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弹性蛋白肽在皮肤科应用研究的进展

中国皮肤性病学杂志 2013年第8期27卷 841-842,854页

作者：田珊陈周北京大学人民医院皮肤科北京100044

弹性蛋白肽(elastin-derived peptide,EDP)是弹性蛋白的降解产物,它通过作用于细胞表面的受体——弹性蛋白结合蛋白(elastin-binding protein,EBP)而发挥多种生物学功能,如促进正常细胞和肿瘤细胞蛋白酶的释放、增强肿瘤细胞的侵袭性和... 详细信息

弹性蛋白肽(elastin-derived peptide,EDP)是弹性蛋白的降解产物,它通过作用于细胞表面的受体——弹性蛋白结合蛋白(elastin-binding protein,EBP)而发挥多种生物学功能,如促进正常细胞和肿瘤细胞蛋白酶的释放、增强肿瘤细胞的侵袭性和促进皮肤损伤的修复等。本文综述了弹性蛋白肽的来源、分类、受体及其在皮肤科领域的研究进展。

关键词：弹性蛋白肽弹性蛋白结合蛋白皮肤科

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红霉素可抑制弹性蛋白肽诱导的CD4^+T细胞向Th17细胞分化

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细胞与分子免疫学杂志 2015年第3期31卷 289-292页

作者：刘积锋钟小宁何志义覃向林牙蕾蕾张建全广西医科大学第一附属医院呼吸内科广西南宁530021

目的探讨红霉素对弹性蛋白肽暴露下CD4+T细胞向Th17细胞分化的影响。方法从小鼠脾脏经免疫磁珠分选出CD4+T细胞,随机分为空白对照组、弹性蛋白肽组和弹性蛋白肽加红霉素干预组。弹性蛋白肽组和弹性蛋白肽联合红霉素处理组加入终浓度30μ... 详细信息

目的探讨红霉素对弹性蛋白肽暴露下CD4+T细胞向Th17细胞分化的影响。方法从小鼠脾脏经免疫磁珠分选出CD4+T细胞,随机分为空白对照组、弹性蛋白肽组和弹性蛋白肽加红霉素干预组。弹性蛋白肽组和弹性蛋白肽联合红霉素处理组加入终浓度30μg/mL的弹性蛋白肽,弹性蛋白肽联合红霉素处理组在弹性蛋白肽处理的基础上,另外加入100μg/mL的红霉素。3组细胞在无血清培养液培养24h,用流式细胞术检测Th17的百分比,荧光定量PCR检测维甲酸相关孤儿核受体γt(RORγt)mRNA表达,Western blot法检测核因子κB(p65)[NF-κB(p65)]及信号转导子和转录激活子3(STAT3)蛋白相对含量。结果弹性蛋白肽组CD4+IL-17+细胞的百分比为(11.32±2.34)%、对照组为(5.21±1.36)%;qRT-PCR发现RORγt mRNA表达比对照组明显增加,Western blot法检测发现NF-κB(p65)和STAT3蛋白表达比对照组增强。与弹性蛋白肽组比较,弹性蛋白肽联合红霉素处理组的CD4+IL-17+细胞的百分比、RORγt mRNA表达、NF-κB(p65)和STAT3蛋白表达明显减少。结论红霉素可抑制弹性蛋白肽诱导CD4+T细胞向Th17分化。

关键词：红霉素弹性蛋白肽 CD4^+T细胞 Th17细胞

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弹性蛋白肽的酶法制备及其弹性蛋白酶抑制活性研究

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弹性蛋白肽的酶法制备及其弹性蛋白酶抑制活性研究

作者：李清岚华南理工大学

学位级别：硕士

随着人们对延缓皮肤衰老的需求不断增加,活性肽因其温和安全、活性高的特点备受青睐。弹性蛋白酶能降解弹性蛋白、胶原蛋白等细胞外基质成分,导致皮肤出现皱纹、干燥、弹性下降等衰老症状,因此开发弹性蛋白酶抑制肽被认为是抵抗皮肤衰... 详细信息

