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建中补肾消癥汤对UUO小鼠肾间质纤维化细胞凋亡的保护作用研究

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时珍国医国药 2023年第12期34卷 2864-2870页

作者：李昭欣张诏张文毅马超宇高聪聪刘旭山东中医药大学中医学院山东济南250355

目的通过细胞凋亡途径探讨建中补肾消癥汤对单侧输尿管梗阻(UUO)小鼠肾间质纤维化(RIF)的作用机制。方法采用UUO小鼠模型,以建中补肾消癥汤不同剂量干预、尿毒清颗粒阳性药对照,造模后第3天开始灌胃,于造模后的第14、21、28天每组随机抽... 详细信息

目的通过细胞凋亡途径探讨建中补肾消癥汤对单侧输尿管梗阻(UUO)小鼠肾间质纤维化(RIF)的作用机制。方法采用UUO小鼠模型,以建中补肾消癥汤不同剂量干预、尿毒清颗粒阳性药对照,造模后第3天开始灌胃,于造模后的第14、21、28天每组随机抽取5只进行取材。采用全自动生化分析仪进行小鼠血清Scr、BUN检测,HE染色观察小鼠肾组织病理形态变化,TUNEL染色观察小鼠肾小管上皮细胞(RTECs)凋亡情况,Western blot和RT-PCR检测小鼠梗阻侧肾组织中Bcl-2、Bax和Apaf-1的表达情况。结果与同时期UUO模型组相比,在第28天各治疗组均能够明显降低UUO小鼠Scr、BUN浓度(P建中补肾消癥汤能够改善UUO小鼠肾脏组织纤维化程度;TUNEL染色显示,在第28天,中药高、中剂量和尿毒清组RTECs凋亡数量均显著减少(P建中补肾消癥汤可能通过下调Bax、Apaf-1表达,上调Bcl-2表达起到抑制细胞凋亡的作用,从而抑制RIF进展,保护肾功能,防止其恶化,达到治疗慢性肾脏病的作用。

关键词：肾间质纤维化细胞凋亡线粒体凋亡途径建中补肾消癥汤实验研究

建中补肾消癥汤调控MMP-9/TIMP-1动态平衡干预UUO小鼠肾间质纤维化的机制研究

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建中补肾消癥汤调控MMP-9/TIMP-1动态平衡干预UUO小鼠肾间质纤维...

作者：张文毅山东中医药大学

学位级别：硕士

目的:研究建中补肾消癥汤调控基质金属蛋白酶-9/基质金属蛋白酶抑制剂-1(MMP-9/TIMP-1)的动态平衡降低单侧输尿管结扎(UUO)模型小鼠中细胞外基质(ECM)对抗肾间质纤维化(RIF)的过程,明确本方的作用机制和建中补肾法的作用机理,进一步确... 详细信息

