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发菜细胞开放式培养技术的初步研究

发菜细胞开放式培养技术的初步研究

作者：何茜天津科技大学

学位级别：硕士

发菜是一种可食用陆生经济蓝藻，本文的主要目的是研究发菜细胞的开放式培养技术，为产业化打下基础。选育了一株可在高碱性环境下(pH大于10)良好生长的发菜细胞株BC03-3，为发菜细胞的开放式培养奠定了基础。通过中心组合设计和响应... 详细信息

发菜是一种可食用陆生经济蓝藻，本文的主要目的是研究发菜细胞的开放式培养技术，为产业化打下基础。选育了一株可在高碱性环境下(pH大于10)良好生长的发菜细胞株BC03-3，为发菜细胞的开放式培养奠定了基础。通过中心组合设计和响应面分析研究了培养基中氮源和磷源对BC03-3细胞株在高pH值下生长的影响，确定该细胞株在碱性环境下生长的最佳氮源和磷源浓度为硝酸钠2.00g／L，磷酸二氢钾0.96g／L，摇瓶培养最高产量可达0.887g／L。进行25L容积的开放式培养试验，实验证明利用所筛选的BC03-3细胞株可以在高碱性环境下成功实现发菜细胞的单种培养。研究了发菜细胞在开放式培养池内的生长情况，初步确定光照周期、液位及通气量对于发菜细胞生长的影响。对发菜细胞固态培养进行了初步研究，实验证明发菜细胞可以在固态沙粒上生长，并利用计算机视觉技术对发菜的形态图片进行数字化处理，结果表明其生长速度明显优于发菜藻体在沙粒上的生长速度。实验范围内沙粒直径＜0.44mm、光照强度为20～45μmol／m／s、添加硝酸钠为氮源有利于发菜细胞在沙粒上生长。从耐旱性及耐高温角度对固态培养的发菜细胞与液态培养的发菜细胞进行了比较，实验证明在固态基质上培养的发菜细胞比液体培养的发菜细胞具有更强的耐高温及耐干旱性。发菜细胞固态培养可以增强土壤的渗水性及持水性，培养过程中可在沙粒表层形成生物结皮，因而可能有利于土壤性质的改良。论文研究结果为实现发菜细胞的低成本大规模培养及野外种植奠定了基础。

关键词：发菜细胞培养开放式培养固态培养

辣椒花药开放式培养及不同基因型对花药培养的影响

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蔬菜 2019年第5期 27-32页

作者：杨博智周书栋董亚静刘荣云欧立军刘峰郑井元马艳青湖南省农业科学院蔬菜研究所湖南长沙410125 湖南湘研种业有限公司湖南长沙410100

为了创新花药培养方法,并用于筛选出再生频率较高的辣椒品种,通过改进花蕾灭菌和花药接种方式,以及向NTH培养基中添加抑菌剂,建立了1种辣椒花药开放式培养的方法,具体内容为:对剥去3/4花萼的花蕾灭菌时更易杀死花蕾表面细菌和内生菌;徒... 详细信息

为了创新花药培养方法,并用于筛选出再生频率较高的辣椒品种,通过改进花蕾灭菌和花药接种方式,以及向NTH培养基中添加抑菌剂,建立了1种辣椒花药开放式培养的方法,具体内容为:对剥去3/4花萼的花蕾灭菌时更易杀死花蕾表面细菌和内生菌;徒手挤压花药降低了对花药的伤害,且花蕾接种速度为镊子夹取处理的2.18倍;添加25 mg/L的氨苄青霉素和25 mg/L的两性霉素B可使花药染菌率降低至1.42%;简化了培养环节,可用于大规模胚状体诱导和双单倍体植株的获得。同时,比较了23个辣椒品种的花药培养效果,筛选到了3个再生频率高的辣椒品种,分别为博辣红牛、H15和辣八螺丝王。

关键词：辣椒花药开放式培养基因型

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辣椒花药开放式培养技术规范

辣椒杂志 2019年第1期17卷 20-21页

作者：杨博智周书栋欧立军刘峰郑井元马艳青湖南省农业科学院/湖南省蔬菜研究所

开放式组织培养指通过使用抑菌剂,使外植体脱离无菌环境进行组织培养的一种方法。辣椒花药开放培养过程中,添加抑菌剂的培养基不需要在高温高压下灭菌,接种外植体也不需要在超洁净的工作台中进行,该方法简化了培养环节,降低培养成本,可... 详细信息

