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人肿瘤坏死因子β(hTNFβ)在变铅青链霉菌中的表达研究(英文)

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Acta Genetica Sinica 2003年第3期30卷 209-214页

作者：洪斌李元 Godelieve Van Mellaert Jozef Anné 中国医学科学院中国协和医科大学医药生物技术研究所北京100050 Laboratory of Bacteriology Rega InstituteKatholieke Universiteit LeuvenBelgium

以变铅青链霉菌为宿主研究了人TNFβ(hTNFβ)的异源表达。应用链霉菌S .venezuelaeCBS76 2 70分泌产生的枯草杆菌蛋白酶抑制剂vsi基因的启动子、表达调控序列和分泌信号肽序列 ,分别对hTNFβ进行了直接分泌表达、分泌融合表达和胞内表... 详细信息

以变铅青链霉菌为宿主研究了人TNFβ(hTNFβ)的异源表达。应用链霉菌S .venezuelaeCBS76 2 70分泌产生的枯草杆菌蛋白酶抑制剂vsi基因的启动子、表达调控序列和分泌信号肽序列 ,分别对hTNFβ进行了直接分泌表达、分泌融合表达和胞内表达。将hTNFβ的cDNA分别直接融合于vsi信号肽序列下游 2个氨基酸处、vsi全长基因之后以及vsi起始密码子ATG的下游 ,获得的表达盒分别克隆至链霉菌高拷贝质粒pIJ486 ,转化StreptomyceslividansTK2 4,获得了重组菌株S .lividans(pIJ486 hTNFβ)、S .lividans(pIJ486 vsi hTNFβ)和S .lividans(pIVPA hTNFβ)。分别对不同的重组菌株进行摇瓶培养 ,对其培养的上清液和细胞裂解液进行SDS PAGE和Western杂交 ,结果表明 :hTNFβ在重组菌株中均获得了表达 ,且直接分泌产物和胞内表达产物均具有生物学活性。hTNFβ直接分泌表达产物的分子量约为 16kDa,NB培养基中培养 48h时表达水平约为 0 7mg L。胞内表达产物分子量与对照重组hTNFβ一致(18 7kDa) ,但随培养时间的延长逐步降解为 16kDa ,NB培养基中培养 48h时的表达水平 (2 5 1mg L)远高于其直接分泌表达水平。

关键词：人肿瘤坏死因子β hTNFβ 变铅青链霉菌异源基因表达

枯草杆菌质粒pUB110与大肠杆菌质粒pBR322构建的杂种质粒及其基因表型表达

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Journal of Genetics and Genomics 1982年第3期 180-187页

作者：汤懋竑杨月琴中国科学院遗传研究所中国科学院遗传研究所北京

用EeoRI酶消化pUB 110和pBR 322 DNA,然后以T4 DNA连接酶进行连接,转化大肠杆菌,从转化体中获得pTZ3、pTZ22和pTZ24三个杂种质粒。研究了pTZ22 DNA的分子特性,从BamHI和PstI酶切片段测出其分子量为5.6×10~6道尔顿,并确定其捻接方向。... 详细信息

用EeoRI酶消化pUB 110和pBR 322 DNA,然后以T4 DNA连接酶进行连接,转化大肠杆菌,从转化体中获得pTZ3、pTZ22和pTZ24三个杂种质粒。研究了pTZ22 DNA的分子特性,从BamHI和PstI酶切片段测出其分子量为5.6×10~6道尔顿,并确定其捻接方向。观察了三个杂种质粒的稳定性,研究了其基因表型表达。同源基因均可表达,Ap~r、TC~r基因在枯草杆菌细胞中不能进行异源表型表达,Km~r基因在大肠杆菌细胞中异源表型表达不充分。

关键词：质粒基因载体大肠杆菌大肠埃希氏菌埃希氏杆菌属 pBR322 基因表型表型表达枯草杆菌异源基因表达杂种杂交种

链霉菌高拷贝质粒pIJ101 DNA的研究 I.在大肠杆菌中的启动子活性

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华中农业大学学报 1990年第1期9卷 37-46页

作者：邓子新 Tobias Kieser David A.Hopwood 华中农业大学武汉430070 John Innes Institute England

用大肠杆菌转座子Tn5上去除了自身启动子区域的卡那霉素抗性基因(neo) 作为指示标记来探测广寄主、高拷贝的链霉菌质粒pIJ101上DNA的启动子活性所做的基因融合试验揭示,pIJ101上至少有两个可在大肠杆菌中行使启动子功能的DNA片段。基因... 详细信息

用大肠杆菌转座子Tn5上去除了自身启动子区域的卡那霉素抗性基因(neo) 作为指示标记来探测广寄主、高拷贝的链霉菌质粒pIJ101上DNA的启动子活性所做的基因融合试验揭示,pIJ101上至少有两个可在大肠杆菌中行使启动子功能的DNA片段。基因融合后所产生的杂合质粒能够赋予大肠杆菌ED8767较高的卡那霉素抗性。对含质粒菌株在液体培养基中的生长动力学分析揭示,这种菌株在从无药物向有药物的生长环境中过渡时,生长并不受到暂时的抑制。说明这种启动子活性不是pIJ101DNA上DNA的突变所引起。用大肠杆菌的启动子探针载体pKK232-8所做的体外亚克隆试验更进一步证实了这项观察,并把两个启动子功能区分别缩小到0.54kb和1.18kb的范围内。这项试验成功地组建了质粒pIJ101的亚克隆库,便于对这个重要的链霉菌质粒进行精细的分子生物学研究。

