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平滑肌祖细胞与心血管疾病

中国组织工程研究与临床康复 2009年第32期13卷 6357-6360页

作者：陈谊盛净上海交通大学医学院附属第九人民医院老年科上海市200011

平滑肌祖细胞是一类能够表达平滑肌球蛋白重链的平滑肌样细胞,骨髓、外周血以及心肌细胞、骨骼肌细胞和胚胎干细胞都有可能分化成平滑肌祖细胞。在一般情况下,平滑肌祖细胞均处于静息状态,直到机体对损伤或疾病产生应答时才被动员。当... 详细信息

平滑肌祖细胞是一类能够表达平滑肌球蛋白重链的平滑肌样细胞,骨髓、外周血以及心肌细胞、骨骼肌细胞和胚胎干细胞都有可能分化成平滑肌祖细胞。在一般情况下,平滑肌祖细胞均处于静息状态,直到机体对损伤或疾病产生应答时才被动员。当血管损伤时,在生长因子及细胞因子以及粒细胞集落刺激因子的作用下,平滑肌祖细胞被动员并归巢于局部的损伤部位进而参与血管的重塑过程。近年来研究发现,这些来源不同的平滑肌祖细胞参与了血管重塑及动脉粥样硬化的发生发展,一般认为平滑肌祖细胞参与新生内膜的形成因而加重了动脉的粥样硬化及在狭窄。但也有研究发现注射血管平滑肌祖细胞治疗后,损伤局部胶原及平滑肌细胞的含量增加,并且巨噬细胞的数量降低,同时平滑肌祖细胞可分泌细胞因子和生长因子,均导致斑块的稳定性提高。与内皮祖细胞相比,平滑肌祖细胞的研究相对较少,平滑肌祖细胞是否能成为一种运用于血管性疾病的基因及细胞治疗的有效手段还有待进一步证明。

关键词：平滑肌祖细胞动脉粥样硬化再狭窄

平滑肌祖细胞在新型细胞外基质支架上的生长特性

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中国组织工程研究与临床康复 2009年第29期13卷 5727-5731页

作者：严玉兰步雪峰张志坚王穆斌郑金旭江苏大学附属人民医院江苏省镇江市212002 江苏大学基础医学与医学技术学院江苏省镇江市212002

背景:血管壁细胞包括内皮细胞和平滑肌细胞,平滑肌细胞合成分泌的胶原蛋白、弹力蛋白和蛋白聚糖等细胞外基质是提供血管塑形及张力的最主要成分,平滑肌细胞在细胞外基质支架上生长可能更接近体内生长环境特性。目的:观察鼠骨髓来源平滑... 详细信息

背景:血管壁细胞包括内皮细胞和平滑肌细胞,平滑肌细胞合成分泌的胶原蛋白、弹力蛋白和蛋白聚糖等细胞外基质是提供血管塑形及张力的最主要成分,平滑肌细胞在细胞外基质支架上生长可能更接近体内生长环境特性。目的:观察鼠骨髓来源平滑肌祖细胞在毯状细胞外基质支架上的生长特性。设计、时间及地点:细胞水平对比观察实验,于2007-07/2008-07在江苏大学临床检验实验室完成。材料:将纤维蛋白原、层粘连蛋白和纤粘连蛋白按一定比例混合后,在新鲜大鼠血浆促凝coagulation作用下,构建毯状细胞外基质支架。方法:实验组诱导培养骨髓来源的第2代平滑肌祖细胞种植在毯状细胞外基质支架表面。对照组将骨髓来源的第2代平滑肌祖细胞接种到无菌圆盖玻片上。主要观察指标:于培养1,4,7,10,14,21d用电镜观察支架表面结构及平滑肌祖细胞生长情况;WesternBlotting法、Real-TimePCR法分别检测α-SMA蛋白及mRNA表达变化。结果:实验组平滑肌祖细胞贴壁率、增殖数明显高于对照组(P细胞在支架表面形成较平整的平面,如典型"平滑肌"形状;实验组平滑肌祖细胞为多层、三维立体、更接近天然血管的结构;实验组α-SMA蛋白及基因表达明显高于对照组(P细胞外基质支架能显著促进平滑肌祖细胞黏附、增殖和分化,可作为一种新颖的合成人造血管的生物组织工程支架。