目的:研究建中补肾消癥汤调控基质金属蛋白酶-9/基质金属蛋白酶抑制剂-1(MMP-9/TIMP-1)的动态平衡降低单侧输尿管结扎(UUO)模型小鼠中细胞外基质(ECM)对抗肾间质纤维化(RIF)的过程,明确本方的作用机制和建中补肾法的作用机理,进一步确定建中补肾消癥汤对RIF的有效性和安全性,并为临床提供科学依据和治疗思路。方法:将120只小鼠随机分为假手术组(sham组),UUO模型组,尿毒清组,建中补肾消癥汤高、中、低剂量组,采用UUO动物模型。造模术后3d开始灌胃给药,UUO模型组和sham组每天给予等量蒸馏水灌胃,建中补肾消癥汤低、中、高剂量组分别按6、12、24 g·kg·d给予建中补肾消癥汤水溶液灌胃,尿毒清组予6.2g·kg·d给予尿毒清颗粒水溶液灌胃,观察14、21、28 d后小鼠的形态变化,观察小鼠一般体征及梗阻治疗后的各项指标。给药结束后取材,苏木精-伊红染色法(HE染色)观察小鼠肾组织病理变化;全自动生化仪检测小鼠血清中血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)含量;酶联免疫吸附测定法(ELISA法)检测小鼠血清中MMP-9、TIMP-1、Ⅳ型胶原(Col-Ⅳ)的表达。结果:1.小鼠一般体征情况经过造模,各用药组和UUO组小鼠皮色黯淡、体态神态懒倦、反应不灵敏、甚至出现不同程度的肢体水肿等较为符合CRF特征。用药后(尿毒清、建中补肾消癥汤各剂量组),上述症状均有不同程度的改善,如毛色逐渐整洁光泽,体质量稍有增加,体态灵活,反应迅速,跗肿程度降低等,无其它明显不良反应。2.小鼠肾组织病理染色结果sham组肾小管上皮细胞排列紧密,细胞大小正常,核仁清晰,肾小管结构完整,数量丰富。UUO组肾组织结构出现异常,并随着梗阻时间的增加,出现肾小管扩张、炎性细胞浸润、肾小管上皮细胞空泡变性,RIF出现。各治疗组肾组织损伤程度较UUO组均有所减轻,且经建中补肾消癥汤干预后,中药各剂量组呈剂量依赖性减轻细胞水肿状态及RIF程度。3.小鼠肾功能生化指标检测结果与sham组相比,UUO组Scr与BUN分别于14d、21d、28d皆明显升高(P0.05)。4.小鼠血清中MMP-9、TIMP-1、Col-Ⅳ检测结果与sham组的表达比较,UUO组MMP-9蛋白含量下降明显(P0.05)。TIMP-1的含量同期UUO组较sham组皆显著升高(P0.05)。UUO组中Col-Ⅳ结果较sham组三个时期皆上升明显(P0.05)。结论:建中补肾消癥汤对UUO模型小鼠RIF和肾组织具有较好的改善作用,其作用机制可能与通过建中补肾消癥汤上调MMP-9,下调TIMP-1表达,恢复MMP-9/TIMP-1间的稳态平衡来促进Col-Ⅳ降解,减少ECM沉积的合成有关,该研究为临床建中补肾消癥汤治疗CRF提供了实验依据。

关键词：虚劳建中金匮要略 MMP-9/TIMP-1 Col-Ⅳ 建中补肾消癥汤

建中补肾消癥汤治疗肾间质纤维化及其对Wnt/β-catenin通路的影响研究

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时珍国医国药 2021年第6期32卷 1308-1312页

作者：刘武丁宁李子腾姜赫张诏中国中医科学院望京医院北京100020 高密市中医院山东潍坊261500 山东中医药大学针灸推拿学院济南250355 山东中医药大学中医学院济南250355

目的观察建中补肾消癥汤对肾间质纤维化中Wnt/β-catenin通路的影响。方法将120只小鼠随机分为假手术组,模型组,建中补肾消癥汤低剂量组、中剂量组、高剂量组,尿毒清组,采用单侧输尿管梗阻动物模型,观察14d、21d、28d后小鼠的形态变化,... 详细信息

目的观察建中补肾消癥汤对肾间质纤维化中Wnt/β-catenin通路的影响。方法将120只小鼠随机分为假手术组,模型组,建中补肾消癥汤低剂量组、中剂量组、高剂量组,尿毒清组,采用单侧输尿管梗阻动物模型,观察14d、21d、28d后小鼠的形态变化,检测其血清肌酐、尿素氮水平,并检测梗阻侧肾组织中β-catenin、PAI-1、MMP7蛋白的表达。结果14、21、28d后模型组小鼠血清肌酐、尿素氮、β-catenin、PAI-1蛋白表达均高于假手术组(P建中补肾消癥汤高剂量组的疗效优于其他剂量及尿毒清组(P建中补肾消癥汤可能是通过调控Wnt/β-catenin通路以介导肾间质纤维化进程,延缓肾间质纤维化的发展以改善肾功能。

关键词：肾间质纤维化 Wnt/β-catenin信号通路建中补肾消癥汤实验研究

miRNA-139调控Wnt/β-catenin信号通路探讨建中补肾消癥汤抗肾间质纤维化机制

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中国实验方剂学杂志 2021年第4期27卷 47-55页

