检索结果-南通市图书馆

作者：陈玉静河北医科大学

学位级别：硕士

目的:建立一种未知病毒性病原体的检测方法-序列非依赖的单引物扩增(sequence independent single primer amplification,SISPA)技术,为传染病疫情尤其是新发传染病的预防控制、临床诊断及治疗提供科学依据。方法:1以发热伴血小板减少... 详细信息

目的:建立一种未知病毒性病原体的检测方法-序列非依赖的单引物扩增(sequence independent single primer amplification,SISPA)技术,为传染病疫情尤其是新发传染病的预防控制、临床诊断及治疗提供科学依据。方法:1以发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒(Severe Fever with Thrombocytopenic Syndrome Bunyavirus,SFTSV)毒株为研究对象,对样品进行过滤及DNase I消化处理,并对处理后的SFTSV毒株提取总RNA。2使用含有已知片段的随机引物对提取的RNA进行逆转录,合成双链cDNA,并对其进行纯化。3将随机引物中的已知片段作为单引物,非特异性扩增(SISPA-PCR)病原体基因。4对SISPA-PCR扩增产物进行分析及纯化回收、TA克隆。5鉴定克隆结果,选出含有插入片段的重组质粒进行测序,应用BLAST软件比对分析该核酸的同源性,判断其所属物种。6将SFTSV毒株提取的核酸进行10倍连续梯度稀释,并以稀释样品为研究对象,对建立的SISPA方法进行灵敏度分析。7以本实验室提供的肠道病毒毒株CoxA16和EV71、甲型流感病毒毒株H1N1及该几种病毒的混合液为研究对象,对建立的SISPA方法进行特异度分析。8 SISPA方法的应用,应用SISPA方法检测河北省平山县采集的76份临床诊断为病毒性脑炎的脑脊液标本。结果:1 SISPA方法的初步建立:SISPA扩增SFTSV毒株中的RNA,可以得到多个DNA片段,然后将所有PCR产物回收纯化、克隆、测序,经BLAST软件分析,与Gen Bank中的SFTSV基因序列同源性最高达98%,可判断所检测的病原体为SFTSV;2灵敏度分析:稀释后的SFTSV核酸浓度区间为10-10TCID/ml。稀释样品经SISPA-PCR扩增,电泳显示浓度为10-10TCID/ml的样品呈现出典型的SISPA扩增条带,且在不同时间进行的至少3次实验结果一致,由此可见,该方法对病毒SFTSV的检测下限可达到10 TCID/ml,灵敏度较高,可检测低浓度的病毒核酸;3特异度分析:将CoxA16、EV71及HIN1毒株及该几种病毒的混合液分别经SISPA-PCR扩增,分别获得多个DNA片段,经TA克隆、测序及序列分析,与GeneBank中的CoxA16、EV71及H1N1基因序列同源性分别高达98%、97%、99%,可判断检测的病原体分别为CoxA16、EV71及H1N1,且在不同时间进行的至少3次实验结果一致,由此说明该方法可在一个反应体系中特异地将多种病毒检测出来,特异度较好;4 SISPA方法的应用:SISPA-PCR方法检测河北省平山县采集的76份临床诊断为病毒性脑炎的脑脊液标本,其中有11份检测为Echo18阳性。结论:1成功建立了应用序列非依赖的单引物扩增(SISPA)技术检测未知RNA病毒性病原体的技术平台。2建立的SISPA方法不依赖病毒分离培养,缩短了检测未知病毒的时间,可快捷地鉴定病毒性病原体。3建立的SISPA方法的检测下限是10TCID/ml,可用于检测低浓度的未知序列的病毒核酸。4 SISPA方法既适用于检测已知病毒,也适用于检测未知病毒,适用范围较广。

关键词：序列非依赖的单引物扩增技术 RNA病毒 SFTSV CoxA16 EV71 H1N1 Echo18

来源：

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

单纯疱疹病毒1型引起的发热出疹性疾病需要与手足口病进行鉴别

引用

病毒学报 2013年第4期29卷 415-420页

作者：祝双利刘建锋孙强李静李晓嫘张勇陈瑛温小云严冬梅黄国虹张宝敏张波安洪秋李慧许文波中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所世界卫生组织西太平洋区脊髓灰质炎参比实验室北京102206 甘肃省疾病预防控制中心兰州730000

对2008年在甘肃省发生的一起疑似手足口病(HFMD)的发热出疹性疾病的流行进行病原体的实验室检测,明确引起这起传染病流行的病原体。从4名发热出疹患者采集的8份临床标本中(每个患者采集咽拭子和疱疹液标本),首先将临床标本接种到RD和HE... 详细信息

对2008年在甘肃省发生的一起疑似手足口病(HFMD)的发热出疹性疾病的流行进行病原体的实验室检测,明确引起这起传染病流行的病原体。从4名发热出疹患者采集的8份临床标本中(每个患者采集咽拭子和疱疹液标本),首先将临床标本接种到RD和HEp-2细胞上进行病毒分离,对病毒分离阳性的标本提取病毒核酸,然后使用荧光定量-逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)进行人肠道病毒(HEV)核酸的检测。对HEV检测结果阴性的标本采用序列非依赖的单引物扩增技术(SISPA)进行"未知病原体"的鉴定。分离到的6株病毒均鉴定为单纯疱疹病毒I型(HSV-1),结合分析这起流行中患者的临床表现、流行病学调查结果以及实验室检测结果,表明HSV-1是引起这起发热出疹性疾病流行的病原体。6株HSV-1的gG区核苷酸和氨基酸水平上差异都较小,同源性分别高达98.8%和97.9%,说明这起疫情是由同一个病毒传播链引起的。HSV-1等病毒引起的发热出疹性疾病需要与HFMD进行鉴别诊断,由于仅从临床症状和流行病学资料上判断引起发热出疹性疾病的病原体是非常困难的,因此,必须依赖于实验室的诊断。

关键词：发热出疹性疾病手足口病序列非依赖的单引物扩增技术单纯疱疹病毒1型 A基因型

来源：

维普期刊数据库

同方期刊数据库评论

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

欢迎您,

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

在线全文

在线全文

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：

通借通还

欢迎您,

建议与咨询 留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

在线全文

在线全文

请选择保存的检索档案： 新增检索档案 确定 取消

请选择收藏分类： 新增自定义分类 确定 取消

通借通还

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：