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库蠓源蓝舌病病毒1型的分离和初步鉴定

病毒学报 2021年第2期37卷 398-403页

作者：王慧煜江丽艾军孔玉方梅琳吕继洲周晓黎韩雪清中国检验检疫科学研究院北京100176 昆明海关技术中心昆明650228

为监测云南边境地区虫媒库蠓蓝舌病病毒携带情况,本研究对2013年-2017年从云南6个口岸及周边地区采集到的约5 400只库蠓样本,分180组。采用荧光定量RT-PCR检测、鸡胚和细胞分离、目的基因克隆测序分析和间接免疫荧光试验等进行病毒分离... 详细信息

为监测云南边境地区虫媒库蠓蓝舌病病毒携带情况,本研究对2013年-2017年从云南6个口岸及周边地区采集到的约5 400只库蠓样本,分180组。采用荧光定量RT-PCR检测、鸡胚和细胞分离、目的基因克隆测序分析和间接免疫荧光试验等进行病毒分离与鉴定。结果显示:采集库蠓样本中有20组检出蓝舌病病毒核酸,检出率为11.11%(20/180);接种后有1份样本能导致鸡胚胚体充血出血和死亡以及BHK-21细胞呈现明显的细胞病变;RT-PCR能从感染细胞样本中扩增出蓝舌病病毒VP7基因特异性片段,且该片段序列与国外BTV-1毒株相应序列的相似性达95%~99%;间接免疫荧光试验显示分离病毒能与BTV-1抗体发生特异性结合。结果表明,云南边境地区库蠓携带有蓝舌病病毒,且为BTV-1,因此应加强对云南边境地区蓝舌病的预防与控制。

关键词：蓝舌病病毒(BTV) 血清型1型库蠓序列分析

海南岛红树林生境库蠓属一新种及一中国新记录种记述（双翅目：蠓科）

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中国媒介生物学及控制杂志 2023年

作者：邓斌林晓丹李加慧海南大学植物保护学院热带农林生物灾害绿色防控教育部重点实验室

目的描述海南岛红树林生境库蠓属（Culicoides）新种和新记录种。方法将2021—2022年采集自海南岛红树林的库蠓属昆虫制作玻片标本，基于形态学特征进行物种鉴定，并对其主要鉴定特征进行拍摄、测量和绘图。结果在海南省清澜红树林... 详细信息

目的描述海南岛红树林生境库蠓属（Culicoides）新种和新记录种。方法将2021—2022年采集自海南岛红树林的库蠓属昆虫制作玻片标本，基于形态学特征进行物种鉴定，并对其主要鉴定特征进行拍摄、测量和绘图。结果在海南省清澜红树林省级自然保护区、东寨港国家级自然保护区发现1新种拟老挝库蠓（C.pseudolaoensis Deng&Li, sp. nov.），其主要鉴别特征为：雌虫大颚齿10枚，触角嗅觉器分布在第3、11～15节；中胸盾板浅黄色；小盾片褐色；翅基部淡斑大，向后延伸至臀室基部1/2；受精囊3个，椭圆形，位于中部的1个较大。雄虫阳茎中叶端部粗，柱状，阳基侧突基部末端粗壮。在铁炉港红树林自然保护区发现1中国新记录种拟心形库蠓（C. pseudocordiger Wirth&Hubert, 1989），其主要鉴别特征为：足第4跗节呈心形；中胸盾板褐色，表面布满粗鬃；翅r2室全部暗色；雄虫阳茎中叶基拱高且端部尖，阳基侧突端部弯曲且具长齿。新种模式标本保存于海南大学植物保护学院昆虫标本馆。结论报道了库蠓属1新种及1中国新记录种，进一步丰富了中国红树林生境的库蠓种类。

关键词：红树林吸血蠓库蠓分类形态特征

海南省红树林生境库蠓属一新种及一中国新记录种记述(双翅目:蠓科)

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中国媒介生物学及控制杂志 2023年第4期34卷 552-558页

作者：邓斌林晓丹李加慧海南大学植物保护学院热带农林生物灾害绿色防控教育部重点实验室海南海口570228

目的描述海南省红树林生境库蠓属(Culicoides)新种和新记录种。方法将2021-2022年采集自海南省红树林的库蠓属昆虫制作玻片标本,基于形态学特征进行物种鉴定,并对其主要鉴定特征进行拍摄、测量和绘图。结果在海南省清澜红树林省级自然... 详细信息

