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异氟烷对成龄和老龄大鼠海马蛋白质组延迟相的差异性影响

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中南大学学报（医学版） 2009年第7期34卷 589-594页

作者：段开明欧阳文陈满红夏月峰汪赛赢中南大学湘雅三医院麻醉科长沙410013

目的:应用双向凝胶蛋白电泳和质谱分析技术筛选和鉴定异氟烷麻醉对老龄和成龄大鼠海马蛋白质组的延迟相影响。方法:将10只8月龄SD大鼠随机分为Cadult组和Iadult组(n=5),10只22月龄SD大鼠随机分为Caged组和Iaged组(n=5)。Cadult和Caged... 详细信息

目的:应用双向凝胶蛋白电泳和质谱分析技术筛选和鉴定异氟烷麻醉对老龄和成龄大鼠海马蛋白质组的延迟相影响。方法:将10只8月龄SD大鼠随机分为Cadult组和Iadult组(n=5),10只22月龄SD大鼠随机分为Caged组和Iaged组(n=5)。Cadult和Caged组吸入含40%氧气的空气和氧气混合气体2h;Iadult和Iaged组以3%异氟烷和40%氧气吸入诱导,随后以1.2%异氟烷和40%氧气维持全身麻醉2h。于吸氧对照或麻醉结束后24h取海马组织行双向凝胶电泳和质谱分析以鉴定差异蛋白点。结果:Iadult组和Iaged组大鼠麻醉过程中生命体征平稳。获得了较满意的双向凝胶电泳胶图,图像分析结果显示,Cadult和Iadult组合成胶蛋白质点分别为878±34和864±49;Caged组和Iaged组合成胶蛋白质点分别为834±47和819±24。Iadult组和Cadult组差异蛋白质点共有12(4/8)个;Iaged组和Caged组差异蛋白质点共有11个(3/8)。质谱分析显示,这些蛋白质分别属于代谢相关蛋白质、抗氧化蛋白质以及调节蛋白质。结论:异氟烷麻醉可以引起大鼠海马蛋白质组延迟相变化,并且这些变化具有年龄差异性。

关键词：异氟烷海马延迟相蛋白质组老龄大鼠

腺苷A1受体激动剂预处理兔延迟相心肌蛋白质组学分析

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中南大学学报（医学版） 2011年第10期36卷 999-1002页

作者：周建美邹定全冉珂常业恬中南大学湘雅二医院麻醉科长沙410011 中南大学麻醉医学研究所长沙410011

目的:研究腺苷A1受体激动剂2-氯环戊腺苷(2-chloro-N6-cyclopentyladenosine,CCPA)预处理延迟相缺血再灌注心肌保护的蛋白质表达谱的变化。方法:8只新西兰大白兔随机分为CCPA预处理组(CC-PA组)和生理盐水预处理组(NS组)。CCPA组用100μg... 详细信息

目的:研究腺苷A1受体激动剂2-氯环戊腺苷(2-chloro-N6-cyclopentyladenosine,CCPA)预处理延迟相缺血再灌注心肌保护的蛋白质表达谱的变化。方法:8只新西兰大白兔随机分为CCPA预处理组(CC-PA组)和生理盐水预处理组(NS组)。CCPA组用100μg/kg CCPA预处理大白兔,NS组用生理盐水预处理。24 h后冠状动脉左前降支行30 min缺血/2 h再灌注,然后取左心室缺血区心肌组织进行蛋白质组学研究。另取12只新西兰大白兔随机分为假手术组(Sham组)、生理盐水预处理组(NS组)和CCPA预处理组(CCPA组),每组4只,用Western印迹验证差异蛋白αB-晶状体蛋白的表达。结果:双向凝胶电泳分析发现2组表达明显差异的蛋白点有55个。其中17个差异蛋白质点用基质辅助激光解吸-电离飞行时间质谱技术以及Mas-cot和Expasy软件分析,初步鉴定出17个蛋白质。这些蛋白质包括应激反应蛋白、代谢相关蛋白、信号调节蛋白、离子通道蛋白、免疫相关蛋白等。Western印迹证实αB-晶状体蛋白在CCPA组中的表达明显上调。结论:CCPA预处理延迟相缺血再灌注心肌组织的蛋白质表达谱发生改变,这些蛋白质可能与腺苷A1受体激动剂预处理延迟相缺血再灌注心肌保护作用有关。

