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广西特色中草药靶向抗肿瘤筛选及裂果薯皂苷的分离与抗肿瘤作用研究

广西特色中草药靶向抗肿瘤筛选及裂果薯皂苷的分离与抗肿瘤作用研...

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作者：孙悦文广西医科大学

学位级别：硕士

目的：对15种广西常用中草药进行抗肿瘤作用筛选,探讨其选择性抗肿瘤作用,对微血管生成的影响与酪氨酸激酶药靶的关系。建立对裂果薯皂苷有效组分的分离方法并分析有效组分的药理活性。方法：水提醇提十五种广西特色中草药,并对有抗... 详细信息

目的：对15种广西常用中草药进行抗肿瘤作用筛选,探讨其选择性抗肿瘤作用,对微血管生成的影响与酪氨酸激酶药靶的关系。建立对裂果薯皂苷有效组分的分离方法并分析有效组分的药理活性。方法：水提醇提十五种广西特色中草药,并对有抗肿瘤作用报道的几种中草药进行初步萃取分离,利用人肝癌SMMC-7721细胞筛选具有体外抑瘤作用的药物。利用血清药理学法将体外抑瘤作用较强的药物制成含药血清,以MTT法观察其含药血清对SMMC-7721细胞的体外抑制作用。建立鸡胚绒毛尿囊膜模型,观察各提取物对微血管生成的抑制作用。通过测定各有效药物对人正常肝细胞HL-7702的体外抑制作用,初步评价药物的毒性作用。对各有效药物进行化学成分预试,测定其主要的化学成分。对前期研究中筛选所得的裂果薯进行进一步分离,利用D101大孔吸附树脂分离裂果薯乙醇提取物的正丁醇萃取组段,测定裂果薯各分离组段对SMMC-7721细胞的抑制作用,建立快速分离裂果薯有抑瘤作用的皂苷组分的分离方法。观察分离所得裂果薯皂苷对SMMC-7721、BEL-7404、CNE-1细胞的体外抑制作用,利用血清药理学法测定其含药血清对SMMC-7721细胞的抑制作用,并用鸡胚绒毛尿囊膜模型测定其对微血管生成的抑制作用。用ELISA法测定裂果薯总皂苷对酪氨酸激酶作用,并测定其对HL-7702细胞的体外作用,初步评价其毒性结果：在15种广西特色中草药中,有10种对SMMC-7721细胞表现出一定的抑制作用,其中裂果薯,白木通,满天星,破骨风,青九牛与叶下珠抑瘤作用较明显,其IC50分别为0.083mg/ml,0.393mg/ml,0.094mg/ml,0.165mg/ml,0.215mg/ml,0.479mg/ml,这10种广西特色中草药对BEL-7404也表现出一定的抑制作用,其IC50分别白木通0.348mg/ml,土半夏2.050mg/ml,满天星0.090mg/ml,鸡骨草1.376mg/ml,破骨风0.156mg/ml,叶下珠0.546mg/ml,石上柏1.434mg/ml,溪黄草1.928mg/ml,青九牛0.214mg/ml,裂果薯0.102mg/ml。各药物对鼻咽癌细胞的作用与肝癌细胞有较大不同,与对SMMC-7721抑制的IC50相比,白木通、破骨风对CNE-1抑瘤作用有一定提升。各药物组含药血清对SMMC-7721均有不同程度的体外抑制作用,白木通、叶下珠与满天星30%浓度含药血清(抑制率分别为;38.61%,41.54%和37.47%),25%,30%浓度青九牛含药血清组(抑制率分别为：41.19%和30.13%)与相对浓度的索拉菲尼含药血清组(25%,30%浓度血清抑制率分别为：37.10%和29.71%)相比,其体外抑瘤率更高,但未达到有统计学差异的程度。鸡胚尿囊膜实验显示,各药物提取物与空白对照组相比,索拉菲尼、破骨风组的各剂量组均可引起血管均数减少,其对二、三级血管的抑制有统计学意义(p12),但裂果薯抑瘤作用最强。叶下珠醇提物主要成分为非还原性糖、苷,黄酮,蒽醌与酚类、鞣质。满天星醇提物、白木通醇提物主要成分为非还原性糖、苷,可能含有少量黄酮。破骨风醇提物主要含有非还原性糖、苷。青九牛水提物主要含有黄酮与蒽醌,可能含有少量还原性糖。通过建立分离方法分离所得的裂果薯总皂苷对SMMC-7721、BEL-7404、CNE-1细胞均有较强抑制,IC50分别0.00293mg/ml,0.00716mg/ml和0.00546mg/ml,并且对HL-7702细胞毒性较小。其含药血清对SMMC-7721细胞也有抑制作用。裂果薯皂苷的各剂量组均可引起血管均数减少,其对二、三级血管的抑制有统计学意义(p<0.01)。索拉菲尼各剂量组、裂果薯皂苷中、高剂量组能够抑制酪氨酸酶含量(p<0.01),并表现出一定剂量依赖性(高剂量组与中、低剂量组差异P<0.01)与时间依赖作用-(P<0.01)。结论：白木通,满天星,破骨风,叶下珠,鸡骨草,土牛膝,石上柏以及溪黄草的醇提物,青九牛的水提物与索拉菲尼有体外抑瘤作用。索拉菲尼,石上柏,叶下珠,白木通,青九牛,满天星的含药血清具有体外抑瘤作用。索拉菲尼,溪黄草,叶下珠,血党,破骨风,青九