目的描述海南省红树林生境库蠓属(Culicoides)新种和新记录种。方法将2021-2022年采集自海南省红树林的库蠓属昆虫制作玻片标本,基于形态学特征进行物种鉴定,并对其主要鉴定特征进行拍摄、测量和绘图。结果在海南省清澜红树林省级自然保护区、东寨港国家级自然保护区发现1新种拟老挝库蠓(C.pseudolaoensis Deng&Li,sp.nov.),其主要鉴别特征为:雌虫大颚齿10枚,触角嗅觉器分布在第3、11~15节;中胸盾板浅黄色;小盾片褐色;翅基部淡斑大,向后延伸至臀室基部1/2;受精囊3个,椭圆形,位于中部的1个较大。雄虫阳茎中叶端部粗,柱状,阳基侧突基部末端粗壮。在铁炉港红树林自然保护区发现1中国新记录种拟心形库蠓(C.pseudocordiger Wirth&Hubert,1989),其主要鉴别特征为:足第4跗节呈心形;中胸盾板褐色,表面布满粗鬃;翅r2室全部暗色;雄虫阳茎中叶基拱高且端部尖,阳基侧突端部弯曲且具长齿。新种模式标本保存于海南大学植物保护学院昆虫标本馆。结论记述了库蠓属1新种及1中国新记录种,进一步丰富了中国红树林生境的库蠓种类。

关键词：红树林吸血蠓库蠓分类形态特征

云南省墨江县库蠓中一株西藏环状病毒的分离及全基因组序列分析

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病毒学报 2022年第6期38卷 1419-1428页

作者：杨振兴孟锦昕何于雯李楠王静林云南省畜牧兽医科学院云南省热带亚热带动物病毒病重点实验室昆明650224

西藏环状病毒(Tibet orbivirus,TIBOV)于2009年首次从中国西藏自治区采集的圆斑按蚊中分离出,目前在中国的云南省、广东省、湖南省和临国日本均有分离报道。2017年我们从云南省墨江县采集的库蠓样品中分离到一株病毒(MJC1-7),接种BHK-21... 详细信息

西藏环状病毒(Tibet orbivirus,TIBOV)于2009年首次从中国西藏自治区采集的圆斑按蚊中分离出,目前在中国的云南省、广东省、湖南省和临国日本均有分离报道。2017年我们从云南省墨江县采集的库蠓样品中分离到一株病毒(MJC1-7),接种BHK-21和C6/36细胞后均可产生聚集、皱缩和脱落等明显细胞病变。1%的琼脂糖凝胶电泳显示,病毒基因组为十节段的双链RNA,呈现“3-3-3-1”的带型。通过病毒全长cDNA扩增和测序获取MJC1-7毒株的全基因组核苷酸序列,病毒基因组全长为19260 bp(包括编码区18495 bp和非编码区735 bp),由Seg-1(3950 bp)至Seg-10(832 bp)的10个基因节段构成,可编码6165个氨基酸残基。对环状病毒保守的VP1(Pol)、VP3(T2)和VP7(T13)蛋白氨基酸序列及系统发育分析显示,MJC1-7毒株与TIBOV亲缘关系最近,氨基酸序列相似度为95.4%~99.7%。对决定环状病毒血清型VP2(OC1)蛋白氨基酸序列与系统发育分析显示,MJC1-7与云南(SX-2017a、DH13C120和YN15-283-01)和广东(D181/2008)分离的TIBOV毒株聚为一簇,氨基酸序列相似度为97.3%~98.6%,而中国西藏毒株(XZ0906)和日本毒株(KSB-8/C/09和KSB-3/C/10)形成了另外3个独立的进化分支,MJC1-7与其相似度仅为27.8%~41.8%,以上结果表明MJC1-7毒株与云南和广东毒株有更近的亲缘关系,而中国西藏和日本毒株可能为Seg-2(OC1)基因变异较大毒株。本研究报道了一株TIBOV在我国云南省墨江县库蠓上的分离以及全基因组序列分析,研究结果进一步丰富了我们对TIBOV的认知,为深入研究我国TIBOV的分布、致病性与病原学检测技术提供了基础数据。

关键词：库蠓病毒分离西藏环状病毒序列分析

中国动物虫媒病毒主要传播媒介库蠓种类及其分布

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中国热带医学 2022年第6期22卷 505-511页

作者：李苏胜王静林云南省畜牧兽医科学院云南省热带亚热带动物病毒病重点实验室云南昆明650224

库蠓(双翅目:蠓科)是一种重要的医学和兽医学媒介昆虫,能通过叮咬动物和人传播蓝舌病病毒(bluetongue virus, BTV)、施马伦贝格病毒(Schmallenberg virus, SBV)、奥罗波克病毒(Oropouche virus, OROV)等多种病毒,危害动物和人类健康,造... 详细信息

