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医学研究与教育 2011年第3期28卷 7-11页

作者：田景贤周艳芬杨欢欢倪志华张瑞英任国栋河北大学生命科学学院河北保定071002 河北省生物工程技术研究中心河北保定071002

目的研究弯齿琵甲粗蛋白诱导宫颈癌Hela细胞的凋亡作用及其作用机制。方法采用硫酸铵沉淀法提取弯齿琵甲粗蛋白,分别按7.5、10和15μ***-1三个浓度作用于Hela细胞48h和72h,吖啶橙-EB染色后倒置荧光显微镜下观察细胞的形态变化,DNA琼脂... 详细信息

目的研究弯齿琵甲粗蛋白诱导宫颈癌Hela细胞的凋亡作用及其作用机制。方法采用硫酸铵沉淀法提取弯齿琵甲粗蛋白,分别按7.5、10和15μ***-1三个浓度作用于Hela细胞48h和72h,吖啶橙-EB染色后倒置荧光显微镜下观察细胞的形态变化,DNA琼脂糖凝胶电泳检测凋亡细胞DNA断裂情况,Annexin V-FITC/PI双染法定量检测细胞的凋亡情况。结果不同浓度的粗蛋白作用于细胞48h后均出现较明显的细胞凋亡形态,10和15μ***-1两浓度粗蛋白作用于细胞后使DNA片断化,流式细胞术检测显示加入15μ***-1的弯齿琵甲粗蛋白在48h以及72h的凋亡率分别达到了10.95%和28.075%,坏死率也分别达到了2.02%和18.34%。结论弯齿琵甲粗蛋白能够抑制Hela细胞增殖,诱导Hela细胞凋亡,且呈时间剂量依赖关系。

关键词：弯齿琵甲粗蛋白 Hela细胞系细胞凋亡

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瓜蒌含药血清及弯齿琵甲对Hela细胞增殖抑制作用的研究

瓜蒌含药血清及弯齿琵甲对Hela细胞增殖抑制作用的研究

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作者：田景贤河北大学

学位级别：硕士

癌症是威胁人类健康的常见病及多发病,然而,临床常用的化学合成药物给患者带来严重的不良反应和明显的毒副作用,因此,开发天然抗肿瘤药物越来越受到人们重视。瓜蒌是栝楼或双边栝楼的成熟果实,是抗癌中药复方中常见的药物,为了明确瓜... 详细信息

癌症是威胁人类健康的常见病及多发病,然而,临床常用的化学合成药物给患者带来严重的不良反应和明显的毒副作用,因此,开发天然抗肿瘤药物越来越受到人们重视。瓜蒌是栝楼或双边栝楼的成熟果实,是抗癌中药复方中常见的药物,为了明确瓜蒌水煎剂对肿瘤细胞增殖的影响,本实验利用血清药理学方法制备高、中、低3种剂量的瓜蒌含药血清,分别处理Hela细胞24 h和48 h,MTT法检测该含药血清对Hela细胞生长的抑制作用, Wright’s-Giemsa染色和AO-EB染色法观察凋亡细胞的形态学变化,利用DNA琼脂糖凝胶电泳从分子水平检测其对肿瘤细胞的影响。结果表明,不同剂量的瓜蒌含药血清均对Hela细胞的增殖有抑制作用,且呈剂量时间依赖关系,其中,高剂量组瓜蒌含药血清对Hela细胞的抑制率最大,20%的高剂量瓜蒌含药血清在24h、48h的抑制率能分别达到36.4%和48.2%,说明瓜蒌具有抑制宫颈癌Hela细胞增殖和诱导细胞凋亡的作用。弯齿琵甲(Blaps femoralis)是拟步甲科(Tenebrionidae)琵甲族(Blaptini)琵甲属(Blaps Fabricius,1775)的一个优势昆虫,民间长期用于治疗肺气肿、风湿、肿瘤等疑难杂症。本研究首先利用血清药理学的方法制备弯齿琵甲含药血清,采用上述方法研究弯齿琵甲对Hela细胞增殖的抑制作用。结果显示弯齿琵甲含药血清能够抑制肿瘤细胞增殖,且呈时效、量效关系,其中,20%琵甲高浓度含药血清在24h和48h的抑制率分别能达到23.4%和37.3%。为了进一步分析弯齿琵甲抗肿瘤作用的有效成分,本研究采用硫酸铵沉淀法得到弯齿琵甲粗蛋白提取液,进行体外实验。倒置荧光显微镜下观察凋亡细胞形态,DNA琼脂糖凝胶电泳检测凋亡细胞DNA断裂情况,Annexin V-FITC/PI双染法定量检测凋亡细胞以及Western-blot法检测Caspase-3蛋白表达的情况。结果显示弯齿琵甲粗蛋白能够诱导细胞凋亡, 15mg﹒mL的弯齿琵甲粗蛋白在48h以及72h的凋亡率能分别达到10.95%和28.075%,坏死率也分别达到2.02%和18.34%,Western-blot检测其诱导细胞凋亡的通路包括caspase依赖的方式。综合以上,中药瓜蒌及弯齿琵甲对Hela细胞的增殖具有一定的抑制效果,同时也显示出我国中药在抗肿瘤研究中的巨大潜力,此项研究为以上两种中药的临床实验提供了可靠的依据。

关键词：瓜蒌含药血清弯齿琵甲含药血清弯齿琵甲粗蛋白 Hela细胞凋亡

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