关键词：腺苷A1受体激动剂 2-氯环戊腺苷预处理延迟相心肌保护蛋白质组

腺苷A2A受体激动剂预处理对延迟相大鼠移植肝缺血再灌注损伤保护作用机制研究

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腺苷A2A受体激动剂预处理对延迟相大鼠移植肝缺血再灌注损伤保护...

作者：吴林熹昆明医学院

学位级别：硕士

背景 1963年Starzl施行首例临床肝移植手术,但患者因术中出血过多而死亡;1983年美国国立卫生机构正式宣布肝移植是终末期肝脏疾病的有效治疗方法,应予以推广;此后20多年肝移植得以迅猛发展。然而,同其它大器官移植一样,供肝离体后的缺... 详细信息

背景 1963年Starzl施行首例临床肝移植手术,但患者因术中出血过多而死亡;1983年美国国立卫生机构正式宣布肝移植是终末期肝脏疾病的有效治疗方法,应予以推广;此后20多年肝移植得以迅猛发展。然而,同其它大器官移植一样,供肝离体后的缺血再灌注损伤(ischemia/reperfusion,I/R)常导致移植术后原发性移植物无功能(primary graftnonfunction,PNF),是困扰肝脏移植外科发展的一大重症,被认为是肝移植失败的主要原因;即使是常规的肝叶切除术和严重肝创伤的处理,如需施行肝血流阻断也必使肝脏经历缺血再灌注损伤。因此,如何有效防治肝脏缺血再灌注损伤对于肝胆外科发展具有重要意义,也一直是研究的热点。近年来兴起的缺血预处理与药物预处理展示了强有力的肝脏保护作用,成为两种有前途的防治新方法;相比较而言,药物预处理的安全阈大,无需其它特殊仪器设备,操作简单,更便于临床推广和应用。研究表明,缺血预处理存在双时相性:早期阶段和晚期阶段;由于晚期阶段的延迟性保护作用持续时间长,作用范围广,故更具临床应用价值。因此寻找具有延迟性保护作用的最佳药物对即将经历缺血再灌注的肝脏进行预处理,将成为未来预处理领域的研究热点。腺苷(adenosine)是一种遍布人体细胞的内源性核苷,腺苷受体(adenosine receptor,AR)是一种与G蛋白耦联的糖蛋白,分成4种亚型:A、A、A和A,腺苷主要通过其受体与包括cAMP和Ca在内的第二信使相偶联,在细胞的信号传导网络中发挥关键作用。近来越来越多的研究表明:腺苷A受体(Adenosine receptor,AR)是介导缺血预处理和某些药物预处理热缺血再灌注损伤保护作用的最关键受体;目前对AR介导的肝脏缺血再灌注损伤保护作用的研究,多局限于肝脏热缺血再灌注损伤和预处理后的早期阶段(预处理后12小时内)。AR是否对肝脏移植冷缺血再灌注损伤具有保护作用,且是否对肝脏移植冷缺血再灌注损伤具有晚期延迟性(预处理后24小时-72小时)保护作用还不清楚。目的通过建立大鼠同种异体原位肝移植冷缺血再灌注损伤模型,研究应用AR激动剂预处理是否对大鼠移植肝脏冷缺血再灌注损伤具有延迟性保护作用;并探讨其可能的作用机制,为临床防治肝移植缺血再灌注损伤提供一种新的可能的方法。材料与方法 1.动物分组:清洁级健康成年雄性SD大鼠56只,体重200-250g,被随机分为四组,①Sham组:开腹后仅游离肝周韧带;②CGS组:获取供肝24小时前经耳缘静脉注射100μg/kg的选择性AR激动动剂CGS21680(总体积1ml);③CGS+ZM组:获取供肝24小时前供体大鼠在给予上述剂量CGS21680的同时,经耳缘静脉注射100μg/kg的AR的特异性抑制剂ZM241385;④缺血再灌注损伤组(I/R组):获取供肝24小时前经耳缘静脉给予与实验组相同体积和速度的生理盐水。各组供体大鼠都是预处理24小时后开始手术,获取供肝后均置于0-4℃的UW液中冷保存60min,门静脉复流6h后取标本。从预处理到获取标本共经历33h左右(预处理24h后开始手术,肝脏冷保存时间1h,再灌注6h后取标本,供体受体手术时间2h左右)。 2.模型的建立:在Kamada的二袖套法大鼠肝移植模型的基础上对其进行适当改良,建立改良的大鼠肝移植模型。 3.指标检测:门静脉复流6h后取标本:检测血清ALT和AST评价肝功能;检测血浆细胞因子TNF-α、IL-6、IL-10等的变化;检测肝脏组织MDA含量和SOD、MPO等酶活性的变化;RT-PCR检测肝脏组织中Bcl-2 mRNA和Caspase-3 mRNA的表达;流式细胞仪检测肝脏组织细胞凋亡坏死情况;组织病理观察肝脏组织细胞损伤程度。结果 ***组大鼠肝脏血清ALT、AST明显低于I/R组和CGS+ZM组(P＜0.01),I/R组与CGS+ZM组间差异无统计学意义。 ***组大鼠血浆细胞因子TNF-a、IL-6的含量较I/R组和CGS+ZM组明显降低(P＜0.01),而CGS组大鼠血浆细胞因子IL-10的含量明显高于I/R组与CGS+ZM组(P＜0.01);I/R组与CGS+ZM组间差异无统计学意义。 ***组大鼠肝脏组织SOD的活性明显高于I/R组和CGS+ZM组(P＜0.01),而CGS组大鼠肝脏组织MPO的活性较I/R组和CGS+ZM组明显降低(P＜0.01);I/R组与CGS+ZM组间差异无统计学意义。 ***组大鼠肝脏组织MDA的含量明显低于I/R组和CGS+ZM组(P＜0.01),I/R组与CGS+ZM组间差异无统计学意义。 5.流式细胞仪检测肝脏组织细胞凋亡坏死显示:CGS组大鼠肝脏组织细胞凋亡率/坏死率明显低于I/R组和CGS+ZM组(P＜0