关键词：平滑肌祖细胞细胞外基质组织工程支架

同步诱导培养兔骨髓源性内皮祖细胞和平滑肌祖细胞

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第二军医大学学报 2014年第1期35卷 68-73页

作者：张永珍李文芳樊新生马小华吴绪敏张传森泰山学院体育学院理论教研室泰安271000 第二军医大学基础部人体解剖与组织胚胎学教研室上海200433 泰安市妇幼保健院儿童保健科泰安271000

目的采用兔骨髓来源的单个核细胞同步诱导分化为兔内皮祖细胞(EPCs)和平滑肌祖细胞(SPCs),研究其生物学特性,评估其作为组织工程化静脉瓣种子细胞的可能性。方法梯度密度离心法获取兔骨髓血单个核细胞沉淀,分别用含5%胎牛血清(FBS)的EG... 详细信息

目的采用兔骨髓来源的单个核细胞同步诱导分化为兔内皮祖细胞(EPCs)和平滑肌祖细胞(SPCs),研究其生物学特性,评估其作为组织工程化静脉瓣种子细胞的可能性。方法梯度密度离心法获取兔骨髓血单个核细胞沉淀,分别用含5%胎牛血清(FBS)的EGM-2完全培养液向EPCs方向诱导培养;用含20ng/mL血小板源性生长因子BB、5%FBS,不含血管内皮生长因子(VEGF)的EBM-2培养液向SPCs方向诱导培养。鉴定两种细胞的分化情况。结果诱导的EPCs培养至10d左右,细胞单层融合呈"铺路石"状;表达血管内皮细胞生长因子受体2(VEGFR-2)、血管性血友病因子(vWF)、CD133,不表达α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA);透射电镜可见细胞质内特征性Weibel-Palade小体;细胞生物学功能检测可见EPCs在基质胶上呈现血管状生长。诱导的SPCs培养至14d左右呈现血管平滑肌细胞"峰-谷"样生长特性;表达CD34、α-SMA,不表达vWF和VEGFR-2;在透射电镜下可见细胞内含有与细胞纵轴平行排列的肌丝;在基质胶上不规则生长。结论兔骨髓血梯度密度离心得到的单个核细胞可同步诱导分化为EPCs和SPCs,为构建组织工程化静脉瓣提供了经济且可简便获取的种子细胞。

关键词：内皮祖细胞平滑肌祖细胞组织工程化静脉瓣组织工程

小鼠平滑肌祖细胞培养及其体内外迁移功能的研究

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中国药理学通报 2016年第7期32卷 915-920页

作者：王晴李和权周建英浙江大学医学院附属第一医院呼吸内科浙江杭州310003

目的建立一种有效的小鼠平滑肌祖细胞的培养方法,并对其迁移功能进行研究。方法使用C57BL/6小鼠制备密质骨来源间充干细胞,PDGF-BB诱导其分化并采用形态学观察、免疫细胞化学染色及流式分析的方法进行鉴定。使用Transwell小室及流式分... 详细信息

目的建立一种有效的小鼠平滑肌祖细胞的培养方法,并对其迁移功能进行研究。方法使用C57BL/6小鼠制备密质骨来源间充干细胞,PDGF-BB诱导其分化并采用形态学观察、免疫细胞化学染色及流式分析的方法进行鉴定。使用Transwell小室及流式分析方法检测其迁移能力。结果 PDGF-BB诱导7 d后,镜下可见细胞呈长梭型,免疫细胞化学染色显示开始表达α-SMA。诱导21 d后,流式分析证实70%以上的细胞表达CD34+/α-SMA+双阳性,58.5%细胞开始表达SM-MHC。迁移实验表明,培养得到的平滑肌祖细胞在体内外均具有良好的迁移能力。结论通过使用密质骨来源间充干细胞制备平滑肌祖细胞具有操作简便、获取率高及培养周期短等优点,培养得到的平滑肌祖细胞在体内外均具有迁移能力,适于进行后续功能及机制研究。

关键词：平滑肌祖细胞间充干细胞培养迁移平滑肌肌动蛋白 PDGF-BB

同时分离和培养兔外周血平滑肌祖细胞和内皮祖细胞

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南京大学学报（自然科学版） 2010年第1期46卷 92-99页

作者：杨斌陈贇周六化孙则禹戴玉田南京大学医学院附属鼓楼医院泌尿外科南京210008

同时分离和培养兔外周血平滑肌祖细胞(SPC)和内皮祖细胞(EPC),为组织工程膀胱的构建和血管化提供种子细胞.分离新西兰兔外周血中的单个核细胞,分别进行SPC和EPC的分离和培养;同时,培养兔膀胱平滑肌细胞(BSMC)作为对照.细胞爬片,观察细... 详细信息

