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归肾丸水提物干预SD大鼠骨髓间充质干细胞增殖及PI3K、AKT蛋白的表达

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中国组织工程研究 2020年第13期24卷 1983-1988页

作者：刘燕关永格宋阳广州中医药大学广东省广州市510405 广州中医药大学第三附属医院广东省广州市510360

背景:补肾类方剂对骨髓间充质干细胞的促增殖作用已经被证实,但其作用机制尚不明确,该研究以归肾丸为例,探讨其可能的作用机制。目的:通过观察归肾丸水提物对骨髓间充质干细胞增殖的影响,探究归肾丸滋补肾精与骨髓间充质干细胞增殖之间... 详细信息

背景:补肾类方剂对骨髓间充质干细胞的促增殖作用已经被证实,但其作用机制尚不明确,该研究以归肾丸为例,探讨其可能的作用机制。目的:通过观察归肾丸水提物对骨髓间充质干细胞增殖的影响,探究归肾丸滋补肾精与骨髓间充质干细胞增殖之间的关系。方法:从3周龄雄性SD大鼠股骨骨髓中分离提取骨髓间充质干细胞,采用全骨髓贴壁法将其纯化,选用纯度较高的第3代细胞进行药物干预,将其分为空白对照组和10,20,40,80,100 mg/L归肾丸水提物组,在体外连续培养5 d以观察量效关系和时效关系。倒置显微镜下观察细胞形态,CCK-8法评估细胞增殖活性,Western blot检测细胞中PI3K、AKT蛋白表达。结果与结论:①归肾丸水提物组的细胞增殖能力明显高于空白对照组,存在一定的量效和时效关系,尤以80 mg/L归肾丸水提物干预3 d时作用效果最佳;②归肾丸水提物组骨髓间充质干细胞中PI3K、AKT蛋白的表达明显高于空白对照组;③结果提示,归肾丸水提物能有效促进骨髓间充质干细胞的增殖,可能与其参与调控PI3K/AKT信号通路有关。

关键词：骨髓间充质干细胞归肾丸细胞增殖 PI3K AKT 滋补肾精

归肾丸治疗多囊卵巢综合征的网络药理学作用机制

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中药新药与临床药理 2021年第6期32卷 825-833页

作者：陆岩王小云广州中医药大学第二临床医学院广东广州510405 广东省中医院广东广州510120

目的通过网络药理学研究方法和分子对接技术预测归肾丸治疗多囊卵巢综合征(PCOS)的作用机制。方法利用TCMSP数据库,收集归肾丸有效成分并预测其作用靶标,通过GeneCards与OMIM数据库筛选出多囊卵巢综合征的靶标,运用R软件获取疾病交集靶... 详细信息

目的通过网络药理学研究方法和分子对接技术预测归肾丸治疗多囊卵巢综合征(PCOS)的作用机制。方法利用TCMSP数据库,收集归肾丸有效成分并预测其作用靶标,通过GeneCards与OMIM数据库筛选出多囊卵巢综合征的靶标,运用R软件获取疾病交集靶标,绘制韦恩图。运用Cytoscape软件构建归肾丸治疗多囊卵巢综合征的"药物-成分-靶标-疾病"网络,通过STRING数据库构建靶标蛋白相关作用网络并进行关键靶标的GO功能富集分析及KEGG通路富集分析。通过Autodock Vina软件对药物有效成分与疾病靶标进行分子对接验证。结果筛选得到归肾丸治疗多囊卵巢综合征的78个有效成分和78个药物-疾病共同靶标,并推断其作用机制可能与介导PI3K-Akt、HIF-1及TNF等124条信号通路相关。槲皮素、山柰酚、豆甾醇等有效成分与PTGS1、ESR1、PGR等靶标对接结果良好。结论归肾丸有效成分可能通过抗炎性反应、改善胰岛素抵抗、促进卵泡发育、控制血糖稳态、调节脂质代谢、调节激素水平等药理作用来治疗多囊卵巢综合征。

关键词：归肾丸多囊卵巢综合征作用机制网络药理学分子对接

归肾丸对卵巢储备功能低下小鼠学习记忆能力和骨密度的影响

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华中科技大学学报（医学版） 2014年第3期43卷 243-248页

