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脂肪源间充质干细胞与异种骨支架材料生物相容性研究

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南方医科大学学报 2009年第4期29卷 638-641页

作者：张学全原林杨林林姜雪梅杨春余磊戴景兴南方医科大学人体解剖学教研室广东广州510515

目的制备并检测异种骨支架材料和种子细胞的生物相容性、验证脂肪源间充质干细胞作为种子细胞及异种骨作为支架材料的可行性。方法制备异种骨支架材料,并与脂肪源间充质干细胞复合培养,分别做扫描电镜观察、细胞活性检测和碱性磷酸酶的... 详细信息

目的制备并检测异种骨支架材料和种子细胞的生物相容性、验证脂肪源间充质干细胞作为种子细胞及异种骨作为支架材料的可行性。方法制备异种骨支架材料,并与脂肪源间充质干细胞复合培养,分别做扫描电镜观察、细胞活性检测和碱性磷酸酶的测定,各组均以人同种异体骨支架材料作对照。结果复合培养4和10d后电镜下两种材料均见到脂肪源性间充质干细胞的存活并伸出伪足黏附在材料上;MTT法显示两组材料上的细胞增殖数均随时间的延长而呈增长趋势;与同种异体骨支架材料相比,异种支架材料内细胞碱性磷酸酶的变化趋势与其基本一致,均随时间的延长而增高。结论脂肪源间充质干细胞与异种骨支架材料有较好的生物相容性,两者复合构建组织化工程骨的前景值得进一步研究。

关键词：脂肪间充质干细胞异种骨支架材料细胞培养

两种去抗原异种骨性能评价及修复大鼠颅骨缺损实验研究

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中国修复重建外科杂志 2021年第10期35卷 1303-1310页

作者：李矛白玉龙李淼周建伟首都医科大学附属北京同仁医院骨科北京100730 上海亘从生物医用材料研究中心上海201201 上海亚朋生物技术有限公司上海201201

目的评价两种去抗原异种骨支架脱钙骨基质(decalcified bone matrix,DBM)和煅烧骨的理化性能、免疫原性及成骨能力。方法取成年猪股骨,通过除去异种骨无机成分和有机成分的方式,分别制备异种DBM和煅烧骨。测量并计算两种材料的密度、pH... 详细信息

目的评价两种去抗原异种骨支架脱钙骨基质(decalcified bone matrix,DBM)和煅烧骨的理化性能、免疫原性及成骨能力。方法取成年猪股骨,通过除去异种骨无机成分和有机成分的方式,分别制备异种DBM和煅烧骨。测量并计算两种材料的密度、pH值,扫描电镜观察材料形貌并测量孔径,全自动接触角测量仪测量材料的表面接触角;并通过细胞毒性实验、成骨细胞增殖实验、DNA残留检测和人外周血淋巴细胞增殖实验评价两种材料的安全性、成骨活性及免疫原性。将两种材料分别植入6周龄雄性SD大鼠颅骨直径5 mm全层缺损(空白对照组不植入材料),术后4、8周取材,通过大体观察、Micro-CT扫描和HE染色观察评价材料对大鼠颅骨的修复效果。结果与煅烧骨比较,DBM密度较小,亲水性较差;两种材料pH值在5.5~6.1之间,孔径介于160~800μm之间。两种材料均无细胞毒性且能够促进成骨细胞增殖,培养1、4、7 d成骨细胞增殖吸光度(A)值DBM组均显著大于煅烧骨组(P异均有统计学意义(P异无统计学意义(P>0.05)。HE染色示,术后4、8周,空白对照组缺损部位被纤维结缔组织填充,缺损明显,未见骨长入;DBM组和煅烧骨组缺损均已被不同程度修复,可见大量新骨生成,DBM组材料降解性优于煅烧骨组。结论两种异种骨支架理化性能及降解性略有差异,无免疫原性,且均能促进大鼠颅骨缺损的修复。

关键词：异种骨脱钙骨基质煅烧骨颅骨缺损大鼠

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过氧化氢处理时间对异种骨移植替代物的影响

中国修复重建外科杂志 2009年第5期23卷 538-541页

作者：李丹毕龙刘民王军吕荣谢恩金静胡蕴玉第四军医大学西京医院全军骨科研究所西安710032

目的探讨H2O2处理时间对牛松质骨粒生物学特性的影响。方法健康24月龄秦川牛10头,雌雄不限,体重150～170kg。取牛肱骨头松质骨,切割成5mm×5mm×5mm大小骨粒,分别以8.8mol/LH2O2浸泡0、12、24、36、48、60、72h后,行灰化组分测定、扫描... 详细信息