随着人们对延缓皮肤衰老的需求不断增加,活性肽因其温和安全、活性高的特点备受青睐。弹性蛋白酶能降解弹性蛋白、胶原蛋白等细胞外基质成分,导致皮肤出现皱纹、干燥、弹性下降等衰老症状,因此开发弹性蛋白酶抑制肽被认为是抵抗皮肤衰老的有效途径之一。本文采用牛动脉为原料提取弹性蛋白,以蛋白回收率和弹性蛋白酶抑制活性为指标,得到制备弹性蛋白肽（EP）的最佳酶解工艺,并研究其理化特性、稳定性、抗氧化性和抗光老化活性。最后结合质谱鉴定和生物信息学方法筛选出3个高活性的弹性蛋白酶抑制肽,并探究弹性蛋白肽对弹性蛋白酶的抑制机理。具体研究内容及结果如下:（1）比较不同纯化方法对弹性蛋白纯度和得率的影响,对弹性蛋白酶解工艺进行优化。确定热碱法0.1 M Na OH处理30 min或0.075 M Na OH处理60 min为较佳纯化条件,且制备的弹性蛋白符合氨基酸组成特征。以弹性蛋白酶抑制活性和蛋白回收率为评价指标,胰酶对弹性蛋白的水解表现出较高的蛋白回收率,达到60.86%。弹性蛋白对弹性蛋白酶具有很强的亲和吸附能力,可吸附胰酶中80%-90%的弹性蛋白酶活。弹性蛋白酶解产物的弹性蛋白酶抑制活性与蛋白浓度具有良好的剂量关系,半抑制浓度(IC)为18.22 mg/m L。通过单因素与正交试验确定弹性蛋白最佳酶解条件为:胰酶添加量1.0%、温度45℃、时间15 h,p H 11.0。在此条件下制备的EP的蛋白回收率和水解度分别为80.08%和12.98%,弹性蛋白酶抑制活性为35.63%（蛋白浓度10 mg/m L）。（2）测定EP的理化特性、加工稳定性和抗光老化活性。经胰酶水解,弹性蛋白的二级结构充分展开,部分α-螺旋和β-折叠转为β-转角、β-反平行以及无规则卷曲,其酶解产物分子量小于1000 Da的肽段含量占45.50%,并且富含疏水性氨基酸和芳香族氨基酸。EP具有较好的热稳定性、耐碱性和抗肠道消化能力,Al和Zn可提高其弹性蛋白酶抑制活性。体外抗氧化结果显示EP具有较强的还原力和超氧阴离子自由基清除能力,其DPPH和ABTS自由基清除能力IC值分别为6.90 mg/m L和3.41 mg/m L。此外,EP可通过抑制UVB诱导的人永生化角质形成细胞（Ha Ca T）内活性氧（ROS）的生成,提升胞内超氧化物歧化酶（SOD）活力和下调胶原蛋白酶（MMP-1）和弹性蛋白酶（MMP-12）的表达水平,从而减轻光损伤导致的Ha Ca T细胞的凋亡。（3）通过虚拟筛选技术获得弹性蛋白酶抑制肽,并验证活性及探究其抑制弹性蛋白酶的分子机制。通过膜超滤将EP分离为低分子量组分（EPL,3 k Da）,两者的弹性蛋白酶抑制活性无显著性差异（p>0.05）,而EPL的得率、光损伤Ha Ca T细胞的增殖活性和氧自由基吸收能力（ORAC）均高于EPH。利用质谱技术从EPL鉴定出264个弹性蛋白肽,通过虚拟筛选技术得到3个具有较高活性的弹性蛋白酶抑制肽:FFPGAG、GAGQPFPI和FPGIG。GAGQPFPI具有最强的弹性蛋白酶抑制活性,20 m M浓度下抑制率可达87.96%,其次是FFPGAG和FPGIG。GAGQPFPI属于非竞争性抑制类型,FFPGAG和FPGIG均为混合抑制类型。GAGQPFPI与弹性蛋白酶之间可观察到9个氢键,这可能是其具有最高弹性蛋白酶抑制活性的主要原因;而FFPGAG和FPGIG和弹性蛋白酶之间均观察到3个氢键,其中FFPGAG形成的氢键键长更短。析因试验结果显示,FFPGAG和GAGQPFPI、GAGQPFPI和FPGIG之间无交互作用,FFPGAG和FPGIG之间存在明显的交互作用。这3个弹性蛋白酶抑制肽具有较强的抗肠道消化能力,体外模拟消化后原始肽段保留率仍高于60%,保留率顺序依次为GAGQPFPI>FPGIG>FFPGAG。

