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花生AhMYB113异位表达促进烟草花青素积累

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中国油料作物学报 2022年第4期44卷 845-851页

作者：李明曹慧许瑞瑞潍坊学院生物与农业工程学院/山东省高等学校生物化学与分子生物学重点实验室山东潍坊261061

为进一步探索MYB转录因子在花生花青素积累过程中的调控机理,以花生常规品种鲁花11(绿色叶片)和紫色叶片花生种质056杂交后代为材料,基于绿色和紫色杂交群体数字基因表达谱克隆了AhMYB113基因,利用生物信息学手段进行保守结构域、系统... 详细信息

为进一步探索MYB转录因子在花生花青素积累过程中的调控机理,以花生常规品种鲁花11(绿色叶片)和紫色叶片花生种质056杂交后代为材料,基于绿色和紫色杂交群体数字基因表达谱克隆了AhMYB113基因,利用生物信息学手段进行保守结构域、系统进化树等分析,通过实时荧光定量PCR技术检测在花生中的表达模式,在转基因烟草中进行功能鉴定。结果表明,花生AhMYB113基因的开放阅读框全长864 bp,编码287个氨基酸残基;编码蛋白的N端包含2个高度保守的MYB结构域,属于R2R3-MYB转录因子;与拟南芥、金鱼草、矮牵牛、苹果、葡萄中调控花青素积累的R2R3-MYB聚成一大类;通过荧光定量PCR分析发现,AhMYB113在花生紫色杂交后代(PH、PS)中的表达水平要显著高于绿色杂交后代(GH、GS);在烟草NC89中异位表达AhMYB113,能够促进花青素积累,使得转基因烟草叶片转变为紫色,随着叶龄增长叶片紫色逐渐加深,花瓣、雄蕊(花丝、花药)、雌蕊(柱头、花柱)、萼片等组织也分别呈现为紫红色或紫黑色。

关键词：花生 AhMYB113 转基因烟草异位表达花青素积累

异位表达Dichaete对果蝇足部发育的影响及其作用机制

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昆虫学报 2018年第2期61卷 149-155页

作者：董玮孔悦马恩波张建珍张敏张徐波山西大学应用生物学研究所太原030006 山西大学生命科学学院太原030006

【目的】果蝇Dichaete基因是Sox家族B亚家族基因,其表达贯穿整个胚胎发育阶段,在个体发育过程中发挥重要作用。Dichaete在野生型果蝇幼虫足芽上也有微弱表达,然而其在足发育过程中的作用少有报道。本研究旨在研究异位表达Dichaete对果... 详细信息

【目的】果蝇Dichaete基因是Sox家族B亚家族基因,其表达贯穿整个胚胎发育阶段,在个体发育过程中发挥重要作用。Dichaete在野生型果蝇幼虫足芽上也有微弱表达,然而其在足发育过程中的作用少有报道。本研究旨在研究异位表达Dichaete对果蝇足部形态构成的影响,探索相关的作用机制。【方法】黑腹果蝇Drosophila melanogaster en-Gal4品系雄性成虫与UAS-Dichaete转基因品系处女蝇杂交,驱动Dichaete异位表达,解剖子一代成虫足,在显微镜下观察异位表达的Dichaete对成虫足形态结构的影响;同时采用免疫组化技术检测异位表达Dichaete对果蝇足芽细胞凋亡和Distal-less(Dll)表达的影响。【结果】异位表达Dichaete导致黑腹果蝇成虫足末端结构缺陷,引起3龄幼虫足芽细胞凋亡增加,上调了Distal-less基因的表达,但对Wg和Dpp信号均无影响;抑制细胞凋亡也无法拯救该缺陷。【结论】异位表达Dichaete导致黑腹果蝇成虫足末端结构缺陷,Dichaete可能通过上调Distal-less基因影响足部发育。