目的探讨H2O2处理时间对牛松质骨粒生物学特性的影响。方法健康24月龄秦川牛10头,雌雄不限,体重150～170kg。取牛肱骨头松质骨,切割成5mm×5mm×5mm大小骨粒,分别以8.8mol/LH2O2浸泡0、12、24、36、48、60、72h后,行灰化组分测定、扫描电镜观察、X射线能谱分析及显微CT观察,研究牛松质骨粒的组分、结构、骨质及骨量变化。结果随H2O2处理时间延长,骨粒有机物含量逐渐减少,0～24h和60～72h有机物含量差异有统计学意义(P0.05)。骨粒中钙、磷元素含量逐渐减少,60h后几乎检测不到(P异种骨粒中有机物抗原成分,但处理时间超过60h会严重破坏骨粒组分和结构,故合理掌握处理时间对消除异种骨移植替代物抗原性并维持其生物学特性具有重要意义。

关键词：过氧化氢异种骨灰分扫描电镜显微CT X射线能谱

海藻酸钠凝胶复合异种骨构建组织工程骨及体内成骨

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中国修复重建外科杂志 2008年第6期22卷 732-736页

作者：孙磊张柏青陈磊陶剑锋江健孟国林窦榆生徐建强刘丹平胡蕴玉北京积水潭医院北京100035 武警总医院第四军医大学全军创伤骨科研究所

目的采用海藻酸钠凝胶(sodium alginate,A)复合异种骨的方法,构建骨组织工程载体,观察载体中细胞的生物性能及体内成骨能力,为构建效率更高的骨组织工程载体提供实验依据。方法取2只2周龄新西兰兔的骨髓,以rhBMP-2(1×10-8 mol/L)诱导培... 详细信息

目的采用海藻酸钠凝胶(sodium alginate,A)复合异种骨的方法,构建骨组织工程载体,观察载体中细胞的生物性能及体内成骨能力,为构建效率更高的骨组织工程载体提供实验依据。方法取2只2周龄新西兰兔的骨髓,以rhBMP-2(1×10-8 mol/L)诱导培养BMSCs。取诱导后第2代BMSCs接种于1%(V/W)A中,培养4 d HE染色观察凝胶中细胞形态。将第2代BMSCs分为单纯DMEM凝胶组和含1%A的DMEM凝胶组,培养7 d后行BMP-2免疫组织化学染色观察。第2代BMSCs与2%(V/W)A的DMEM凝胶混合,负压下复合去抗原牛松质骨(xenograft bone,X),4 d后扫描电镜观察细胞生长情况。取24只裸鼠,随机分为2组(n=12),于两侧股部肌袋中分别植入BMSCs-A-X复合体作为实验组,BMSCs-X复合体作为对照组。于术后2、4周后组织学观察复合体成骨情况,图像分析系统分析各组成骨或软骨的面积百分比。结果HE染色观察,培养4 d A中BMSCs细胞形态饱满,细胞悬浮于凝胶中,可见细胞分裂和核分裂相。单纯DMEM凝胶组和含1%A的DMEM凝胶组免疫组织化学观察,细胞分裂增殖正常,伸出多种形态的突起,胞核大,核仁清晰。单纯DMEM凝胶组BMP-2表达阳性率为44.10%±3.02%;含1%A的DMEM凝胶组为42.40%±4.83%,差异无统计学意义(P>0.05)。扫描电镜观察:A均匀复合于X微孔中,不同平面均有细胞生长。植入裸鼠体内2周后,实验组及对照组中均有软骨和骨组织形成;实验组软骨面积百分比为7.31%±0.32%,骨为5.26%±0.24%;对照组软骨为2.31%±0.21%,骨为2.16%±0.22%;两组差异有统计学意义(P异有统计学意义(P异有统计学意义(P<0.05)。结论以A-X构建骨组织工程载体,符合组织工程载体的超结构原理,最大限度地承载细胞,生物性能好,对BMSCs增殖和成骨表型及相关的生物性能无不良影响,在体内成骨效率较高。

关键词：组织工程骨海藻酸钠凝胶异种骨载体体内成骨

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异种骨移植63例初步报道

中国修复重建外科杂志 1998年第5期12卷 309-311页

作者：刘泽炎夏禄华巩万钧何风鳞汤大江蓬溪县中医院外科

１９８４年１月～１９９７年１１月，应用煮沸异种（猪、牛）骨行植骨术６３例６５次。其中用于促进骨愈合的植骨术２４次，髓内植骨内固定３７次，治疗骨髓炎４次。术后患者全部获得随访，随访时间为２个月～１１年８个月。结果表明，... 详细信息