开放式组织培养指通过使用抑菌剂,使外植体脱离无菌环境进行组织培养的一种方法。辣椒花药开放培养过程中,添加抑菌剂的培养基不需要在高温高压下灭菌,接种外植体也不需要在超洁净的工作台中进行,该方法简化了培养环节,降低培养成本,可用于进行大规模胚状体诱导和双单倍体植株的获得。

关键词：辣椒花药开放式培养

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蓝莓开放式无糖组培技术体系建立

上海农业学报 2024年第1期40卷 17-24页

作者：余宏傲谢志亮陈怡超李飞朱润梓江皓朱建军温州市农业科学研究院园艺研究所温州325006 台州市君临蓝莓有限公司台州317000

以蓝莓无菌试管苗为试材,采用L9(34)正交等试验方法,开展抑菌剂种类和浓度、培养液浓度与基质的比例、CO_(2)浓度等无糖培养主要技术环节研究。结果表明:(1)在基质培养液中添加清菌易8 mL∕L,基质中培养液含量80%时,可明显抑制培养基质... 详细信息

以蓝莓无菌试管苗为试材,采用L9(34)正交等试验方法,开展抑菌剂种类和浓度、培养液浓度与基质的比例、CO_(2)浓度等无糖培养主要技术环节研究。结果表明:(1)在基质培养液中添加清菌易8 mL∕L,基质中培养液含量80%时,可明显抑制培养基质污染,污染率可控制在15%以内,且蓝莓苗生长、增殖正常。(2)正交试验结果方差分析和极差分析表明,培养液中基本培养基(WPM)比例(1∕2 WPM、1∕4 WPM、1∕8 WPM)对增殖率、污染率、生根率、成苗率、根长影响差异达到极显著水平,CO_(2)浓度对增殖率、生根率、根长影响差异达到极显著水平,激素配比对蓝莓开放式培养的增殖率、生根率等影响也达到差异极显著水平。基质培养液浓度及比例对污染率、生根率等的影响达到差异显著水平。结合考虑降低污染,蓝莓无糖培养的最佳增殖培养配方是培养液为1∕4 WPM,CO_(2)浓度1000—1500μmol∕mol,珍珠岩基质中培养液含量80%,激素配比(mg∕L)ZT∶IBA为(0.5—1)∶2。(3)培养液添加方式试验表明,培养液先低后高的添加方式可降低污染率,明显提高增殖率。

关键词：蓝莓无糖培养培养条件开放式培养正交试验

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激素对开放式无糖培养的碧玉生长的影响

科技风 2017年第26期 31-31,33页

作者：王梓桐林海王兴通高立宏长春市十一高中吉林长春130000 长春师范大学吉林长春130000

碧玉是具有一定药用价值的植物,以往经常通过常规的植物组织培养来培育,由于组织培养严格要求无菌,操作严格,稍有不慎就会出现污染,影响了碧玉的产量,新的研究表明开放式无糖组培快繁技术可以解决组织培养的条件限制。本实验以碧玉为培... 详细信息

碧玉是具有一定药用价值的植物,以往经常通过常规的植物组织培养来培育,由于组织培养严格要求无菌,操作严格,稍有不慎就会出现污染,影响了碧玉的产量,新的研究表明开放式无糖组培快繁技术可以解决组织培养的条件限制。本实验以碧玉为培养材料,设计了不同的激素浓度配比,研究了激素对开放式无糖培养中对碧玉生长的影响。研究结果表明:配置NAA浓度为0.5mg·L^(-1)且不添加6-BA时,碧玉的生根最明显;6-BA浓度为2mg·L^(-1)时碧玉的长芽最明显;6-BA浓度在0.5mg·L^(-1)时,碧玉的生根和长芽均生长良好。

关键词： !激素碧玉开放式培养

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开放式人才培养模式在中高职衔接中的应用

教育界（高等教育） 2014年第2期 142-142页

作者：徐波宁波卫生职业技术学院

当前我国的职业教育处在空前的繁荣阶段，对于职业学校培养学生的模式和职业教育的可持续发展也随之提出了更高的要求。本篇文章以开放式的人才培养模式对“3＋2”形式的中高职一体化教学中的实际运用为内容展开讨论，明确开放式培养这... 详细信息