关键词：弹性蛋白肽胰酶弹性蛋白酶抑制活性抗光老化虚拟筛选

弹性蛋白肽对髓样树突状细胞表面共刺激分子表达的影响

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弹性蛋白肽对髓样树突状细胞表面共刺激分子表达的影响

作者：谭彩梅广西医科大学

学位级别：硕士

目的:探讨弹性蛋白肽对髓样树突状细胞表面共刺激分子表达的影响方法:利用含有40ng/mL小鼠粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、10ng/mL 白介素 4(IL-4)和 10%胎牛血清(FBS)的 RPMI1640培养基刺激诱导小鼠骨髓来源的单个核细胞增殖分... 详细信息

目的:探讨弹性蛋白肽对髓样树突状细胞表面共刺激分子表达的影响方法:利用含有40ng/mL小鼠粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、10ng/mL 白介素 4(IL-4)和 10%胎牛血清(FBS)的 RPMI1640培养基刺激诱导小鼠骨髓来源的单个核细胞增殖分化为符合实验要求的高纯度未成熟髓样树突状细胞(imDC),收集细胞随机分为空白对照组及弹性蛋白肽组:空白对照组不加任何刺激,弹性蛋白肽组加入终浓度为1ug/mL的弹性蛋白肽(elastin peptide,VGVAPG)刺激,两组细胞在相同条件下继续培养24h。然后收集细胞利用流式细胞技术和RT-PCR技术检测树突状细胞表面共刺激分子CD40、CD80和CD86的表达变化,ELISA法检测培养细胞上清液细胞因子白介素6(IL-6)和转化生长因子p (TGF-β)的水平变化。结果:流式细胞术及RT-PCR检测均显示,空白对照组树突状细胞表面共刺激分子表达较低,弹性蛋白肽刺激后,树突状细胞表面共刺激分子CD40、CD80和CD86的表达均升高,两组比较差异具有统计学意义(p弹性蛋白肽刺激后,培养细胞上清液IL-6及TGF-β水平明显升高(p弹性蛋白肽能够促进小鼠髓样树突状细胞表面共刺激分子的成熟表达;(2)弹性蛋白肽能够促进DCs分泌炎症细胞因子IL-6及TGF-β。

关键词：弹性蛋白肽树突状细胞共刺激分子白细胞介素-6 转化生长因子β

酶解联合微生物发酵对弹性蛋白肽理化性质与功能特性的影响

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食品与发酵工业 2024年

作者：鲁杏茹智文博吕静曾贝贝李带根厦门元之道生物科技有限公司

为提高弹性蛋白肽（elastin peptide， EP）的理化性质与功能特性，该研究通过酶解联合微生物（副干酪乳杆菌YYS-K1）发酵制备弹性蛋白肽（EMEP），以单一蛋白酶解制备EP为对照，比较EMEP和EP的理化性质和功能特性的差异。结果表明：EME... 详细信息

为提高弹性蛋白肽（elastin peptide， EP）的理化性质与功能特性，该研究通过酶解联合微生物（副干酪乳杆菌YYS-K1）发酵制备弹性蛋白肽（EMEP），以单一蛋白酶解制备EP为对照，比较EMEP和EP的理化性质和功能特性的差异。结果表明：EMEP的糖胺聚糖的含量较EP提高了约1.73倍；2种EP中氨基酸组成和必需氨基酸占比无明显差异，而EMEP中的Gly和Leu含量占比明显高于EP；分子质量分布结果表明，EMEP中＜1 000 Da肽段占比为89.37%，单一酶解制备的EP占比为89.19%。抗氧化结果表明，2种EP均具有一定的抗氧化能力，在质量浓度为40 mg/mL时，EMEP的DPPH自由基、ABTS阳离子自由基和超氧阴离子自由基清除率较EP分别提高29.59%、2.74%和8.45%；EP与EMEP均表现出良好的功能特性，其中质量浓度为40 mg/mL的EMEP可有效抑制白蛋白变性、AGEs生成以及胰脂肪酶和弹性蛋白酶的活性，抑制率分别达到了92.11%，70.14%，81.14%和83.33%，与单一蛋白酶解EP相比分别提高20.25%、12.66%、81.14%和20.85%。总之，酶解联合微生物发酵制备法有利于进一步提高EP的理化性质和功能特性，为开发高质量的弹性蛋白肽产品提供理论依据。