１９８４年１月～１９９７年１１月，应用煮沸异种（猪、牛）骨行植骨术６３例６５次。其中用于促进骨愈合的植骨术２４次，髓内植骨内固定３７次，治疗骨髓炎４次。术后患者全部获得随访，随访时间为２个月～１１年８个月。结果表明，除５次手术感染外，其余切口均Ⅰ期愈合。认为，异种骨在人体内存在排异反应，严重者需用免疫抑制剂治疗。异种骨植骨是否成功与植骨的量和骨膜剥离的范围及方法有关。

关键词：异种骨骨移植临床应用

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异种骨和人工骨修复骨肿瘤性骨缺损

中国组织工程研究 2014年第16期18卷 2468-2473页

作者：方志伟李舒樊征夫白楚杰刘佳勇薛瑞峰张路北京大学肿瘤医院暨北京市肿瘤防治研究所骨与软组织肿瘤科恶性肿瘤发病机制及转化研究教育部重点实验室北京市100142

背景:自体植骨是修复骨肿瘤刮除后骨缺损最理想的材料和方法,但存在增加手术创伤,取骨部位的后遗症如感染和疼痛及自体骨的取量有限等缺点。目的:分析硫酸钙人工骨和异种骨修复良性骨肿瘤刮除后骨缺损的临床疗效。方法:选择26例良性骨... 详细信息

背景:自体植骨是修复骨肿瘤刮除后骨缺损最理想的材料和方法,但存在增加手术创伤,取骨部位的后遗症如感染和疼痛及自体骨的取量有限等缺点。目的:分析硫酸钙人工骨和异种骨修复良性骨肿瘤刮除后骨缺损的临床疗效。方法:选择26例良性骨肿瘤患者,其中骨巨细胞瘤8例,内生软骨瘤5例,纤维组织细胞瘤4例,骨纤维异样增殖症3例,非骨化性纤维瘤2例,骨囊肿2例,动脉瘤样骨囊肿和软骨母细胞瘤各1例。12例采用单一硫酸钙骨粒填充肿瘤切除后的骨缺损,6例采用单一异种骨条填充肿瘤切除后的骨缺损,8例采用硫酸钙骨粒+异种骨条填充肿瘤切除后的骨缺损。治疗后1周内、3个月、1年拍X射线片检查,了解植骨愈合情况。结果与结论:治疗后随访36-72个月,发现硫酸钙骨粒的降解发生较早,一般治疗后1个月就开始出现骨粒降解,3个月大部分已降解完毕并有骨替代发生,1年骨修复塑型良好;异种骨条3个月后降解并有骨替代发生,植骨充填物边缘模糊,6个月后骨缺损及充填物之间边界变模糊,有融合现象,1年骨缺损内密度均匀,骨小梁形成明显,骨修复良好;骨粒+骨条混合植骨者介于单纯硫酸钙骨粒和单纯异种骨条之间,出现骨粒部分先降解先修复、骨条部分后降解后修复,一般术后1年达到骨性愈合。说明硫酸钙人工骨和异种骨在骨肿瘤性骨缺损修复应用中的效果良好,在良性骨肿瘤刮除后植骨可以替代自体骨植骨。

关键词：生物材料骨生物材料骨肿瘤人工骨硫酸钙异种骨植骨

异种骨/重组人骨形态发生蛋白7/纤维蛋白胶复合材料的缓释性能及成骨活性

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中国组织工程研究 2017年第10期21卷 1527-1531页

作者：张建华河北沧州中西医结合医院河北省沧州市061000

背景:骨形态发生蛋白的稳定缓慢释放是其诱导成骨作用的前提,因此需要合适的载体使骨形态发生蛋白缓慢释放,然而迄今为止还没有一种医学界公认的骨形态发生蛋白理想载体。目的:评价异种骨复合材料中骨形态发生蛋白7的缓释情况及成骨活... 详细信息

背景:骨形态发生蛋白的稳定缓慢释放是其诱导成骨作用的前提,因此需要合适的载体使骨形态发生蛋白缓慢释放,然而迄今为止还没有一种医学界公认的骨形态发生蛋白理想载体。目的:评价异种骨复合材料中骨形态发生蛋白7的缓释情况及成骨活性。方法:以异种小牛松质骨为支架材料,采用真空负压吸附法将含重组人骨形态发生蛋白7的溶液吸附在支架材料上,再喷涂纤维蛋白胶涂层,制备异种骨/重组人骨形态发生蛋白7/纤维蛋白胶复合材料,作为实验组材料;将小牛松质骨、小牛松质骨/重组人骨形态发生蛋白7复合材料分别作为空白组、对照组材料。将3组材料分别在PBS中持续浸泡28 d,观察重组人骨形态发生蛋白7的缓释情况;将3种材料分别与第3代髓间充质干细胞共培养,检测培养1,3,7,14 d的细胞碱性磷酸酶活性、骨桥蛋白和骨钙素表达水平。结果与结论:(1)空白组无重组人骨形态发生蛋白7释放,实验组重组人骨形态发生蛋白7的缓释效果优于对照组;(2)实验组、对照组培养不同时间点的碱性磷酸酶活性、骨桥蛋白和骨钙素表达水平均高于空白组(P异种骨/重组人骨形态发生蛋白7/纤维蛋白胶复合材料具有良好的缓释性能及成骨活性。