作者：崔丹丹马雯雯文露宋坤琨丁嘉慧黄聪张明敏华中科技大学同济医学院附属同济医院中西医结合研究所武汉430030

目的探索归肾丸对卵巢储备功能低下小鼠学习记忆能力和骨密度的影响。方法将40只C57BL/6J雌性小鼠随机分为正常组、模型组、归肾丸组和脱氢表雄酮(DHEA)组。连续序贯腹腔注射孕马血清、人绒毛膜促性腺激素、前列腺素F2α诱导连续超促排... 详细信息

目的探索归肾丸对卵巢储备功能低下小鼠学习记忆能力和骨密度的影响。方法将40只C57BL/6J雌性小鼠随机分为正常组、模型组、归肾丸组和脱氢表雄酮(DHEA)组。连续序贯腹腔注射孕马血清、人绒毛膜促性腺激素、前列腺素F2α诱导连续超促排卵,再结合臭氧吸入构建卵巢功能衰退模型。其后归肾丸组与DHEA组给予相应药物灌胃(0.3mL/d),而正常组与模型组生理盐水灌胃(0.3mL/d),共21d。观察各组小鼠体重、动情周期、血清卵泡刺激素(FSH)水平、黄体生成素(LH)水平、卵巢组织形态学变化,以及观察小鼠记忆力与骨质情况的变化。结果与模型组相比,归肾丸组及DHEA组血清FSH、LH水平均明显降低,始基卵泡与初级卵泡数均明显增加(P归肾丸组与DHEA组学习记忆力及骨密度情况均较模型组有明显改善(P归肾丸对卵巢储备功能低下模型小鼠具有明显的治疗作用,可改善小鼠学习记忆力以及骨质情况,其机制可能与改善动情周期及血清FSH、LH水平有关。

关键词：归肾丸卵巢储备功能低下超促排卵臭氧脱氢表雄酮学习记忆力骨密度

基于网络药理学研究归肾丸对薄型子宫内膜大鼠的治疗作用机制

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中国实验方剂学杂志 2021年第17期27卷 168-177页

作者：邵芷若关永格宋阳刘燕李玥吕妍广州中医药大学第三临床医学院广州510006 广州中医药大学第三附属医院广州510000 广州中医药大学护理学院广州510006

目的:该研究通过网络药理学的方法探讨归肾丸治疗薄型子宫内膜的关键核心靶点及相关信号通路等作用机制,进一步运用动物实验加以验证所得靶点,验证归肾丸对薄型子宫内膜的影响。方法:利用中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)数据库... 详细信息

目的:该研究通过网络药理学的方法探讨归肾丸治疗薄型子宫内膜的关键核心靶点及相关信号通路等作用机制,进一步运用动物实验加以验证所得靶点,验证归肾丸对薄型子宫内膜的影响。方法:利用中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)数据库检索归肾丸中8味中药组成的有效化学成分、活性成分靶点和靶点简称;运用GeneCards数据库和在线人类孟德尔遗传数据库(OMIM)检索薄型子宫内膜相关的靶点基因;运用韦恩软件对归肾丸的药物靶点和薄型子宫内膜的疾病靶点进行取交集操作,将交集靶点导入STRING数据库及Cytoscape 3.7.2软件进行可视化分析获得"药物-疾病"的蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)网络;再将交集靶点输入Enrichr数据库和David数据库分别进行基因本体(GO)富集分析及京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析。以得到的可能核心关键靶点作为理论基础,建立大鼠薄型子宫内膜模型,归肾丸及雌激素干预21 d后,通过苏木素-伊红(HE)染色法观察大鼠的内膜厚度;通过蛋白免疫印迹法(Western blot)和实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测表皮生长因子受体(EGFR),基质金属蛋白酶9(MMP9),白细胞介素1β(IL^(-1)β),丝裂原激活蛋白激酶14(MAPK14)这4个核心关键靶点的蛋白和mRNA的表达水平。结果:通过韦恩软件共获得130个交集靶点;将130个交集靶点导入STRING数据库和Cytoscape软件中,得到包括33个节点,107条边的蛋PPI网络;DAVID 6.8数据库进行GO分析中的功能注释分析,共涉及167个生物过程(BP),22个细胞组分(CC),39个分子功能(MF);DAVID 6.8数据库进行KEGG富集分析,与薄型子宫内膜相关的通路共34条;Western blot和Real-time PCR分别对6组大鼠子宫内膜组织中的EGFR,MMP9,IL^(-1)β,MAPK14蛋白和mRNA的表达结果进行分析,归肾丸能够增强EGFR,MMP9,IL^(-1)β,MAPK14蛋白和mRNA在薄型子宫内膜上的表达。结论:通过网络药理学的理论分析及动物实验的研究结果发现,归肾丸能够有效改善薄型子宫内膜的相关指标,并通过增加EGFR,MMP9,IL^(-1)β,MAPK14蛋白和mRNA表达水平,促进内膜组织增殖,改善内膜偏薄的症状。