关键词：黑腹果蝇 Dichaete 异位表达足细胞凋亡 Distal-less

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绿竹BoGPIAP基因克隆与异位表达研究

林业科学研究 2015年第5期28卷 627-633页

作者：董丽莉孙化雨赵韩生娄永峰王丽丽高志民国际竹藤中心竹藤科学与技术重点开放实验室北京100102

糖基化磷脂酰肌醇锚定蛋白(GPIAP)因其结构和功能的多样性,决定了它在各种生物学过程中都发挥着重要作用。采用同源克隆的方法从绿竹(Bambusa oldhamii)中获得一个GPIAP同源基因,命名为BoGPIAP,c DNA全长1 772 bp,其中包括1 356 bp的开... 详细信息

糖基化磷脂酰肌醇锚定蛋白(GPIAP)因其结构和功能的多样性,决定了它在各种生物学过程中都发挥着重要作用。采用同源克隆的方法从绿竹(Bambusa oldhamii)中获得一个GPIAP同源基因,命名为BoGPIAP,c DNA全长1 772 bp,其中包括1 356 bp的开放阅读框,编码一个451 aa的的蛋白。蛋白结构分析表明,该蛋白包含1个典型的GPIAP家族保守区域(47-211)和1个CCVS结构域,在N-端和C-端分别具有1个跨膜信号肽和1个GPI锚定信号肽,属于GPIAP家族。构建BoGPIAP与GFP融合的表达载体,在洋葱表皮细胞中瞬时表达,结果显示BoCOBL::GFP融合蛋白定位于细胞膜上,证明BoGPIAP基因编码的蛋白为膜蛋白。分别构建BoGPIAP的正义、反义表达载体并转化烟草(Nicotiana tabacum)。PCR检测结果表明,BoGPIAP已转入烟草。与野生型相比,转反义基因植株细弱,纤维细胞壁明显变薄;而转正义基因植株粗壮,纤维细胞壁明显变厚。表明BoGPIAP可能对竹子纤维细胞壁的发育具有调控作用。

关键词：绿竹糖基化磷脂酰肌醇锚定蛋白基因亚细胞定位异位表达纤维细胞

ATP合成酶F1β亚基在肿瘤中的研究进展及作用机制

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癌症进展 2024年第5期22卷 477-480页

作者：郭子杰王小林南通市肿瘤医院泌尿外科江苏南通2263000

ATP合成酶F1β亚基(ATP5B)基因编码合成线粒体ATP合成酶F1单位上的β亚基,通过电子传递产生的质子梯度催化ADP合成ATP。ATP5B在乳腺癌、胃癌、肺癌和肝癌等多种恶性肿瘤中异常表达,与患者的预后密切相关。既往研究认为,ATP5B仅在线粒体... 详细信息

ATP合成酶F1β亚基(ATP5B)基因编码合成线粒体ATP合成酶F1单位上的β亚基,通过电子传递产生的质子梯度催化ADP合成ATP。ATP5B在乳腺癌、胃癌、肺癌和肝癌等多种恶性肿瘤中异常表达,与患者的预后密切相关。既往研究认为,ATP5B仅在线粒体内膜上表达,但有研究表明,ATP5B也可以在细胞膜上异位表达,并在肿瘤发生、发展中发挥关键作用,可能作为预后的生物标志物和治疗靶点,因此,探讨ATP5B在肿瘤中的作用机制有重要意义。本文就ATP5B在肿瘤发生发展中的研究进展及作用机制进行综述。

关键词： ATP合成酶F1β亚基肿瘤异位表达增殖迁移侵袭

嗅觉受体在乳腺癌中的异位表达及作用机制研究进展

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肿瘤学杂志 2023年第9期29卷 749-753页

作者：王玥刘娜李明潍坊医学院临床医学院山东潍坊261053 山东大学齐鲁医院德州医院山东德州253000

嗅觉受体(olfactory receptors,ORs)现定位于嗅觉上皮,主要功能是识别不同气味。近年来研究发现某些嗅觉受体在乳腺癌中存在异位表达,并与乳腺癌的发生、进展及治疗相关。全文对乳腺癌中相关ORs的表达、生物学特点及作用机制进行总结,探... 详细信息

