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体外沉默异戊二烯基半胱氨酸羧基甲基转移酶基因对舌鳞状细胞癌迁移和侵袭的影响

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华西口腔医学杂志 2021年第3期39卷 328-335页

作者：周男迟增鹏李文健赵开王少如王奇民童磊何宗轩韩红钰王莹陈正岗潍坊医学院口腔医学院潍坊261021 大连医科大学口腔医学院大连116044 青岛大学口腔医学院青岛266003 青岛大学附属青岛市市立医院口腔医学中心青岛266071 青岛大学附属医院口腔颌面外科青岛266005 济南市第四人民医院口腔科济南250031

目的通过构建异戊二烯基半胱氨酸羧基甲基转移酶(ICMT)小分子干扰RNA(siRNA)沉默ICMT,研究沉默ICMT基因对舌鳞状细胞癌(TSCC)迁移和侵袭的影响。方法通过脂质体转染的方法将siRNA转染至人TSCCCAL-27和SCC-4细胞(ICMT-siRNA组),并设阴性... 详细信息

目的通过构建异戊二烯基半胱氨酸羧基甲基转移酶(ICMT)小分子干扰RNA(siRNA)沉默ICMT,研究沉默ICMT基因对舌鳞状细胞癌(TSCC)迁移和侵袭的影响。方法通过脂质体转染的方法将siRNA转染至人TSCCCAL-27和SCC-4细胞(ICMT-siRNA组),并设阴性对照组(转染NC-siRNA)和空白对照组(仅加转染试剂,不转染siRNA)。应用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测转染后各组细胞中ICMT、RhoA的mRNA表达并明确沉默效率。蛋白质免疫印迹法检测各组ICMT、总RhoA、膜RhoA、Rho关联含卷曲螺旋结合蛋白激酶1(ROCK1)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)蛋白表达。划痕实验测定细胞迁移能力,Transwell侵袭实验测定细胞侵袭能力。结果CAL-27和SCC-4细胞转染ICMT-siRNA后,实验组相较于阴性对照组和空白对照组ICMT基因和蛋白表达明显降低(P0.05),RhoA膜蛋白、ROCK1、MMP-2、MMP-9表达降低(P<0.05)。迁移和侵袭能力明显降低(P<0.05)。结论ICMT-siRNA可显著抑制人TSCCCAL-27和SCC-4细胞迁移及侵袭能力,其机制可能与RhoA-ROCK信号通路有关。

关键词：异戊二烯基半胱氨酸羧基甲基转移酶 RhoA 舌鳞状细胞癌迁移侵袭

体外沉默ICMT基因对人唾液腺腺样囊性癌细胞侵袭和迁移的影响

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口腔疾病防治 2023年第6期31卷 400-407页

作者：陆洲宫文红许晓陈正岗潍坊医学院口腔医学院山东潍坊(261021 青岛大学附属青岛市市立医院口腔医学中心山东青岛(266071

目的探讨异戊二烯基半胱氨酸羧基甲基转移酶(isoprene cysteine carboxymethyl transferase,ICMT)基因对唾液腺腺样囊性癌(salivary adenoid cystic carcinoma,SACC)细胞迁移和侵袭的影响及相关机制,为SACC的分子靶向治疗提供实验依据... 详细信息

目的探讨异戊二烯基半胱氨酸羧基甲基转移酶(isoprene cysteine carboxymethyl transferase,ICMT)基因对唾液腺腺样囊性癌(salivary adenoid cystic carcinoma,SACC)细胞迁移和侵袭的影响及相关机制,为SACC的分子靶向治疗提供实验依据。方法体外培养腺样囊性癌细胞SACC-LM和SACC-83,采用脂质体载体瞬时转染的方法,将ICMT siRNA转染至人SACC-LM和SACC-83细胞中(实验组),并分别设置空白对照组和阴性对照组(转染NC-siRNA)。通过qRT-PCR检测转染后各组细胞中ICMT和RhoA的m RNA表达并明确沉默效率;Western blot检测各组的ICMT、膜RhoA、总RhoA、Rho关联含卷曲螺旋结合蛋白激酶1(Rho associations contain curly helical binding protein kinase 1,ROCK1)、基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)蛋白表达;通过CCK-8实验检测SACC细胞的增殖能力;通过比较细胞划痕实验的相对愈合面积和Transwell实验细胞穿膜数目,分别检测SACC细胞的迁移和侵袭能力。结果 SACC-LM和SACC-83细胞转染ICMT-siRNA后,实验组相较于空白对照组和阴性对照组,ICMT mRNA和蛋白表达显著下降(P0.05);膜RhoA、ROCK1、MMP-2、MMP-9的蛋白表达显著下降(P<0.05),细胞增殖能力明显下降(P<0.05),迁移和侵袭能力明显降低(P<0.05)。结论体外沉默ICMT基因可有效抑制人SACC-LM和SACC-83细胞迁移及侵袭能力,其机制可能与RhoA-ROCK信号通路有关。

关键词：腺样囊性癌 RhoA 异戊二烯基半胱氨酸羧基甲基转移酶小干扰RNA 侵袭迁移 Rho关联含卷曲螺旋结合蛋白激酶1 基质金属蛋白酶-2 基质金属蛋白酶-9 RhoA-ROCK信号通路