关键词：归肾丸薄型子宫内膜网络药理学作用机制

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归肾丸对卵巢早衰小鼠细胞免疫的影响

中国免疫学杂志 2018年第8期34卷 1178-1182页

作者：李鲁宏李志超洪文婷福建医科大学附属第二医院妇产科泉州362000

目的:探讨归肾丸对卵巢早衰小鼠(POF)细胞免疫的影响。方法:以小鼠透明带3为抗原,皮下多点注射免疫BALB/c雄性小鼠,建立卵巢早衰模型。60只BALB/c小鼠随机分为空白对照组、模型组、泼尼松组、归肾丸高、中、低剂量组。连续给药28 d后,... 详细信息

目的:探讨归肾丸对卵巢早衰小鼠(POF)细胞免疫的影响。方法:以小鼠透明带3为抗原,皮下多点注射免疫BALB/c雄性小鼠,建立卵巢早衰模型。60只BALB/c小鼠随机分为空白对照组、模型组、泼尼松组、归肾丸高、中、低剂量组。连续给药28 d后,测定各组小鼠的脾脏指数、胸腺指数、卵巢指数、T淋巴细胞增殖能力、T细胞亚群、NK细胞、血清中IFN-γ和IL-2的含量。结果:归肾丸可显著提高小鼠的脾脏指数,增强T细胞的增殖能力,显著增加CD3+T、CD4+T、CD4+T/CD8+T比值、NK细胞百分比及IFN-γ、IL-2的含量(P归肾丸能够调节机体细胞免疫作用,提高卵巢早衰小鼠的免疫功能。

关键词：归肾丸卵巢早衰细胞免疫小鼠

归肾丸对卵巢早衰大鼠骨密度及骨微结构的影响及其机制研究

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中国骨质疏松杂志 2023年第3期29卷 390-396页

作者：巴鑫陈哲黄谣涂胜豪王玉华中科技大学同济医学院附属同济医院中西医研究所湖北武汉430030 华中科技大学同济医学院附属同济医院中医科湖北武汉430030

目的观察归肾丸对卵巢早衰大鼠骨密度及骨微结构的影响,探讨其可能机制,为归肾丸治疗骨质疏松提供实验依据支持。方法将24只Wistar大鼠随机分为正常组、模型组和归肾丸组,每组各8只,其中模型组和归肾丸组通过腹腔注射顺铂的方法(第1、8... 详细信息

目的观察归肾丸对卵巢早衰大鼠骨密度及骨微结构的影响,探讨其可能机制,为归肾丸治疗骨质疏松提供实验依据支持。方法将24只Wistar大鼠随机分为正常组、模型组和归肾丸组,每组各8只,其中模型组和归肾丸组通过腹腔注射顺铂的方法(第1、8天腹腔注射顺铂溶液6.0 mg/kg)建立卵巢早衰大鼠模型。造模后正常组、模型组灌蒸馏水,归肾丸组给予归肾丸免煎剂[9.45 g/(kg·d)],第30天处死大鼠,留取动脉血、双侧股骨。Micro CT检查各组大鼠骨密度和骨微结构参数;ELISA检测大鼠血清中RANKL/OPG、IL-10及TGF-β的表达水平;免疫组化检测骨组织RANKL、OPG的表达水平;流式细胞术检测外周血CD4^(+)T细胞中CD25^(+)Foxp3^(+)Treg细胞的比例。结果归肾丸组与模型组比较,Micro CT骨微结构扫描提示BMD、BV/TV、Tb.N、***均明显升高(P0.05);流式细胞术检测提示归肾丸组外周血CD4^(+)CD25^(+)Foxp3^(+)Treg比例较模型组明显升高(P归肾丸组骨组织OPG表达较模型组升高,RANKL表达下降(P归肾丸可改善卵巢早衰大鼠骨量减少和保护其骨微结构,其机制可能是通过上调Treg细胞,从而抑制RANKL/OPG途径。

