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庆丰链霉菌质粒DNA的转化

中国抗生素杂志 1987年第1期 41-47页

作者：张泉渡张玉泉张德颐吴振倡杜珠还陈学旺中国科学院上海植物生理研究所中国科学院上海药物研究所杭州杭州第二制药厂浙江大学生命科学研究室浙江大学生命科学研究室上海

以PEG沉淀法从庆丰链霉菌M-15菌株中分离到具有闭环和开环两种构型的质粒DNA,其分子量约为10×10~6道尔顿。以此质粒DNA作为供体,以质粒消除突变株A544制备原生质体作为受体,在40％聚乙二醇(PEG1000)的诱导下进行DNA转化。从实验结果获... 详细信息

以PEG沉淀法从庆丰链霉菌M-15菌株中分离到具有闭环和开环两种构型的质粒DNA,其分子量约为10×10~6道尔顿。以此质粒DNA作为供体,以质粒消除突变株A544制备原生质体作为受体,在40％聚乙二醇(PEG1000)的诱导下进行DNA转化。从实验结果获得的遗传性状来看,受体菌的表型由Pro~-→Pro~+、Sm~s→Sm~r、Qm~s→Qm~r,证明为转化子,并证明庆丰霉素合成是受质粒DNA控制的。

关键词：庆丰霉素庆丰链霉菌庆丰霉素产生菌转化子 DNA 质粒基因载体

庆丰链霉菌中与庆丰霉素生物合成有关质粒的感染性转移

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Journal of Genetics and Genomics 1980年第4期 299-306页

作者：郑幼霞徐小雪赵人俊张庭兰张益棻中国科学院上海植物生理研究所微生物室

本研究表明不同类型的q~+、q~-衍生菌株混合培养,Qm的合成能力可以从q~+供体转移给q~-受体,其频率因配对菌株的特性不同而在0.03—100％范围内。当q~+、q~-的营养缺陷型作为两亲株进行杂交时,形成的Sm~r原养型重组子中有50—100％获得... 详细信息

本研究表明不同类型的q~+、q~-衍生菌株混合培养,Qm的合成能力可以从q~+供体转移给q~-受体,其频率因配对菌株的特性不同而在0.03—100％范围内。当q~+、q~-的营养缺陷型作为两亲株进行杂交时,形成的Sm~r原养型重组子中有50—100％获得了合成Qm的能力,混合孢子中没有重组并带有原来标记的q~-受体菌有20—90％由q~-转变成q~+。这种转移发生在菌丝阶段,并受AY、EB、SDS或高温培养的干扰,据此我们认为这个与Qm合成有关的质粒具有感染性转移的功能,并命名为SQP1。

关键词：质粒庆丰霉素基因载体受体菌庆丰链霉菌庆丰霉素产生菌感染性生物合成生化反应营养缺陷型混合培养原养型接合子

庆丰链霉菌中SQP1质粒控制致育性的遗传证明

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Journal of Genetics and Genomics 1982年第1期 8-13页

作者：郑幼霞赵人俊张益棻中国科学院上海植物生理研究所

我们以前的工作已经证明,野生型庆丰链霉菌生物合成Qm的过程,有sQP1质粒参与(SQP1+),它可以受质粒消除剂的作用,以1.8一19％的频率消除而产生不能合成Qm的突变株(SQP1~-);它们的营养缺陷型互补对菌株杂交,可以发生基因交换而生成原养型... 详细信息

我们以前的工作已经证明,野生型庆丰链霉菌生物合成Qm的过程,有sQP1质粒参与(SQP1+),它可以受质粒消除剂的作用,以1.8一19％的频率消除而产生不能合成Qm的突变株(SQP1~-);它们的营养缺陷型互补对菌株杂交,可以发生基因交换而生成原养型重组子。以后又观察到重组的频率因亲株携带SQP1质粒的状态不同而有明显的差异,SQP1~+×SQP1~-(或SQP1~+×SQP1~+)杂交,产生重组子的数目要比SQP1~-×SQP1~-杂交高100—1000倍。本文报道的实验数据,指出庆丰链霉菌的致育性受SQP1质粒所控制。