关键词：生物材料骨生物材料异种骨复合物骨形态发生蛋白缓释成骨活性

异种骨材料浸提液对骨髓间充质干细胞生物学特性的影响

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中国组织工程研究 2015年第36期19卷 5753-5757页

作者：李非陈阳王占长北京华信医院(清华大学第一附属医院)骨科北京市100016

背景:如何在去抗原等处理基础上保留异种骨材料的生物学性能及成骨诱导活性成为研究热点之一。目的:探讨异种骨材料浸提液对骨髓间充质干细胞增殖迁移及成骨分化能力的影响。方法:SD大鼠骨髓间充质干细胞分别用异种骨材料浸提液(实验组... 详细信息

背景:如何在去抗原等处理基础上保留异种骨材料的生物学性能及成骨诱导活性成为研究热点之一。目的:探讨异种骨材料浸提液对骨髓间充质干细胞增殖迁移及成骨分化能力的影响。方法:SD大鼠骨髓间充质干细胞分别用异种骨材料浸提液(实验组)和含体积分数为10%胎牛血清的DMEM/F12培养基培养(对照组)。MTT法、Transwell小室法、流式细胞仪检测骨髓间充质干细胞增殖能力、迁移能力、细胞周期变化。取第3代SD大鼠骨髓间充质干细胞,实验组加入成骨诱导分化浸提液,对照组加入成骨诱导分化培养液,培养至第7,14天进行碱性磷酸酶染色,培养第21天进行茜素红染色,观察钙结节形成情况。结果与结论:实验组培养1,3,5,7 d的细胞增殖活性与对照组比较差异无显著性意义(P>0.05),两组细胞周期差异无显著性意义(P>0.05)。对照组迁移细胞数显著少于实验组(P异种骨材料无细胞毒性,具有良好的细胞相容性,可以对骨髓间充质干细胞增殖迁移及定向分化成骨细胞产生有利的促进作用。

关键词：干细胞骨髓干细胞异种骨骨髓间充质干细胞成骨细胞增殖定向分化

异种骨对骨髓间充质干细胞活性及成骨诱导的分化影响

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中华手外科杂志 2014年第1期30卷 57-60页

作者：李丽华黄金龙李梅蓝国波夏虹侯丽张余广州军区广州总医院骨科医院广州510010 山东省医疗器械产品质量检验中心山东省医疗器械生物学评价重点实验室

目的研究异种骨材料对骨髓间充质干细胞（BMSC）的增殖、迁移、细胞周期及定向分化为成骨细胞的能力，并对其生物安全性进行评价。方法取体外培养第5代骨髓间充质干细胞直接接触培养，观察经环氧化物固定制备的异种骨浸提液对骨髓间充... 详细信息

目的研究异种骨材料对骨髓间充质干细胞（BMSC）的增殖、迁移、细胞周期及定向分化为成骨细胞的能力，并对其生物安全性进行评价。方法取体外培养第5代骨髓间充质干细胞直接接触培养，观察经环氧化物固定制备的异种骨浸提液对骨髓间充质干细胞的增殖率、迁移率、细胞周期、碱性磷酸酶（ALP）及钙结节形成的影响，以H—DMEM培养液组作为阴性对照。结果扫描电镜观察BMSC于异种骨上生长状态饱满，细胞呈梭形或多边形；骨髓问充质干细胞在浸提液中培养，第1、3、5、7d组与对照组相比，结果差异无统计学意义，无细胞毒性；膜滤器（Transwell小室）检测细胞迁移，浸提液组为（46．03±5．00）个／视野，对照组为（37．00±3．80）个／视野，P〈0．05。浸提液组组织在G2／M期的细胞为（27．77±1．06）％，对照组为（26．60±1．05）％，P〈0．01。浸提液组的ALP活性高于对照组（P〈0．05），茜素红染色显示浸提液组于14d时钙沉积明显增多。结论所制备异种骨具有良好的细胞相容性，并对骨髓间充质干细胞的迁移和成骨分化有一定的促进作用。

关键词：细胞分化干细胞,间充质异种骨细胞活性