关键词：卵巢早衰归肾丸骨质疏松骨保护素核因子κB受体活化因子配体

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归肾丸治疗男性免疫性不育症46例疗效观察

新中医 2002年第12期34卷 25-26页

作者：何燕萍唐纯志梁国珍广州中医药大学第一附属医院广东广州510405 广州中医药大学针灸推拿学院广东广州510405

目的:观察归肾丸治疗男性免疫性不育症的临床疗效。方法:对66例免疫性不育患者采用分组对照方法治疗。治疗组46例以归肾丸治疗,对照组20例以强的松治疗。结果:总有效率治疗组为89.13％,对照组为70.00%,2组比较,差异有显著性意义(P<0.05... 详细信息

目的:观察归肾丸治疗男性免疫性不育症的临床疗效。方法:对66例免疫性不育患者采用分组对照方法治疗。治疗组46例以归肾丸治疗,对照组20例以强的松治疗。结果:总有效率治疗组为89.13％,对照组为70.00%,2组比较,差异有显著性意义(P归肾丸通过补益肾气、滋养肾阴,改善机体的免疫功能,治疗男性免疫性不育症有确切疗效。

关键词：归肾丸治疗男性免疫性不育症疗效

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归肾丸加减治疗卵巢早衰肾阴虚证的临床分析

中国实验方剂学杂志 2016年第11期22卷 170-173页

作者：张丽梅雷枭川北医学院附属医院四川南充637000

目的：探讨归肾丸加减治疗卵巢早衰（POF）肾阴虚证的疗效以及对血清生长分化因子-9（GDF-9）和骨形态发生蛋白-15（BMP-15）水平的影响。方法：收集POF患者共116例,按数字表法随机分为对照组和综合组各58例。对照组口服结合雌激素片,1... 详细信息

目的：探讨归肾丸加减治疗卵巢早衰（POF）肾阴虚证的疗效以及对血清生长分化因子-9（GDF-9）和骨形态发生蛋白-15（BMP-15）水平的影响。方法：收集POF患者共116例,按数字表法随机分为对照组和综合组各58例。对照组口服结合雌激素片,1片/次,1次/d,连服20 d;第16-20天加服安宫黄体酮片,4片/次,1次/d。综合组在对照组治疗的基础上采用归肾丸加减治疗,1剂/d,水煎煮,分早晚2次内服,经期停服。两组均20 d为1个疗程,连续治疗3个疗程。比较两组中医症状积分和血清卵泡刺激素（FSH）,雌二醇（E2）和黄体生成素（LH）水平;检测两组血清GDF-9和BMP-15水平。结果：综合组治疗后中医症状各指标积分均明显低于对照组（P〈0.01）;综合组临床总有效率为94.83%,对照组为81.03%,综合组明显高于对照组（P〈0.05）;综合组治疗后患者血清FSH和LH水平均明显低于对照组,E2水平显著高于对照组（P〈0.01）;治疗后综合组血清GDF-9和BMP-15水平均明显高于对照组,比较差异有统计学意义（P〈0.01）。结论：在西医常规用药基础上,内服归肾丸加减治疗卵巢早衰肾阴虚证可明显改善患者临床症状和激素水平,提高临床疗效,上调患者血清GDF-9和BMP-15水平可能与上述治疗效果密切相关。

关键词：归肾丸卵巢早衰肾阴虚证生长分化因子-9 骨形态发生蛋白-15

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归肾丸合四逆散治疗排卵障碍性不孕症59例

山东中医杂志 2002年第7期21卷 404-405页

作者：张晓春广西中医学院第一附属医院广西南宁530023

排卵功能障碍是女性不孕症的重要原因之一,笔者自1996～2001年应用归肾丸合四逆散治疗本病59例,收效满意,报告如下.

关键词：归肾丸四逆散治疗排卵障碍性不孕症中医药疗法