嗅觉受体(olfactory receptors,ORs)现定位于嗅觉上皮,主要功能是识别不同气味。近年来研究发现某些嗅觉受体在乳腺癌中存在异位表达,并与乳腺癌的发生、进展及治疗相关。全文对乳腺癌中相关ORs的表达、生物学特点及作用机制进行总结,探讨ORs作为乳腺癌肿瘤标志物的可能性以及在治疗中的潜在作用。

关键词：乳腺癌嗅觉受体异位表达

异位表达Dichaete对黑腹果蝇成虫盘发育影响的机制研究

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异位表达Dichaete对黑腹果蝇成虫盘发育影响的机制研究

作者：孔悦山西大学

学位级别：硕士

SOX基因家族是一类转录调控因子,均拥有一段保守的80个氨基酸的DNA结合结构域。SOX2(性别决定区域Y(SRY)-BOX 2)是SOX转录因子家族的成员,SOX2在胚胎发育阶段发挥重要作用,参与调控胚胎干细胞的细胞多能性。此外,与哺乳动物肿瘤干细胞... 详细信息

SOX基因家族是一类转录调控因子,均拥有一段保守的80个氨基酸的DNA结合结构域。SOX2(性别决定区域Y(SRY)-BOX 2)是SOX转录因子家族的成员,SOX2在胚胎发育阶段发挥重要作用,参与调控胚胎干细胞的细胞多能性。此外,与哺乳动物肿瘤干细胞的维持相关。降低SOX2表达,由于细胞周期受阻进而抑制细胞生长;超表达SOX2,则会促进进入细胞周期。同时SOX2也可能是肿瘤细胞持续增殖的必要条件。果蝇在器官发育与构型调控机制方面与人类极为相似,以果蝇为研究模型开展研究,可为人类的疾病治疗提供重要的参考。果蝇翅是重要的发育生物学的研究对象,由于其发育信号调控研究清晰,同时具有很高的分化能力,因此是研究细胞肿瘤式增殖及发育可塑性的理想模型。果蝇Dichaete基因与哺乳动物SOX2基因高度同源,本研究以果蝇翅芽为主要研究对象,探索Dichaete调控果蝇翅芽细胞命运分化的作用机制以及对腿芽发育的影响。主要内容如下:一、异位表达Dichaete对果蝇足发育的影响及其作用机制异位表达Dichaete,造成成虫足发育畸形,跗节缩短。解剖幼虫状态的足芽以及蛹前期的足芽,形态上没有畸形;Dll是负责末端结构形成的,在足芽增加Dll的表达可影响足末端结构发育。抗体检测,足芽Dll水平上升造成成虫足的畸形。二、异位表达Dichaete对果蝇翅发育的影响及其调控机制研究在黑腹果蝇翅芽中异位表达Dichaete,结果表明:异位表达的Dichaete对翅芽不同的区域的作用不同。在翅芽翅囊区:异位表达Dichaete,检测到在翅囊区出现一定程度的细胞凋亡。检测细胞成形素Wg的变化,发现,在翅囊区异位表达Dichaete,抑制Wg信号;同时成虫翅出现翅脉融合的表型;利用flp/ay技术,随机制造Dichaete异位表达的克隆,克隆里的Wg信号也受抑制。检测下游Vg信号,同样也被抑制。Vg对于整个翅盘的形成起直接作用,Wg信号下调引起的Vg下调可能是造成成虫翅脉出现融合以及翅盘缩小的原因。在翅芽背板区,异位表达Dichaete,发现,背板区过度增殖形成一个新的结构,检测增殖区的细胞命运,发现其细胞命运已经发生转变,表达翅囊区的marker基因Vg,在成虫中诱导形成一个新的小翅。检测增殖区Wg信号变化,发现该增殖部分出现异位表达的Wg信号,进一步检测Wg信号的上游Notch信号通路的变化,发现在增殖部分Notch信号上调,因此,推测异位表达Dichaete通过作用于Notch/Wg通路在背板区诱导产生新的翅囊区。三、异位表达Dichaete对果蝇翅芽干细胞特性的诱导SOX2基因可能与肿瘤干细胞的维持相关。干细胞拥有重新分化的能力。异位表达Dichaete的翅芽中,背板区新生一个翅囊区,我们推测可能与ips细胞诱导及再分化相关。于是检测了干细胞相关及细胞再分化标记markers:Vasa、SXL、Bam、E-cad等。Vasa、SXL是在干细胞早期的重要标志基因。在野生型中二者表达较低,异位表达Dichaete后的背板增殖区比野生型翅芽Vasa和SXL表达量均上升。Bam与干细胞分化息息相关。在干细胞开始分化的过程中逐渐升高。异位表达Dichaete后的增殖区比野生型翅芽Bam表达量可能下降。E-cad与细胞之间的关联度相关,低表达使得细胞之间关联度下降,易于转移。异位表达Dichaete后,增殖区、翅囊区E-cad相比野生型翅芽表达量升高。因此推测,异位表达Dichaete在一定程度上可以诱导干细胞特性的产生,逆转为该器官原基的状态,这可能是造成翅芽中新翅囊形成的原因之一。结论:异位表达Dichaete,引起足芽Dll上调,细胞凋亡增加,进而导致成虫足跗节发育畸形。在翅芽上,异位表达Dichaete通过Wg/Vg信号通路发挥作用,在翅芽的不同的区域,对Wg的调控作用不同,在翅囊区下调Wg的表达,进而抑制Vg,引起细胞凋亡增加,成虫翅盘缺陷;在背板区诱导Wg异位表达,形成完整的Wg环,进而致使该区域细胞增殖,在增殖区域表达Vg,形成一个新的翅囊区,在成虫中形成附加的新翅。此外,异位表达Dichaete可能诱导增殖区细胞出现部分干细胞特性,这些细胞在微环境的刺激下,促进形成新的翅囊区。