关键词：腺苷 A2A受体 CGS21680 预处理延迟相缺血再灌注损伤肝移植大鼠

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心肌缺血预适应延迟相的研究进展

心血管病学进展 2005年第5期26卷 526-529页

作者：李春梅张兴华山东大学山东省立医院心内科山东济南250021

心肌缺血预适应(ischemic preconditioning,IPC)现象的发现,为心肌缺血再灌注损伤的预防开拓了一个新的研究领域.IPC分为快速相和延迟相,快速相IPC对心脏具有显著的保护作用,但这种保护作用在IPC后1～2 h即消失.延迟相IPC在IPC后24 h出... 详细信息

心肌缺血预适应(ischemic preconditioning,IPC)现象的发现,为心肌缺血再灌注损伤的预防开拓了一个新的研究领域.IPC分为快速相和延迟相,快速相IPC对心脏具有显著的保护作用,但这种保护作用在IPC后1～2 h即消失.延迟相IPC在IPC后24 h出现,心脏保护持续时间长,保护范围广.现对IPC延迟相的机制进展作一简要综述.

关键词：缺血预适应心肌缺血延迟相

无创肢体缺血预处理快速相与延迟相叠加对大鼠皮瓣缺血再灌注损伤的影响

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中国当代医药 2014年第31期21卷 9-11,14页

作者：陈江湖郑晓春李荣钢涂文劭福建省立医院麻醉科福州350001

目的：探讨无创肢体缺血预处理快速相与延迟相叠加对大鼠皮瓣缺血再灌注（IR）损伤的影响。方法选择200～300 g健康雄性SD大鼠48只，将其随机分成单纯IR组、快速相（EPC）组、延迟相（DPC）组、EPC与DPC叠加（EDPC）组，每组各12只。通... 详细信息