作者：刘武丁宁姜赫李子腾张诏山东中医药大学中医学院济南250355 山东中医药大学针灸推拿学院济南250355

目的:探讨建中补肾消癥汤在调控miRNA-139作用于Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路以调节肾间质纤维化的作用机制。方法:将120只小鼠随机分为假手术组,UUO组,建中补肾消癥汤低、中、高剂量组,尿毒清组,采用单侧输尿管梗阻(UUO)动物... 详细信息

目的:探讨建中补肾消癥汤在调控miRNA-139作用于Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路以调节肾间质纤维化的作用机制。方法:将120只小鼠随机分为假手术组,UUO组,建中补肾消癥汤低、中、高剂量组,尿毒清组,采用单侧输尿管梗阻(UUO)动物模型。造模术后3 d开始灌胃给药,假手术组,UUO组每天予以等量蒸馏水灌胃,建中补肾消癥汤低、中、高剂量组分别按6,12,24 g·kg^(-1)·d^(-1)给予建中补肾消癥汤水溶液灌胃,尿素清组予6.2 g·kg^(-1)·d^(-1)给予尿毒清颗粒水溶液灌胃,观察14,21,28 d后小鼠的形态变化,观察小鼠一般体征及梗阻侧肾间质纤维化指数,采用苏木素-伊红(HE)染色及马松(Masson)染色观察肾组织病理形态变化,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测梗阻侧肾组织中miRNA-139的表达量,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测梗阻侧肾组织中β-catenin,纤溶酶原激活物抑制剂-1(PAI-1)的蛋白表达,免疫组化检测梗阻侧肾组织中基质金属蛋白酶-7(MMP-7)蛋白的表达。结果:14,21,28 d后,与假手术组比较,UUO组小鼠β-catenin,PAI-1蛋白表达升高(P建中补肾消癥汤高剂量组的疗效优于其他剂量及尿毒清组(P建中补肾消癥汤可能通过对miRNA-139的干预作用,调控Wnt/β-catenin通路起到抗肾纤维作用,达到保护肾功能,延缓慢性肾脏病(CKD)进展的效果。

关键词： miRNA-139 Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路肾间质纤维化建中补肾消癥汤实验研究

自拟建中补肾消癥汤联合达格列净对糖尿病肾病患者肾纤维化及肾上腺髓质素表达的影响

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疑难病杂志 2022年第3期21卷 277-281页

作者：姜赫刘武陈皓张诏山东中医药大学中医学院 250014 中国中医科学院望京医院 100102

目的探讨自拟建中补肾消癥汤联合达格列净对糖尿病肾病患者肾纤维化及肾上腺髓质素表达的影响。方法选取2019年9月—2021年6月在中国中医科学院望京医院就诊的糖尿病肾病患者86例,根据随机数字表法分为对照组、观察组,各43例,对照组给... 详细信息

目的探讨自拟建中补肾消癥汤联合达格列净对糖尿病肾病患者肾纤维化及肾上腺髓质素表达的影响。方法选取2019年9月—2021年6月在中国中医科学院望京医院就诊的糖尿病肾病患者86例,根据随机数字表法分为对照组、观察组,各43例,对照组给予达格列净等西药常规治疗,观察组在对照组基础上给予自拟建中补肾消癥汤治疗。治疗2个月后,观察2组临床疗效,治疗前后的中医证候评分(肢体浮肿、神疲乏力、口渴多饮、腰膝酸痛、纳减便溏、皮肤瘀斑、脘腹胀满),肾功能指标[血肌酐(SCr)、血尿素氮(BUN)、内生肌酐清除率(CCr)、24 h尿蛋白定量],血糖水平[空腹血糖(FPG)、糖化血红蛋白(HbA_(1c))],肾纤维化指标[血清Ⅲ型前胶原(PCⅢ)、层黏蛋白(LN)、骨形态发生蛋白-7(BMP-7)]及肾上腺髓质素(ADM)表达水平。结果观察组治疗后总有效率高于对照组(88.37%vs.62.79%,χ^(2)=8.495,P建中补肾消癥汤联合达格列净治疗糖尿病肾病患者临床疗效显著,可改善患者肾纤维化过程,促进ADM表达,提高患者肾功能。

关键词：糖尿病肾病肾纤维化建中补肾消癥汤达格列净纤维化指标肾上腺髓质素治疗疗效

基于MiRNA139调控Wnt/β-catenin通路探讨建中补肾消癥汤治疗慢性肾衰竭的临床及实验研究

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基于MiRNA139调控Wnt/β-catenin通路探讨建中补肾消癥汤治疗慢性...