关键词：庆丰链霉菌庆丰霉素产生菌 SQP1 质粒基因载体重组子交换子亲株育性

庆丰链霉菌原生质体的形成、再生及融合重组的研究

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Journal of Genetics and Genomics 1982年第3期 172-179页

作者：王洪洲郑幼霞中国科学院上海植物生理研究所微生物室

庆丰链霉菌生长在不含甘氨酸的培养基中,其细胞壁能很好地被溶菌酶溶解,释放出原生质体。原生质体不仅可以在R、RM和RG培养基上再生,而且在高渗庆丰链霉菌斜面孢子培养基上也能再生,孢子也比较丰满。A54菌株的再生频率是30.5％,A201菌株... 详细信息

庆丰链霉菌生长在不含甘氨酸的培养基中,其细胞壁能很好地被溶菌酶溶解,释放出原生质体。原生质体不仅可以在R、RM和RG培养基上再生,而且在高渗庆丰链霉菌斜面孢子培养基上也能再生,孢子也比较丰满。A54菌株的再生频率是30.5％,A201菌株为38％。原生质体在4℃贮存过夜,再生频率降低30％以上。PEG能有效地诱导庆丰链霉菌原生质体融合重组,不同分子量的PEG诱导效果不一样,PEG1000的效果最好,重组频率可达10,和常规杂交相比,重组频率可以提高10—1000倍。用PEG诱导原生质体融合重组时,性因子的存在与否对重组频率没有明显的影响。

关键词：原生质体 PEG 高渗细胞融合庆丰霉素产生菌庆丰链霉菌重组频率

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庆丰链霉菌细菌素的提纯和鉴定

微生物学报 1986年第4期26卷 313-320页

作者：余茂効汪大建 PeterHansHofschneider Abteilung fur Virusforschung Max-Planck Institut fur Biochemie Martinsried bei Munchen Bundesrepublik Deutchland

利用Sephadex G25凝胶过滤和磷酸纤维素层析相结合的方法,将庆丰链霉菌Q3所产生的细菌素——庆丰链霉菌素进行了提纯。这种细菌素是一种分子量为4737的蛋白性质物质,对热、紫外线和所试用的有机溶剂稳定,最适pH处于7.0—9.0。嗜热菌蛋... 详细信息

利用Sephadex G25凝胶过滤和磷酸纤维素层析相结合的方法,将庆丰链霉菌Q3所产生的细菌素——庆丰链霉菌素进行了提纯。这种细菌素是一种分子量为4737的蛋白性质物质,对热、紫外线和所试用的有机溶剂稳定,最适pH处于7.0—9.0。嗜热菌蛋白酶和链霉蛋白酶P可以完全破坏其活性,蛋白酶K能部分减低其活性,但所试验的其它蛋白水解酶类,以及DNA酶和RNA酶均无损其活性。根据庆丰链霉菌素对所测定的革兰氏阳性和阴性菌的生长影响,呈现抑制生长和促进生长,有一部分介于中间类型。

关键词：细菌素庆丰链霉菌素庆丰链霉菌

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庆丰链霉菌SQP1质粒的种间转移和表达

Journal of Genetics and Genomics 1982年第6期 423-430页

作者：郑幼霞徐小雪张庭兰中国科学院上海植物生理研究所微生物室

庆丰链霉菌A201菌株的SQP1质粒可以通过混合培养接合转移到井冈链霉菌VA4菌株的细胞中,转移频率为2—8％。接合子p菌株的形态特征和亲株VA4相似,但却获得了产生抑制细菌的抗生素的能力,这种抑制细菌的能力在遗传上是稳定的。高温预培养... 详细信息