库蠓(双翅目:蠓科)是一种重要的医学和兽医学媒介昆虫,能通过叮咬动物和人传播蓝舌病病毒(bluetongue virus, BTV)、施马伦贝格病毒(Schmallenberg virus, SBV)、奥罗波克病毒(Oropouche virus, OROV)等多种病毒,危害动物和人类健康,造成重大经济损失。全国34个省级行政区中,除了北京和澳门,其余都有库蠓分布的报道。我国现记载的库蠓属有12个亚属368种,分布在云南的库蠓种类最多,其中原野库蠓(C.homotomus)的分布最广。能传播或潜在具有传播病毒能力的库蠓至少有42种,其中我国有20种,在北京、天津、香港、澳门以外的各省(市、自治区)均有分布。为进一步了解传播虫媒病毒的库蠓种类及其分布情况,促进我国蠓传动物疾病的预防和控制,本文对我国动物病毒媒介库蠓的种类和分布情况进行综述,为动物虫媒病毒的研究提供依据。

关键词：库蠓地理分布虫媒病毒

基于宏基因组学分析海南省不同养殖场库蠓共生微生物群落组成

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中国媒介生物学及控制杂志 2023年第4期34卷 472-479页

作者：樊洁丽刘焱晖殷雅楠赵建国孙定炜廖承红韩谦海南大学全健康研究院海南海口570228 海南省疾病预防控制中心海南海口570203

目的探究海南省不同养殖场库蠓共生微生物群落多样性和差异性。方法2021年8-9月,在海南省文昌市、定安和乐东县5个不同的养殖场(牛圈、鸡舍、犬场、羊圈和猪圈),用紫外灯诱法采集库蠓,分别使用十六烷基三甲基溴化铵法提取总DNA后,通过... 详细信息

目的探究海南省不同养殖场库蠓共生微生物群落多样性和差异性。方法2021年8-9月,在海南省文昌市、定安和乐东县5个不同的养殖场(牛圈、鸡舍、犬场、羊圈和猪圈),用紫外灯诱法采集库蠓,分别使用十六烷基三甲基溴化铵法提取总DNA后,通过宏基因组学测序技术分析其微生物群落结构特征及基因功能分布。结果不同养殖场库蠓优势种不同,牛圈、羊圈和猪圈主要是尖喙库蠓,占比分别为92.91%,82.22%和95.85%;鸡舍和犬场均以荒川库蠓为主要优势种,占比分别为66.36%和98.22%。不同养殖场库蠓共生微生物在门水平上,均以变形菌门(33.78%)、子囊菌门(9.09%)和厚壁菌门(8.88%)为主要菌门;在属水平上,均以不动杆菌属(22.48%)和梭菌属(7.25%)为优势菌属。属水平微生物多样性分析发现5个养殖场共有的属最多,有3357属。微生物基因差异分析显示5个不同的养殖场共有基因数目较少,为1065个。此外,功能预测结果也显示,29.10%注释基因与新陈代谢相关,如碳水化合物代谢、氨基酸代谢和脂质代谢等。基因数目差异分析结果表明,库蠓种类组成越相似,样品共有基因数目越多。结论微生物群落分析发现,海南省不同养殖场库蠓共生微生物的核心菌群相对稳定,库蠓优势种相同的养殖场微生物群落相似度更高。该研究丰富了我国库蠓的微生物群落数据库,对今后库蠓的生物防控有重要意义。

关键词：库蠓共生微生物宏基因组学

基于宏基因组学分析不同养殖场库蠓共生微生物群落组成

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中国媒介生物学及控制杂志 2023年

作者：樊洁丽刘焱晖殷雅楠赵建国孙定炜廖承红韩谦海南大学全健康研究院海南省疾病预防控制中心

目的　探究海南省不同养殖场库蠓共生微生物群落多样性和差异性。方法　2021年8月—9月，在海南省文昌市、定安县和乐东县的5个不同的养殖场（牛圈、鸡舍、狗场、羊圈和猪圈），紫外灯诱法采集库蠓，分别使用CTAB法提取总DNA后，通过宏... 详细信息

目的　探究海南省不同养殖场库蠓共生微生物群落多样性和差异性。方法　2021年8月—9月，在海南省文昌市、定安县和乐东县的5个不同的养殖场（牛圈、鸡舍、狗场、羊圈和猪圈），紫外灯诱法采集库蠓，分别使用CTAB法提取总DNA后，通过宏基因组学测序技术分析其微生物群落结构特征及基因功能分布。结果　不同养殖场库蠓优势种不同，牛圈、羊圈和猪圈主要是尖喙库蠓，占比分别是92.91%，82.22%，95.85%；鸡舍和狗场以荒川库蠓为主要优势种，占比为66.36%，98.22%。不同养殖场库蠓在门水平上，均以变形菌门（33.78%）、子囊菌门（9.09%）和厚壁菌门（8.88%）为主要菌门；在属水平上，均以不动杆菌属（22.48%）和梭菌属（7.25%）为优势菌属。属水平微生物多样性分析发现共有属最多，有3 357属。微生物基因差异分析显示5个不同的养殖场共有基因数目较少，为1 065个。此外，功能预测结果也显示，29.10%注释基因与新陈代谢相关，如碳水化合物代谢、氨基酸代谢和脂质代谢等。基因数目差异分析结果表明，库蠓种类组成越相似，样品共有基因数目越多。结论　在基因和物种水平上的微生物群落分析发现，库蠓共生微生物的核心菌群相对稳定，库蠓优势种相同的养殖场微生物群落相似度更高，并对其微生物群落的功能作用展开讨论。本研究丰富了我国库蠓的微生物群落数据库，了解其共生微生物群落组成及功能对今后库蠓的生物防控有重要意义。