沉默Icmt基因对舌鳞癌CAL-27和SCC-4细胞增殖、凋亡及细胞周期的影响

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中国口腔颌面外科杂志 2021年第2期19卷 97-104页

作者：陈正岗王奇民童磊王云英徐晓娜王莹韩红钰盛善桂王少如青岛大学附属青岛市市立医院口腔医学中心山东青岛266071 青岛大学附属青岛市市立医院中心实验室山东青岛266071 济南市第四人民医院口腔科山东济南250031 青岛大学口腔医学院山东青岛266003 大连医科大学口腔医学院辽宁大连116044

目的 :探讨异戊二烯基半胱氨酸羧基甲基转移酶(isoprenylcysteine carboxyl methyltransferase,Icmt)对舌鳞癌CAL-27和SCC-4细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响及其相关机制。方法:针对人Icmt基因序列设计并构建3条小干扰RNA(small interfe... 详细信息

目的 :探讨异戊二烯基半胱氨酸羧基甲基转移酶(isoprenylcysteine carboxyl methyltransferase,Icmt)对舌鳞癌CAL-27和SCC-4细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响及其相关机制。方法:针对人Icmt基因序列设计并构建3条小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA),采用脂质体载体瞬时转染Icmt-siRNA抑制舌鳞癌CAL-27和SCC-4细胞Icmt表达,将实验组分为Icmt-siRNA-1组、Icmt-siRNA-2组、Icmt-siRNA-3组;同时将脂质体转染NC-siRNA作为阴性对照组,只加转染试剂作为空白对照组。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和蛋白质免疫印记法(Western blot)检测转染后各组细胞Icmt、K-Ras的mRNA和蛋白表达及K-Ras膜蛋白的表达;Western免疫印迹检测Cyclin D1、p21、Akt、p-Akt蛋白表达;细胞增殖活性检测试剂盒和流式细胞术检测细胞的增殖活性、周期变化和凋亡能力。应用GraphPad Prism 8.2.1软件对实验数据进行统计学分析。结果:qRT-PCR和Western免疫印迹检测结果显示,与对照组相比,实验组Icmt mRNA和蛋白表达显著下降(P0.05),K-Ras膜蛋白表达显著下降(P0.05),但p-Akt表达显著下降(P<0.05)。细胞增殖活性检测结果表明,与对照组相比,实验组细胞增殖能力显著下降(P<0.05);流式细胞术检测结果表明,实验组细胞凋亡水平较对照组显著增加,细胞周期被阻滞在G1/S期(P<0.05)。结论:体外沉默Icmt基因可有效抑制CAL-27和SCC-4细胞增殖且诱导凋亡,其作用可能是通过影响K-Ras膜蛋白靶向膜定位,负性调控细胞周期和下调Ras/PI3K/Akt/mTOR信号通路而实现。

关键词：异戊二烯基半胱氨酸羧基甲基转移酶 K-Ras 舌鳞状细胞癌 CAL-27 SCC-4 细胞增殖细胞周期细胞凋亡

体外沉默Icmt对舌鳞状细胞癌增殖凋亡的影响

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体外沉默Icmt对舌鳞状细胞癌增殖凋亡的影响

2019第一届全国口腔颌面-头颈肿瘤学术大会——聚合引领、协同发展

作者：王少如陈正岗青岛市立医院(东院区) 青岛市市立医院东院区

研究目的:通过体外小干扰RNA干扰沉默异戊二烯基半胱氨酸羧基甲基转移酶(Isoprenylcysteine Carboxyl Methyltransferase,Icmt),探讨沉默Icmt对舌鳞状细胞癌增殖凋亡的影响及相关机制。研究方法:针对Icmt基因序列设计并构建3条小干扰RNA... 详细信息

研究目的:通过体外小干扰RNA干扰沉默异戊二烯基半胱氨酸羧基甲基转移酶(Isoprenylcysteine Carboxyl Methyltransferase,Icmt),探讨沉默Icmt对舌鳞状细胞癌增殖凋亡的影响及相关机制。研究方法:针对Icmt基因序列设计并构建3条小干扰RNA(small interfering RNA, siRNA),脂质体转染抑制舌鳞状细胞癌Cal-27细胞Icmt表达,同时设置空白对照组(只加入转染试剂,不加入siRNA)和阴性对照组(NC-siRNA)。采用实时定量聚合酶链反应和蛋白质免疫印记法检测转染后各组细胞Icmt、RhoA的mRNA和蛋白表达;蛋白质免疫印记法检测转染48h后RhoA膜蛋白、Cyclin D1、p21、caspase3、cleaved-caspase3蛋白表达;细胞增殖活性检测试剂盒和流式细胞术检测细胞的增殖活性、细胞周期变化和细胞凋亡能力。采用SPSS19.0软件对实验数据进行统计学分析。

关键词：异戊二烯基半胱氨酸羧基甲基转移酶舌鳞状细胞癌舌鳞状细胞癌RhoA 增值凋亡

来源： cnki会议评论

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体外沉默Icmt对舌鳞癌细胞增殖的影响

体外沉默Icmt对舌鳞癌细胞增殖的影响