庆丰链霉菌A201菌株的SQP1质粒可以通过混合培养接合转移到井冈链霉菌VA4菌株的细胞中,转移频率为2—8％。接合子p菌株的形态特征和亲株VA4相似,但却获得了产生抑制细菌的抗生素的能力,这种抑制细菌的能力在遗传上是稳定的。高温预培养能使接合子P2菌株抑细菌活性受到消除,消除频率达10％以上。鉴定P2接合子的发酵产物证明包含二个抗菌物质,一个是它本来的产物井冈霉素,另一个是新获得的抑制细菌物质庆丰霉素,后者的产生是由于SQP1进入新寄主细胞的结果。

关键词：庆丰链霉菌 SQP1 庆丰霉素产生菌质粒基因载体试验菌株井冈霉素接合子细菌活性种间

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庆丰链霉菌细菌素

微生物学报 1981年第1期21卷 57-62+135页

作者：余茂效魏芸斋张仪裳中国科学院四川生物研究所中国科学院微生物研究所

本文报道了庆丰链霉菌斜面培养物上出现的空斑,排除了由于噬菌体污染而引致的可能性;发现和证实可不经诱导而自发产生的细菌素物质,并能对该菌本身产生抑制生长;斜面上出现的空斑与这种细菌素产生的关系进行了探讨;对于放线菌中确定细... 详细信息

本文报道了庆丰链霉菌斜面培养物上出现的空斑,排除了由于噬菌体污染而引致的可能性;发现和证实可不经诱导而自发产生的细菌素物质,并能对该菌本身产生抑制生长;斜面上出现的空斑与这种细菌素产生的关系进行了探讨;对于放线菌中确定细菌素的问题进行了讨论。

关键词：庆丰链霉菌空斑庆丰霉素产生菌细菌素噬菌斑斜面培养物

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庆丰链霉菌质粒DNA的分离及电镜观察

Journal of Genetics and Genomics 1983年第1期 15-19页

作者：张泉渡王洪洲郑幼霞中国科学院上海植物生理研究所微生物室

本文报道用清亮裂解液PEG沉淀法从庆丰链霉菌M-15菌株中分离到质粒DNA,琼脂糖凝胶电泳用溴化乙锭染色及CsCl-EtBr密度梯度离心,在紫外线下观察均表明除了染色体带之外还有一条质粒带。我们摄制的电镜照片表明存在共价闭合超盘旋和开放... 详细信息

本文报道用清亮裂解液PEG沉淀法从庆丰链霉菌M-15菌株中分离到质粒DNA,琼脂糖凝胶电泳用溴化乙锭染色及CsCl-EtBr密度梯度离心,在紫外线下观察均表明除了染色体带之外还有一条质粒带。我们摄制的电镜照片表明存在共价闭合超盘旋和开放环形两种分子构型,以多数大小相近的分子周长取平均值,按1微米=2.07×10~6道尔顿的公式计算,庆丰链老菌质粒DNA分子量约为10×10~6道尔顿。

关键词：庆丰链霉菌庆丰霉素产生菌质粒基因载体电镜观察 DNA 密度梯度离心道尔顿染色体带

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四种不同细菌质粒转化庆丰链霉菌的研究

微生物学报 1985年第3期25卷 227-232页

作者：余茂効江宁中国科学院微生物研究所

利用四种不同质粒(pBR322、pUB110、pKT071和pAO1)在10—15%聚乙二醇6000存在时,可以成功地转化到庆丰链霉菌受体;其中转化的pBR322质粒经过20次传代后,仍有30%左右可稳定地存留,而其它三种质粒经2—3次传代后立即消失。用无细胞胞外粗... 详细信息

利用四种不同质粒(pBR322、pUB110、pKT071和pAO1)在10—15%聚乙二醇6000存在时,可以成功地转化到庆丰链霉菌受体;其中转化的pBR322质粒经过20次传代后,仍有30%左右可稳定地存留,而其它三种质粒经2—3次传代后立即消失。用无细胞胞外粗抽提物证实pBR322质粒基因在庆丰链霉菌细胞中得到表达。通过SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳证示转化子胞外抽提物中显著呈现一条分子量为30,000左右的蛋白质带,与已知的pBR322编码的β-内酰胺酶分子量相一致。

关键词：庆丰链霉菌转化 pBR322