作者：刘武山东中医药大学

学位级别：硕士

目的:通过临床病例收集,观察建中补肾消癥汤对慢性肾衰竭脾肾气虚兼瘀浊证患者的临床疗效和安全性评价,并通过实验研究,探讨建中补肾消癥汤基于mi RNA139调控wnt/β-catenin通路对UUO模型小鼠肾间质纤维化的干预作用及其作用机制,为临... 详细信息

目的:通过临床病例收集,观察建中补肾消癥汤对慢性肾衰竭脾肾气虚兼瘀浊证患者的临床疗效和安全性评价,并通过实验研究,探讨建中补肾消癥汤基于mi RNA139调控wnt/β-catenin通路对UUO模型小鼠肾间质纤维化的干预作用及其作用机制,为临床应用中医药延缓慢性肾衰竭进程提供进一步的诊疗思路。方法:(1)临床研究:将符合纳入标准和排除标准的60例临床病例随机分为对照组和试验组各30例,对照组给予西医对症治疗,试验组在西医治疗的基础上,予以建中补肾消癥汤加减中药治疗,两组观察疗程均为8周。观察两组治疗前、治疗4周后、治疗8周后的血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)、尿酸(UA)、肾小球滤过率(e GFR)、血红蛋白(Hb)、血清白蛋白(ALB)、尿蛋白/肌酐比,以及中医症候积分和总疗效的变化。(2)实验研究:将120只小鼠随机分为假手术组、UUO组、建中补肾消癥汤低剂量组、中剂量组、高剂量组、尿毒清组,采用单侧输尿管梗阻(UUO)动物模型。造模术后3d开始灌胃给药,假手术组、UUO组每天予以等量蒸馏水灌胃,低剂量、中剂量、高剂量组分别按6g/kg/d、12 g/kg/d、24g/kg/d给予建中补肾消癥汤水溶液灌胃,尿毒清组予6.2g/kg/d给予尿毒清颗粒水溶液灌胃,观察14d、21d、28d后小鼠的肾脏病理改变,观察小鼠一般体征及梗阻侧肾间质纤维化指数,采用苏木素-伊红(HE)染色及马松(Masson)染色观察肾组织病理形态变化,实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)检测梗阻侧肾组织中mi RNA-139的表达量,蛋白免疫印迹法(western blot)检测梗阻侧肾组织中β-连环蛋白(β-catenin)、纤溶酶原激活物抑制剂-1(PAI-1)的表达量,免疫组化检测梗阻侧肾组织中基质金属蛋白酶-7(MMP7)蛋白的表达量。结果:(1)临床研究:试验组在降低Scr、BUN,升高e GFR,降低尿蛋白/肌酐比,以及改善中医症候积分方面与对照组相比有优势(P0.05);试验组与对照组均能够改善CKD患者总疗效,但试验组在改善CKD疗效方面较对照组有优势(P建中补肾消癥汤在改善肾功能,减轻临床症状方面疗效优于对照组,但在改善Hb、ALB、UA方面与对照组疗效相近。(2)实验研究:(1)与UUO组比较,建中补肾消癥汤可以改善小鼠饮食、体重等一般情况,增强脾胃功能。(2)UUO组小鼠Scr、BUN水平明显高于假手术组,有统计学差异(P建中补肾消癥汤高剂量组在造模各时期改善小鼠Scr、BUN水平方面优于其他各组,有统计学差异(P建中补肾消癥汤对于慢性肾衰竭患者,应用建中补肾,消癥化浊法治疗,在改善患者临床症状,提高中医疗效,改善患者实验室指标,保护肾功能,提高患者生存质量方面效果明显,并且安全可靠。(2)建中补肾消癥汤能够升高mi RNA139及MMP7的表达,抑制β-catenin与PAI-1的表达从而调控Wnt/β-catenin信号通路,以延缓肾

关键词：慢性肾衰竭肾间质纤维化 miRNA139 Wnt/β-catenin信号通路建中补肾消癥汤