关键词：库蠓共生微生物宏基因组学

库蠓核糖体DNA内转录间隔区1序列的测定与分析

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中国人兽共患病学报 2018年第12期34卷 1087-1094页

作者：岑常活韩晓静常琼琼段琛侯晓晖遵义医学院遵义563000

目的测定核糖体DNA内转录间隔区1(nuclear ribosomal DNA internal transcribed spacer 1,rDNA-ITS1)序列进行库蠓种类鉴别与系统发育分析,以探究rDNA-ITS1序列在库蠓分子鉴定和系统发育研究方面的适用性。方法采用DNA扩增、纯化、克隆... 详细信息

目的测定核糖体DNA内转录间隔区1(nuclear ribosomal DNA internal transcribed spacer 1,rDNA-ITS1)序列进行库蠓种类鉴别与系统发育分析,以探究rDNA-ITS1序列在库蠓分子鉴定和系统发育研究方面的适用性。方法采用DNA扩增、纯化、克隆及测序的方法获得荒川库蠓Culicoides arakawai、凹缘库蠓C.holcus、连斑库蠓C.jacobsoni、印度库蠓C.indianus、霍飞库蠓C.huffi和肩宏库蠓C.humeralis等6种库蠓的rDNA-ITS1序列,基于Kimura 2-parameter公式计算种内和种间遗传距离,应用MEGA 6.06软件分析DNA序列碱基组成并以环纹埃蠓Allohelea annulata为外群构建系统发育树(邻接法和最大似然法)。结果上述6种库蠓的rDNA-ITS1序列经过Clustal W比对及人工校对和编辑后的长度为352bp,其中T、C、A、G 4种碱基的含量分别为36.8%、13.0%、30.0%和20.1%,A+T的含量(66.8%)高于C+G的含量(33.1%);K-2p遗传距离在种内和种间具显著差异(t=32.430,P库蠓各自构成单系(群),同种类不同地理种群聚为一支,其与形态学鉴定结果一致。结论本研究证实了rDNA-ITS1序列可用于进行库蠓及其近似种的分子鉴定和系统发育分析。

关键词：库蠓近似种分子鉴定系统发育 rDNA-ITS1

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青海省东部4县库蠓分布调查

中国媒介生物学及控制杂志 2023年第1期34卷 53-57页

作者：王壮飞卢雪侯晓晖遵义医科大学基础医学院细胞生物学教研室贵州遵义563099

目的调查青海省祁连山国家公园及麦秀自然保护区内互助、门源、祁连和泽库县4地的库蠓种类分布、种类构成,探讨气候因素对上述区域库蠓分布的影响。方法2020年7-8月使用灯诱法在上述4县采集库蠓,分类鉴定后使用SPSS 25.0和GraphPad Pris... 详细信息

目的调查青海省祁连山国家公园及麦秀自然保护区内互助、门源、祁连和泽库县4地的库蠓种类分布、种类构成,探讨气候因素对上述区域库蠓分布的影响。方法2020年7-8月使用灯诱法在上述4县采集库蠓,分类鉴定后使用SPSS 25.0和GraphPad Prism 8.2.1软件对海拔、气象因子和采集数量进行Pearson相关性检验和作图。结果共采获库蠓8417只,计1属5亚属10种,其中青海省新记录6种,分别为渐灰库蠓、刺螫库蠓、迟缓库蠓、暗端库蠓、圆斑库蠓和淡角库蠓。4个县的优势库蠓均为渐灰库蠓,分别占4个采集点库蠓总数的33.60%、85.85%、97.95%和97.97%。泽库县采获的渐灰库蠓、淡角库蠓和灰黑库蠓吸血率分别为2.23%、1.23%和1.89%。Pearson相关性检验显示,在调查区域内单日库蠓采集量与海拔(R^(2)=0.130,P=0.639)、风速(R^(2)=0.059,P=0.641)无相关性,而与降水量(R^(2)=0.199,P=0.038)、平均温度(R^(2)=0.838,P=0.010)呈负相关。结论青海省东部4个县采获库蠓1属5亚属10种,渐灰库蠓为优势种,该地区库蠓种群数量与降水量、平均温度有相关性。

关键词：库蠓种类分布种类构成吸血率青海省