关键词：弹性蛋白肽酶解联合微生物发酵蛋白酶解抗氧化活性生物活性

胶原蛋白肽与弹性蛋白肽对改善皮肤光老化的研究进展

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食品研究与开发 2023年第11期44卷 208-216页

作者：张宇涵周靖萱张南海赵亮张列兵周峰中国农业大学食品科学与营养工程学院植物源功能食品北京市重点实验室北京100083 北京工商大学食品与健康学院北京食品营养与人类健康高精尖创新中心/北京市食品添加剂工程技术研究中心北京100048

皮肤光老化是紫外线通过损伤皮肤真皮层和表皮层而诱导的皮肤衰老,主要体现在3个方面:皱纹与松弛、屏障功能受损及干燥粗糙、色斑与晒斑。由于生活压力和环境污染程度日益增加,现代人群的皮肤衰老速度逐渐加快,如何改善皮肤衰老已经成... 详细信息

皮肤光老化是紫外线通过损伤皮肤真皮层和表皮层而诱导的皮肤衰老,主要体现在3个方面:皱纹与松弛、屏障功能受损及干燥粗糙、色斑与晒斑。由于生活压力和环境污染程度日益增加,现代人群的皮肤衰老速度逐渐加快,如何改善皮肤衰老已经成为了人们的关注热点。胶原蛋白肽(collagen peptide,CP)与弹性蛋白肽(elastin peptide,EP)是由胶原蛋白和弹性蛋白制得的低分子活性肽,能够从上述三方面展现出优良的抗光老化活性。该文对CP和EP制备工艺进行探讨,同时从CP和EP如何减少皱纹、保湿、美白的角度出发,对两种肽抗皮肤光老化的机理进行综述,以期为CP和EP的日常食用及蛋白肽产品的开发提供科学参考。

关键词：皮肤光老化胶原蛋白肽弹性蛋白肽信号通路作用机理制备

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不同淡水鱼来源弹性蛋白肽的制备及性质分析

食品工业科技 2024年

作者：田顺风石径马淑平冯萌萌罗永康姜燕飞赵春月北京青颜博识健康管理有限公司中国农业大学食品科学与营养工程学院

为充分利用淡水鱼资源和开发新来源的弹性蛋白肽，本研究对三种常见大宗淡水鱼的整颗心脏及动脉球基本信息进行测定，包括其质量、冻干动脉球中总氮含量及锁链素（desmosine，Des）和异锁链素（isodesmosine，Ide）含量等，并以不同淡... 详细信息

为充分利用淡水鱼资源和开发新来源的弹性蛋白肽，本研究对三种常见大宗淡水鱼的整颗心脏及动脉球基本信息进行测定，包括其质量、冻干动脉球中总氮含量及锁链素（desmosine，Des）和异锁链素（isodesmosine，Ide）含量等，并以不同淡水鱼来源的动脉球为原料酶解制备弹性蛋白肽，对弹性蛋白肽中Des和Ide含量、白度、氨基酸组成、肽分子量分布、抗氧化能力等理化特性进行分析。结果表明：鳙鱼动脉球的质量最大，平均为1.26 g/个，显著大于草鱼和鲢鱼动脉球的质量（P弹性蛋白肽中，草鱼弹性蛋白肽的得率最高，为6.01%，鲢鱼弹性蛋白肽的得率最低，为4.13%，鲢鱼弹性蛋白肽中的Des和Ide总含量最高，为0.33%，明显比其他两种弹性蛋白肽中的含量高（P弹性蛋白肽的氨基酸组成中，甘氨酸、丙氨酸、谷氨酸、脯氨酸和缬氨酸是含量较高的氨基酸，尤其是草鱼弹性蛋白肽中Gly含量高达26%，组氨酸和蛋氨酸含量均较低，而羟脯氨酸含量没有明显差异（P弹性蛋白肽中必需氨基酸含量最高，为27.77%。此外，鳙鱼弹性蛋白肽中分子质量小于500 Da的肽段占比最高，达到75.74%，草鱼弹性蛋白肽的ABTS自由基清除能力最强，在质量浓度为2.0 mg/mL时，对ABTS自由基的清除率高达93.54%。结果显示，淡水鱼动脉球是制备弹性蛋白肽的潜在优势原料，不同品种淡水鱼弹性蛋白肽的性质存在一定差异。本研究为淡水鱼资源的充分利用及开发高质量的弹性蛋白肽产品提供了理论依据。