关键词： Dichaete 黑腹果蝇足芽翅芽异位表达 wingless 干细胞特性

麻竹转录因子DlSCL6的基因克隆及在拟南芥中异位表达

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林业科学 2014年第11期50卷 52-57页

作者：杨丽陈东亮彭镇华赵韩生高志民国际竹藤中心竹藤科学与技术重点开放实验室北京100102 北京市农林科学院北京农业生物技术研究中心北京100097 中国林业科学研究院林业研究所北京100091

GRAS家族HAM(Hairy Meristem)亚家族是一类转录因子,对植物的生长发育和形态建成具有重要作用。利用RT-PCR和RACE技术从麻竹中得到一个HAM同源基因,命名为DlSCL6。该基因全长2 006 bp,含有5'非编码区129 bp,3'非编码区266 bp,编码区1 61... 详细信息

GRAS家族HAM(Hairy Meristem)亚家族是一类转录因子,对植物的生长发育和形态建成具有重要作用。利用RT-PCR和RACE技术从麻竹中得到一个HAM同源基因,命名为DlSCL6。该基因全长2 006 bp,含有5'非编码区129 bp,3'非编码区266 bp,编码区1 611 bp。DlSCL6蛋白具有LHRⅠ,VHIID,LHRⅡ,PFYRE,SAM 5个保守域,且与某些单子叶植物的SCL6蛋白有较高的一致性,与拟南芥有部分一致性,为43%。DlSCL6基因在大肠杆菌中表达,获得分子量约为60 kDa的重组蛋白。在拟南芥中正义表达DlSCL6基因的植株营养期延长,开花延迟,植株粗壮,莲座叶数量增加;而转反义基因的植株开花提前,植株瘦弱,且莲座叶数量明显减少。由此表明,DlSCL6基因能影响转基因植株茎端分生组织的分生状态,从而导致形态建成的变化。

关键词：麻竹转录因子拟南芥异位表达

含异位表达花生AhNCED1基因的拟南芥提高耐渗透胁迫能力

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作物学报 2010年第9期36卷 1440-1449页

作者：万小荣莫爱琼郭小建杨妙贤余土元曹锦萍仲恺农业工程学院生命科学学院广东广州510225 仲恺农业工程学院教学科研基地广东广州510225

AhNCED1是干旱胁迫下调控花生ABA生物合成的关键基因。以pCAMBIA1301为基本双元表达载体,分别构建CaMV35S启动子和拟南芥AtNCED3基因启动子(AtNCED3p)驱动花生AhNCED1基因的2个植物双元表达载体p35S::ORF和pAtNCED3p::ORF,通过根癌农杆... 详细信息