目的：探讨无创肢体缺血预处理快速相与延迟相叠加对大鼠皮瓣缺血再灌注（IR）损伤的影响。方法选择200～300 g健康雄性SD大鼠48只，将其随机分成单纯IR组、快速相（EPC）组、延迟相（DPC）组、EPC与DPC叠加（EDPC）组，每组各12只。通过实验设计建立动物模型，观察对比各组皮瓣IR后血清LDH、MDA、GSH-Px、SOD变化情况以及皮瓣存活率。结果 EDPC组的MDA、LDH含量明显低于其他3组（P＜0.05），而GSH-Px、SOD及皮瓣成活率明显高于其他3组（P＜0.05）。结论无创肢体缺血预处理快速相与延迟相叠加对大鼠IR皮瓣具有保护作用且优于单一的快速相或延迟相的作用。

关键词：肢体缺血预处理快速相延迟相缺血再灌注皮瓣大鼠

αB-晶状体蛋白在心肌预适应早期相及延迟相心肌保护中的作用

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中国病理生理杂志 2000年第10期16卷 105-105页

作者：肖卫民黄勤尢家騄肖献忠湖南医科大学病理生理学教研室!湖南长沙410078

目的:热休克蛋白(HSPs)在心肌缺血预适应(ischemic preconditioning)的心肌保护中是否发挥作用,至今仍不清楚.本研究试图探讨αB-晶状体蛋白(属小分子HSP)在心肌缺血预适应中的作用.方法:为观察αB-晶状体蛋白在缺血预适应早期相中的作... 详细信息

目的:热休克蛋白(HSPs)在心肌缺血预适应(ischemic preconditioning)的心肌保护中是否发挥作用,至今仍不清楚.本研究试图探讨αB-晶状体蛋白(属小分子HSP)在心肌缺血预适应中的作用.方法:为观察αB-晶状体蛋白在缺血预适应早期相中的作用,采用大鼠Langendorff离体心脏及培养的新生大鼠心肌细胞分别进行缺血及热休克预处理.结果:缺血预适应(缺血5 min+再灌5 min)明显减轻了随后更长时间的缺血-再灌流损伤(缺血30 min+再灌120 min),表现为+dp/dtmax、LVP、及冠脉流量的恢复明显改善,CPK释放减少.采用免疫细胞化学及Western blot技术发现,正常状态下,αB-晶状体蛋白以可溶性形式存在于心肌细胞胞浆中,在缺血预适应及热休克预处理时则快速向不溶性细胞结构移位,免疫电镜显示αB-晶状体蛋白的主要移位区域是核周及Z线等细胞骨架部位,等电聚焦技术显示上述移位与αB-晶状体蛋白的磷酸化有关.此种快速移位可稳定细胞骨架,可能是心肌预适应早期相的重要心肌保护机制之一.为进一步观察αB-晶状体蛋白在预适应延迟相中的可能作用,培养的新生大鼠心肌细胞经热休克(43℃)预处理不同时间(15,30,60,90 min)并恢复不同时间(0,1,2,4,6,12及24 h)后,再加入H2O2(1 mmol/L)处理3 h.结论:热休克预处理在诱导αB-晶状体蛋白增多的同时,亦明显减轻了心肌细胞损伤,表现为心肌细胞死亡率及LDH释放率低于H2O2损伤组,细胞总抗氧化能力高于H2O2损伤组.上述结果表明,αB-晶状体蛋白在心肌预适应的早期相及延迟相心肌保护中均具有重要作用.