当前我国的职业教育处在空前的繁荣阶段，对于职业学校培养学生的模式和职业教育的可持续发展也随之提出了更高的要求。本篇文章以开放式的人才培养模式对“3＋2”形式的中高职一体化教学中的实际运用为内容展开讨论，明确开放式培养这种教育方式对中高职教育衔接的重要性。

关键词：开放式培养中高职一体化实际应用

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发状念珠藻不同培养方式及多糖分离纯化研究

发状念珠藻不同培养方式及多糖分离纯化研究

作者：郭伟天津科技大学

学位级别：硕士

本文利用不同光生物反应器对发状念珠藻进行开放式、封闭式和循环式培养,研究了不同培养条件对发状念珠藻生长和胞外多糖产量的影响;并对发状念珠藻混合营养培养、自养培养和异养培养三种培养模式下所产生的发菜多糖进行分离纯化。主要... 详细信息

本文利用不同光生物反应器对发状念珠藻进行开放式、封闭式和循环式培养,研究了不同培养条件对发状念珠藻生长和胞外多糖产量的影响;并对发状念珠藻混合营养培养、自养培养和异养培养三种培养模式下所产生的发菜多糖进行分离纯化。主要研究结果如下： (1)设计利用5L光生物反应器对发状念珠藻进行了开放式和封闭式培养。在光照强度10-60μmol·m-2s-1范围内,发状念珠藻生物量和胞外多糖产量均随着光照强度增加而提高,而且连续光照更有利于发状念珠藻细胞的生长和多糖累积。在pH9.0,通气量0.7vvm,光照强度60μmol·m-2s-1,培养温度25℃,24h全光照条件下进行封闭式培养,所得生物量和多糖产量最高,生物量和多糖产量分别为1.7g·L-1和89.32mg·L-1。 (2)利用25L开放式培养池对发状念珠藻进行了开放式培养。结果证明,逐步提高光强和阶段性流加新鲜培养基更有利于发状念珠藻细胞的生长和胞外多糖的产生。 (3)利用20L光生物反应器对发状念珠藻进行循环培养研究。发状念珠藻生物量和叶绿素a含量随着培养次数的增加而呈现下降趋势,最高分别为1.608g·L-1和9.74μg·mL-1,而胞外多糖产量则以第二次培养最高,158.75mg·L-1,比第一次培养多糖产量提高约24.3%。第三次培养过程中细胞由于营养元素严重缺乏而出现了黄化现象。对于缺乏营养盐的培养基补加营养盐,培养结束后生物量和生长速率分别为1.478g·L-1和0.048d-1,胞外多糖为135.57mg-L-1。结果表明,补加营养元素可以使生物量和胞外多糖产量能保持一个较高水平。 (4)利用离子交换层析(DEAE-Sephrose CL-6B)和凝胶层析(Sephadex G200)对不同培养模式下的发菜多糖进行了分离纯化。离子交换层析结果表明：混养多糖和自养多糖均由一种多糖组分组成,而异养多糖则由两种多糖组分组成。凝胶层析后所有多糖均为单一的洗脱峰,且出峰范围基本相同,表明发状念珠藻不同培养模式下提取的发菜多糖的分子量非常接近。

关键词：发状念珠藻光生物反应器开放式培养循环培养发菜多糖

三株优良藻株的分离鉴定、培养条件改造及PEPC酶的初步研究

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三株优良藻株的分离鉴定、培养条件改造及PEPC酶的初步研究

作者：侯余勇内蒙古科技大学

学位级别：硕士

微藻是能够利用光能进行光合作用的微生物，它能吸收CO合成自身生长所需要的物质，普遍具有生长周期短、易培养、生物量高等特点，而且许多微藻含油量高、还富含虾青素等次级代谢产物。所以在能源领域，微藻生物柴油被视为可替代化石燃... 详细信息