关键词：淡水鱼动脉球弹性蛋白肽锁链素异锁链素氨基酸组成分子量 ABTS自由基清除率

烟草烟雾联合弹性蛋白肽诱导小鼠肺气肿的转录组测序和相关差异基因表达的分析

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烟草烟雾联合弹性蛋白肽诱导小鼠肺气肿的转录组测序和相关差异基...

作者：冯欣广西医科大学

学位级别：硕士

目的:构建烟草烟雾联合弹性蛋白肽(EP)诱导的小鼠肺气肿模型,对小鼠肺组织运用转录组测序(RNA-seq)技术,从转录水平探究与慢性阻塞性肺疾病(COPD)发生发展相关的差异基因、生物生化代谢过程及信号转导途径,寻找防治COPD的新靶点。方法:... 详细信息

目的:构建烟草烟雾联合弹性蛋白肽(EP)诱导的小鼠肺气肿模型,对小鼠肺组织运用转录组测序(RNA-seq)技术,从转录水平探究与慢性阻塞性肺疾病(COPD)发生发展相关的差异基因、生物生化代谢过程及信号转导途径,寻找防治COPD的新靶点。方法:采用烟草烟雾暴露联合EP建立小鼠肺气肿模型,并按随机数字表法将50只小鼠随机分为空气伪暴露组(NORMAL组)和烟草烟雾+弹性蛋白肽组(EP组),每组25只。各组小鼠在烟草烟雾暴露2周后立即随机通过眶后动脉取血收集10只小鼠的血清,ELISA检测可替宁(Cot)的浓度。EP组剩余小鼠通过滴鼻法给予EP,造模到期后采集肺组织标本,4%甲醛溶液固定小鼠肺组织24-48h,继而进行包埋和切片。通过HE染色法观察小鼠肺部的病理情况,计算肺部平均内衬间隔(MLI);对肺组织样品进行Total RNA的提取,选取合格的Total RNA样品,其中NORMAL组(n=3)、EP组(n=4),构建c DNA文库并进行RNA-seq。将数据进行质控、过滤和参考基因组比对后,获得各样本的基因表达量,以差异倍数|LogFC|>0,显著性Q-value≤0.05为条件筛选出差异表达基因(DEGs),进行基因本体(GO)和京都基因和基因组百科全书(KEGG)功能注释和富集分析。选取表达丰度较高、差异倍数有统计学意义的部分基因,通过GENEMANIA和STRING在线数据库分别绘制基因网络和蛋白互作网络(PPI)寻找相关的基因及蛋白,并且使用实时荧光定量PCR技术(q RT-PCR)和免疫组化(IHC)技术对这些基因进行初步验证。结果:(1)EP组小鼠血清的Cot浓度(39.60±2.3ng/ml)显著高于NORMAL组(20.04±5.05ng/ml),差异有显著统计学意义(P蛋白结合、蛋白激酶结合、激酶活性等生物生化及代谢过程;KEGG通路富集分析显示DEGs主要富集于细胞因子与细胞因子受体相互作用、T细胞受体信号通路、MAPK信号通路、Rap1信号通路、胞吞作用、趋化因子信号通路、Th17细胞分化、Th1和Th2细胞分化信号通路等。(4)对上调基因Hoxa5、Hhip、Acvr2a、Bmp4、Fam13a,下调基因Ctla4、Arntl(Bmal1)、Gmfg进行基因网络和PPI发现这些基因相互关联并且与氧化应激、免疫炎症等方面有关。(5)通过q RT-PCR和IHC从分子和蛋白水平验证上述基因,发现其表达趋势与RNA-seq所得结果相符。结论:(1)KEGG Pathway富集分析发现细胞因子与细胞因子受体的相互作用、Th细胞分化、Rap1、MAPK等信号通路可能参与肺气肿发生发展;GO富集分析肺气肿可能主要与炎症反应、免疫应答、免疫调节、氧化应激损伤、细胞凋亡等生物过程有关,为研究COPD的发生发展机制提供了转录组学基础及更完整的基因图谱。(2)上调基因Hoxa5、Hhip、Acvr2a、Bmp4、Fam13a及下调基因Ctla4、Arntl、Gmfg有可能成为防治COPD进展的新靶点。