关键词：晶状体蛋白延迟相心肌保护心肌预适应缺血预适应热休克预处理

硫化氢预处理延迟相对大鼠心肌缺血-再灌注损伤的保护作用

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临床麻醉学杂志 2012年第2期28卷 182-184页

作者：冉珂唐正国丁丽萍肖艳英常业恬中南大学湘雅二医院麻醉科长沙市410011 长沙市第三医院麻醉科

目的探讨硫化氢预处理延迟相对大鼠心肌缺血-再灌注损伤的保护作用。方法将30只健康成年SD雄性大鼠随机分为三组:假手术组(S组)、缺血-再灌注组(IR组)和硫化氢组(H组)。S组仅开胸并分离冠状动脉左前降支,但不阻断血流150min;IR组行冠状... 详细信息

目的探讨硫化氢预处理延迟相对大鼠心肌缺血-再灌注损伤的保护作用。方法将30只健康成年SD雄性大鼠随机分为三组:假手术组(S组)、缺血-再灌注组(IR组)和硫化氢组(H组)。S组仅开胸并分离冠状动脉左前降支,但不阻断血流150min;IR组行冠状动脉左前降支阻断30min,再灌注120min;H组予以静脉注射NaHS0.05mg/kg,给药后24h同IR组处理。再灌注结束后检测血清超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量和心肌梗死面积,电镜观察各组心肌细胞超微结构变化。结果与IR组比较,H组MDA含量降低,SOD活性增高(P延迟相对大鼠缺血-再灌注心肌具有保护作用,与抗氧化反应有关。

关键词：硫化氢预处理延迟相心肌缺血-再灌注

2-氯环戊腺苷预处理延迟相对兔缺血-再灌注损伤心肌αB-晶状体蛋白的影响

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临床麻醉学杂志 2011年第3期27卷 284-286页

作者：周建美邹定全冉珂常业恬中南大学湘雅二医院麻醉科长沙市410011

目的研究腺苷A1受体激动药2-氯环戊腺苷(CCPA)预处理延迟相对缺血-再灌注损伤心肌αB-晶状体蛋白的影响。方法新西兰大白兔12只,随机均分为三组:假手术组(S组)、生理盐水预处理组(N组)、CCPA预处理组(C组)。S组分离兔左冠状动脉前降支,... 详细信息

目的研究腺苷A1受体激动药2-氯环戊腺苷(CCPA)预处理延迟相对缺血-再灌注损伤心肌αB-晶状体蛋白的影响。方法新西兰大白兔12只,随机均分为三组:假手术组(S组)、生理盐水预处理组(N组)、CCPA预处理组(C组)。S组分离兔左冠状动脉前降支,套带,但不阻断血流;N、C组在用药24h后分离兔左冠状动脉前降支,结扎30min,恢复灌注2h。提取心肌组织蛋白,采用WesternBlotting检测αB-晶状体蛋白的表达。结果 S组中αB-晶状体蛋白表达很少,C组αB-晶状体蛋白表达显著高于S、N组(P延迟性心肌保护作用与αB-晶状体蛋白表达上调有关。

关键词：腺苷Al受体 2-氯环戊腺苷预处理延迟相 αB-晶状体蛋白

吗啡预处理兔心肌MALDI-TOF-MS分析

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中南大学学报（医学版） 2010年第6期35卷 607-611页

作者：谭嵘邹定全常业恬中南大学湘雅二医院麻醉科长沙410011

目的:对吗啡预处理兔心肌进行基质辅助激光解吸飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight masss pectrometry,MALDI-TOF-MS)分析。方法:将6只新西兰大白兔随机分为对照组和吗啡预处理组,每组3只。对照组静脉注射生理盐水1mL/kg,吗啡预处理组静脉注射吗啡3mg/kg。用双向凝胶电泳法分离两组24h后的心肌组织蛋白,图像分析后找出差异蛋白。用MAL-DI-TOF-MS鉴定部分差异蛋白。结果:两组的差异明显点共有51个,取15个差异蛋白质进行质谱分析,初步鉴定出8个蛋白质,包括应激蛋白(醛糖还原酶、锌指蛋白312)、信号转导蛋白(Src相关的酪氨酸激酶)、代谢相关蛋白(碳酸酐酶12前体、电子转移黄素蛋白β亚单位、甘油醛-3-磷酸脱氢酶)、炎性反应相关蛋白(肿瘤坏死因子配体超家族成员11)和跨膜转运蛋白。结论:这些差异表达的蛋白可能在吗啡对心肌延迟性保护中发挥作用。

关键词：吗啡预适应延迟相基质辅助激光解吸飞行时间质谱分析