微藻是能够利用光能进行光合作用的微生物，它能吸收CO合成自身生长所需要的物质，普遍具有生长周期短、易培养、生物量高等特点，而且许多微藻含油量高、还富含虾青素等次级代谢产物。所以在能源领域，微藻生物柴油被视为可替代化石燃料的新能源;在医疗保健领域，从藻细胞内提取多不饱和脂肪酸及高附加值色素等已成为开发热点。因而，微藻产业被世界广泛关注、研究。本文通过对内蒙古乌梁素海淡水水体及天津塘沽东疆港海水水体进行大量筛选，获得三株优势藻株，并对其进行评价、培养条件改造以及分子生物学鉴定，并对微拟球藻油脂代谢过程中关键酶PEPC进行初步研究，主要研究结果如下： 1、成功筛选得到三株优势藻株XJ307、XJ308、XJ309，其生物量分别为细胞干重1.2g/L、0.86g/L、0.48g/L，含油量分别为50.3%、34.6%和40.5%。XJ307藻株为淡水藻株，含高附加值多不饱和脂肪酸AA和EPA，含量分别占总油脂的0.52%和5.12%，XJ308为产虾青素海水藻株，虾青素含量为0.43%细胞干重，XJ309为海水藻株，脂肪酸成分主要以C16和C18系为主，极少含长链脂肪酸组分。三株藻种性状均适合作为制备生物柴油原料。 2、通过光学显微镜及电镜观察形态，XJ307为单细胞微藻，中部膨大，末端较尖，两个色素体对称分布;XJ308、XJ309以单细胞形式存在，为球形藻，细胞为绿色，无鞭毛;其中XJ308在前期培养藻细胞为绿色，在后期受胁迫后藻细胞逐渐变红，叶绿体片层明显。利用18S rDNA在进化上的保守性，对XJ307、XJ308和XJ309进行18S rDNA序列扩增，通过测序后构建进化树分析，命名XJ307为菱形藻属，Nitzschia sp. XJ307;XJ308为栅藻属，Scenedesmus sp. XJ308;XJ309为绿藻属，Chlorococcum sp. XJ309。 3、柱式培养条件下，以f/2培养基为基础，对XJ308、XJ309进行氮源浓度改造。NaNO浓度为0.6g/L时，藻株XJ308可实现资源开发最大化，油脂产率为100.27mg/L/day，虾青素产量为19.61mg/L。NaNO浓度为0.1g/L时，XJ309油脂产率最大达22.74mg/L/day。开放式培养150L跑道池培养条件下，f/2作培养基，XJ309生物量低。改造NaNO初始浓度为750mg/L的海水BG11作为培养基，XJ309生物量最高达到2g/L，油脂含量经积累可达25.43%，产率可达到干重达到21.68g/m2/day。并构建了基于开放式跑道池光照强度、温度及NaNO消耗与微藻生长之间的数学模型，在一定程度上揭示了微藻生长与光照强度、温度及NaNO消耗之间的内在关系。 4、利用尼罗红快速检测油脂含量，在不同NaNO浓度条件下测得油脂含量明显差异时，提取测定PEPC酶活。微拟球藻在NaNO浓度30mg/L时，油脂含量为1306.9mg/L，PEPC酶活为13.73U/mL;75mg/L条件下油脂含量为1182.0mg/L，PEPC酶活为14.91U/ml，高浓度150mg/L时，油脂含量为540mg/L，PEPC酶活为29.77U/ml。PEPC酶活高，减少了C源流向油脂合成，而导致油脂含量下降。通过对筛选获得的三株优势藻株的研究评价，可为微藻规模化生产生物柴油、提取多不饱和脂肪酸(PUFAs)和高附加值色素等薇藻综合化产业应用奠定基础。

关键词：富油微藻分子鉴定脂肪酸成分虾青素开放式培养 PEPC酶活

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公安院校信息安全人才培养模式研究与实践

现代职业教育 2018年第10期 38-39页

作者：谷学汇铁道警察学院图像与网络侦查系

针对信息安全人才培养需求,结合公安院校的培养理念,提出了标准化和开放式培养方法;以服务实战应用为主线,构建了基础理论+综合实训+实战演练的培养模式,通过实验实训、实战训练锻炼学生发现、分析、解决问题的能力,提高学生的自主学习... 详细信息

针对信息安全人才培养需求,结合公安院校的培养理念,提出了标准化和开放式培养方法;以服务实战应用为主线,构建了基础理论+综合实训+实战演练的培养模式,通过实验实训、实战训练锻炼学生发现、分析、解决问题的能力,提高学生的自主学习能力,为公安部门培育优秀的信息安全人才奠定理论、实践基础。

关键词：信息安全开放式培养实战训练