关键词：肺气肿烟草烟雾弹性蛋白肽转录组测序差异基因

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基于弹性蛋白肽的高密度梳形温敏聚合物

基于弹性蛋白肽的高密度梳形温敏聚合物

作者：王磊上海大学

学位级别：硕士

温度敏感型多肽聚合物的合成研究近年来受到广泛关注。它们不仅具有常规温敏聚合物的智能响应行为，同时还具有多肽二次有序构象、生物相容性和生物可降解性等的结构及特征，因而在药物可控释放、基因载体、组织工程、蛋白质纯化和智能... 详细信息

温度敏感型多肽聚合物的合成研究近年来受到广泛关注。它们不仅具有常规温敏聚合物的智能响应行为，同时还具有多肽二次有序构象、生物相容性和生物可降解性等的结构及特征，因而在药物可控释放、基因载体、组织工程、蛋白质纯化和智能界面等方面有重要的研究价值和应用前景。弹性蛋白肽（ELP）是迄今为止研究最受关注的一类温敏多肽，已被应用于制备包括线形或梳形等不同结构的温敏多肽聚合物，但其温敏行为普遍存在相变过程缓慢、相变温度范围宽等问题。本论文首次合成了每个重复单元侧基带有两个弹性蛋白肽基元（VPGVG）的高密度梳形多肽聚合物。通过液相合成法有效制备了序列为VPGVG的弹性蛋白五肽。在其端基通过赖氨酸基元引入聚合单元，采用大单体路线经自由基聚合反应制得了不同分子量的多肽聚合物。对所得聚合物及其对应的脱保护产物进行了结构分析。发现两种脱保护聚合物在一定pH值的缓冲溶液中具有温敏行为。采用UV/Vis进行了浊度测试以对其温敏特性深入研究，发现这类高密度梳形聚合物表现出优异的温敏行为，其相转变温度（LCST）范围比文献报道的要明显窄。进一步分析发现脱保护聚合物的LCST随分子量、浓度、pH、盐浓度的增加而降低。采用圆二色谱（CD）对保护和脱保护的不同聚合物进行二次有序结构表征发现，它们都呈现部分β-turnⅡ型二级结构。在此工作基础上，进一步利用醛基与氨基可以在一定条件下形成希夫碱动态键的反应，将核点为醛基、具有潜在温敏特性的烷氧醚树枝化基元G1与脱保护的弹性蛋白肽梳形聚合物侧链端氨基进行反应，制备了具有希夫碱动态键链构造的一类新型温敏多肽聚合物。通过调整溶液pH值变化实现了对聚合物动态键链的形成与断链的控制。采用UV/Vis对所得动态键链梳形聚合物的温敏特性进行了分析，有趣地发现该聚合物的温敏性可以通过温度及时间来调控：加热聚集促进了动态键链的形成，从而提高侧链接枝率，使得聚合物的相变温度从弹性蛋白肽的50oC以上降低到烷氧醚树枝基元的40oC以下。而聚集促使的动态键链在降温后会发生解离，这使得聚合物的相变温度可以通过溶液存放数日而得到回复。另外动态聚合物的LCST还可以通过调整动态键链形成组分之间的比例和溶液pH来调节。采用动态光散射（DLS）对脱保护的高密度梳形多肽聚合物及其对应的动态聚合物温敏过程中的聚集行为进行了表征。发现动态聚合物形成的聚集体尺寸要比相应脱保护聚合物的要大，说明前者的聚集驱动力（疏水性）要远大于后者。

关键词：弹性蛋白肽温敏梳形聚合物动态键联