峰,黄芩11个峰,黄连9个峰,黄柏8个峰,黄芪5个峰;3批当归六黄颗粒中毛蕊花糖苷、黄芩苷、盐酸小檗碱、表小檗碱、黄连碱和巴马汀的饮片-颗粒的转移率较稳定;(3)构建成分-靶点网络得到当归六黄颗粒主要活性化合物111个,靶点基因筛选去重后共得到328个,找出110个与甲亢肾损伤相关靶点;HE染色切片显示给药后甲状腺和肾组织损伤情况有所改善,给药组与模型组比T3、T4、cAMP、cAMP/cGMP、MDA显著降低(P当归六黄颗粒成型工艺,基于一般项检查、薄层鉴别、含量测定对当归六黄颗粒进行质量评价,通过指纹图谱研究饮片-颗粒的量值关系,探讨功效成分传递规律,为现代应用提供了理论依据,通过网络药理学GO及KEGG富集分析当归六黄颗粒可能是通过调节激素的分泌,抑制氧化应激、炎症反应,从而起到抗甲亢肾损伤的作用;HE染色切片试验结果表明当归六黄颗粒能改善甲状腺和肾组织损伤,通过调节T3、T4、TSH、cAMP、cGMP、MDA、SOD、CAT,上调Nrf2/HO-1信号通路,抑制肾脏过度的氧化应激反应,减轻肾脏损伤,为经典名方当归六黄颗粒的后续临床应用提供依据。

关键词：当归六黄颗粒成型工艺多成分含量测定甲亢肾损伤

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