AhNCED1是干旱胁迫下调控花生ABA生物合成的关键基因。以pCAMBIA1301为基本双元表达载体,分别构建CaMV35S启动子和拟南芥AtNCED3基因启动子(AtNCED3p)驱动花生AhNCED1基因的2个植物双元表达载体p35S::ORF和pAtNCED3p::ORF,通过根癌农杆菌介导法将上述两个表达载体分别转化野生型和129B08/nced3突变体拟南芥,经潮霉素筛选和PCR鉴定分别获得35S::ORF-WT和A3p::ORF-B08转基因植株,RT-PCR证实花生AhNCED1基因已在转基因植株中稳定表达,并对野生型、129B08/nced3突变体和转基因拟南芥进行外源ABA敏感性和耐渗透胁迫能力分析。结果表明,129B08/nced3突变体对外源ABA的敏感性下降,而花生AhNCED1基因在拟南芥中的异位表达提高了对外源ABA的敏感性。在山梨醇胁迫下,129B08/nced3突变体种子的相对萌发率明显低于野生型的,而A3p::ORF-B08转基因拟南芥种子的相对萌发率与野生型的相当,显著高于129B08/nced3突变体的,且300mmolL–1山梨醇胁迫下,35S::ORF-WT转基因拟南芥种子的相对萌发率明显高于野生型的。在300mmolL–1山梨醇胁迫下,129B08/nced3突变体幼苗叶片高度黄化,根的形成和幼苗生长受到严重抑制,而A3p::ORF-B08转基因突变体与野生型相似,叶片仅轻度黄化,幼苗生长势良好;35S::ORF-WT转基因植株幼苗生长未受明显影响。这些结果说明,拟南芥129B08/nced3突变体对山梨醇诱导的非离子渗透胁迫有超敏性,异位表达花生AhNCED1基因能恢复该突变体对山梨醇的超敏性,提高拟南芥的耐渗透胁迫能力。

关键词： AhNCED1基因异位表达转基因拟南芥渗透胁迫 ABA敏感性

山楂过氧化物酶基因的克隆及在烟草中异位表达分析

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果树学报 2015年第6期32卷 1070-1076,F0004页

作者：代红艳闫玉娇李晓明李贺张志宏沈阳农业大学园艺学院沈阳110866 沈阳农业大学生物科学技术学院沈阳110866

【目的】从山楂(Crataegus pinnatifida)中克隆过氧化物酶(POD)编码基因,通过转基因验证其在木质素合成中的作用,为揭示山楂内果皮形成分子机制奠定基础。【方法】利用RT-PCR技术从山楂克隆基因,以p RI 101-AN为构建基因过量表达载体的... 详细信息

【目的】从山楂(Crataegus pinnatifida)中克隆过氧化物酶(POD)编码基因,通过转基因验证其在木质素合成中的作用,为揭示山楂内果皮形成分子机制奠定基础。【方法】利用RT-PCR技术从山楂克隆基因,以p RI 101-AN为构建基因过量表达载体的基础载体,通过农杆菌介导的遗传转化方法将目的基因导入烟草。【结果】从山楂中克隆出编码序列长度为996 bp的POD72基因,命名为Cp POD72。山楂POD72与木本和草本植物POD72的氨基酸序列一致性均较高。构建了Cp POD72基因的过量表达载体,通过农杆菌介导的转化获得了66个烟草转化植株。RT-PCR检测结果显示Cp POD72基因在烟草转基因植物中异位表达,组织化学染色分析表明转Cp POD72基因烟草植株中木质素含量增加。【结论】Cp POD72基因可能参与木质素合成。

关键词：山楂过氧化物酶基因木质素转基因烟草异位表达