关键词：重组DNA 异源基因表达链霉菌高拷贝质粒药物大肠杆菌启动子

外源基因在甲醇营养型酵母中的表达及优化表达策略

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国外医学（预防．诊断．治疗用生物制品分册） 2002年第3期25卷 113-116页

作者：佟玉品北京军区第二六一医院 100094

甲醇营养型酵母作为第二代酵母近年来在基因工程产品制备过程中得以广泛应用 ,目前已成为独具特色的外源基因表达系统。外源基因在表达过程中受多种因素影响。本文就外源基因在甲醇营养型酵母中的表达。

关键词：外源基因甲醇营养型酵母基因表达优化表达策略异源基因表达

戊型肝炎病毒结构区ORF2蛋白在巴氏毕赤酵母中的胞内表达与纯化的初步研究

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病毒学报 2001年第1期17卷 34-37页

作者：佟玉品毕胜利江永珍詹美云中国预防医学科学院病毒学研究所北京100052

为寻求新型表达系统来研制戊型肝炎基因工程疫苗 ,利用甲醇营养型酵母 pichiapastoris表达系统表达戊型肝炎病毒 (HEV)结构区ORF2蛋白。采用PCR方法从HEVcDNA中扩增得到的ORF2基因克隆到酵母表达载体pPIC3.5K上 ,构建成重组质粒 pPIC3.5... 详细信息

为寻求新型表达系统来研制戊型肝炎基因工程疫苗 ,利用甲醇营养型酵母 pichiapastoris表达系统表达戊型肝炎病毒 (HEV)结构区ORF2蛋白。采用PCR方法从HEVcDNA中扩增得到的ORF2基因克隆到酵母表达载体pPIC3.5K上 ,构建成重组质粒 pPIC3.5KORF2。该质粒转化酵母菌GS115 ,经G418筛选得到高拷贝转化子。转化菌株经Mut表型鉴定后 ,用含甲醇的培养基诱导表达 ,SDS PAGE及ELISA筛选高表达活性菌株 ,放大培养后进行亲合层析纯化。在该系统中成功地表达了高生物活性的HEVORF2蛋白 ,经亲和层析纯化后扫描分析重组蛋白分子量约为 5 9kD ,纯度可达 96 %。Westernblotting证实 ,它与HEVORF2单克隆抗体有特异性反应。HEV结构区ORF2蛋白在甲醇营养型酵母中的成功表达 ,以及初步纯化得到的具有强免疫学活性的重组蛋白。

关键词：戊型肝炎病毒开放读码框架异源基因表达蛋白纯化巴氏毕赤酵母胞内表达

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嗜极菌的极端酶的若干研究进展

浙江海洋学院学报（自然科学版） 2003年第2期22卷 158-162页

作者：王健鑫浙江海洋学院海洋科学与技术学院浙江舟山316004

综述了近年来国内外关于嗜极菌的极端酶研究的若干新进展,初步分析了极端酶在极端环境中保持稳定性及活性的结构特性,并介绍了当前极端酶的生物技术进展及其广阔的应用前景。

关键词：极端酶嗜极菌异源基因表达极端环境

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在大肠杆菌及丙酮丁醇梭杆菌中生产酯

中国医药工业杂志 2006年第3期37卷 149-149页

作者： Horton CE 尚珂（译）胡又佳（校）

生产增味剂酯类化合物是在大肠杆菌中通过异源基因表达获得目标产量的新兴领域。报道了在适当底物存在下，于大肠杆菌中表达啤酒酵母基因atf1或atf2以及草莓基因saat生产乙酸异戊酯、乙酸丁酯、乙酸乙酯以及丁酸丁酯的情况。提高反应中... 详细信息

生产增味剂酯类化合物是在大肠杆菌中通过异源基因表达获得目标产量的新兴领域。报道了在适当底物存在下，于大肠杆菌中表达啤酒酵母基因atf1或atf2以及草莓基因saat生产乙酸异戊酯、乙酸丁酯、乙酸乙酯以及丁酸丁酯的情况。提高反应中添加的底物醇浓度通常可提高酯的产量。在所采用的菌株及培养条件下表达atf1可较表达atf2或saat产生更多的乙酸异戊酯及乙酸丁酯。另外，表达saat可较atf2产生更多的乙酸异戊酯及乙酸丁酯。丁酸丁酯可由表达saat的大肠杆菌无细胞抽提物得到，但表达atf1及atf2则不能。

关键词：酯类化合物大肠杆菌生产丙酮丁醇异源基因表达乙酸异戊酯乙酸丁酯目标产量丁酸丁酯酵母基因