关键词：广西特色中草药抗肝癌抗鼻咽癌含药血清索拉菲尼血管生成裂果薯

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利用抗肿瘤药靶—酪氨酸激酶从广西特色中草药中筛选和研究选择性抗肿瘤药

利用抗肿瘤药靶—酪氨酸激酶从广西特色中草药中筛选和研究选择性...

引用

作者：王金妮广西医科大学

学位级别：硕士

目的：利用抗肿瘤药靶-酪氨酸激酶从18种广西常用中草药(瑶药、壮药)中筛选和研究选择性抗肿瘤药物方法：醇提取十八种广西特色中草药(其中瑶药8种,壮药10种),采用MTT法测定其体外对人肝癌SMMC-7721细胞的抑制作用;选取体外抑瘤作用较... 详细信息

目的：利用抗肿瘤药靶-酪氨酸激酶从18种广西常用中草药(瑶药、壮药)中筛选和研究选择性抗肿瘤药物方法：醇提取十八种广西特色中草药(其中瑶药8种,壮药10种),采用MTT法测定其体外对人肝癌SMMC-7721细胞的抑制作用;选取体外抑瘤作用较好的药物,根据血清药理学方法制备含药血清,观察其体外对人肝癌细胞SMMC-7721的抑制作用;通过细胞裂解液提取不同作用时间不同作用剂量下的人肝癌细胞SMMC-7721总蛋白,采用ELISA法测定人肝癌细胞SMMC-7721总蛋白中酪氨酸激酶(TPK)含量,观察不同药物提取物对其含量影响;通过建立鸡胚绒毛尿囊膜模型测定不同药物提取物抗血管生成的抑制作用;建立人肝癌细胞SMMC-7721裸鼠移植瘤模型,观察不同药物治疗组对裸鼠移植瘤的影响,HE染色观察肿瘤生长及其血管生长情况,免疫组化法检测瘤组织中***34的表达。结果：在筛选的特色药物中,瑶药2号、瑶药5号体外抑制人肝癌SMMC-7721的作用较强,IC50分别为O.080mg/ml,0.281mg/ml;血清药理学实验结果显示瑶药2号、瑶药5号、索拉菲尼的含药血清均显示出不同程度的体外抗肿瘤作用,其中10%瑶药2号含药血清组抑瘤作用与10%索拉菲尼含药血清组相比,抑制率为11.15%,抑制作用变强(P<0.05);瑶药2号、瑶药5号可不同程度的降低酪氨酸激酶的含量(P<0.01)：12.5mg/L索拉菲尼、50mg/mL瑶药2号、12.5mg/mL～50mg/mL瑶药5号均有不同程度的抑制鸡胚尿囊血管生长作用,与空白对照组相比,索拉菲尼对各级血管均有明显抑制作用(P<0.01),瑶药2号高剂量组对二、三级血管有抑制作用(P<0.01),瑶药5号对三级血管有抑制作用,高剂量时可同时抑制一、二级血管(P<0.01);索拉菲尼组,瑶药2号高剂量组、瑶药2号中剂量组肿瘤瘤重、相对体积明显低于阴性对照组(P<0.01),其抑瘤率分别为51.75%,47.71%,21.27%;HE染色显示索拉菲尼组、瑶药2号高剂量组肿瘤坏死区域明显大于阴性对照组;索拉菲尼组、瑶药2号高剂量组MVD明显低于阴性对照组(P<0.01),瑶药2号中剂量组与阴性对照组相比也有差异(P<0.05);索拉菲尼组、瑶药2号高剂量组可明显降低肿瘤组织内VEGF的表达(P<0.01)。结论：瑶药2号、瑶药5号均可不同程度的抑制血管生长,可降低肿瘤细胞内酪氨酸激酶的含量。此外,瑶药2号还可降低肿瘤内微血管密度以及VEGF的表达。

关键词：广西特色中草药抗肝癌含药血清酪氨酸激酶抑制剂血管生成血管生长因子

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