同时分离和培养兔外周血平滑肌祖细胞(SPC)和内皮祖细胞(EPC),为组织工程膀胱的构建和血管化提供种子细胞.分离新西兰兔外周血中的单个核细胞,分别进行SPC和EPC的分离和培养;同时,培养兔膀胱平滑肌细胞(BSMC)作为对照.细胞爬片,观察细胞摄取Dil-AcLDL和结合FITC-UEA-1的能力;间接免疫荧光染色观察平滑肌肌动蛋白(SMA)、结蛋白(Desmin)、KDR、eNOS和vWF的表达情况;进行细胞增殖实验,观察PDGF-BB,VEGF对SPC和EPC的增殖作用.结果发现,培养1周后出现SPC克隆和EPC克隆,SPC呈梭形,长短不一;EPC形态均一,呈典型的鹅卵石形;培养的BSMC形态均一,为长梭形,呈峰谷样形态.利用克隆环分离SPC和EPC克隆,继续培养可得到高纯度的SPC和EPC.SPC不摄取Dil-AcLDL,不结合FITC-UEA-1;SPC表达SMA、Desmin和KDR,不表达eNOS和vWF.EPC同时摄取Dil-AcLDL和结合FITC-UEA-1;EPC表达eNOS、vWF和KDR,不表达SMA和Desmin.BSMC仅表达SMA和Desmin.PDGF-BB仅能促进SPC增殖,VEGF仅能促进EPC增殖,均具有剂量依赖效应.本研究建立了同时分离和培养外周血SPC和EPC的技术,所培养的细胞具有较高的纯度,可以作为种子细胞进行组织工程膀胱及其血管化的研究和应用.

关键词：平滑肌祖细胞内皮祖细胞平滑肌细胞组织工程再生医学生长因子血管化

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大鼠骨髓来源的平滑肌祖细胞培养及鉴定

基础医学与临床 2008年第11期28卷 1197-1202页

作者：步雪峰严玉兰刘洋张志坚王穆斌江苏大学附属人民医院江苏镇江212002 江苏大学医学院江苏镇江212002

目的培养和鉴定从鼠骨髓中分离的平滑肌祖细胞,观察其在体外增殖、分化过程中相关细胞表型的变化。方法用密度梯度离心法获得鼠骨髓单个核细胞,用条件培养基进行诱导分化,免疫荧光双标技术(α-SMA、CD14)鉴定平滑肌祖细胞(SPC)。Western... 详细信息

目的培养和鉴定从鼠骨髓中分离的平滑肌祖细胞,观察其在体外增殖、分化过程中相关细胞表型的变化。方法用密度梯度离心法获得鼠骨髓单个核细胞,用条件培养基进行诱导分化,免疫荧光双标技术(α-SMA、CD14)鉴定平滑肌祖细胞(SPC)。Western blot检测α-SMA蛋白,Real-time PCR法检测α-SMA mRNA表达。结果鼠骨髓单个核细胞诱导培养4d时开始贴壁,7d变为梭形,14d呈典型的"峰""谷"样形态;4d时开始出现α-SMA-CD14双荧光阳性细胞;培养1d时无α-SMA蛋白表达,4d后增强,10～14d达高峰,21d仍持续高水平;培养1d的细胞α-SMA mRNA表达低(P细胞中分离培养出SPC,并在体外扩增分化成平滑肌样细胞。

关键词：单个核细胞平滑肌祖细胞平滑肌细胞组织工程

CM-DiI标记兔外周血平滑肌祖细胞可行性分析

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南京大学学报（自然科学版） 2014年第1期50卷 1-8页

作者：周六化杨斌夏佳东王鹏基陈赟戴玉田南京大学医学院附属鼓楼医院泌尿男科南京210008 上海市第十人民医院同济大学附属第十人民医院泌尿外科上海200072

采用荧光染料CM-DiI标记兔外周血平滑肌祖细胞(SPC),评价其生物可行性.分离和培养SPC,采用CMDiI进行标记,通过荧光显微镜和流式细胞仪检测标记效果和传代后的细胞标记率.同时,进行细胞爬片培养后免疫荧光染色,观察标记后细胞表达平滑肌... 详细信息

采用荧光染料CM-DiI标记兔外周血平滑肌祖细胞(SPC),评价其生物可行性.分离和培养SPC,采用CMDiI进行标记,通过荧光显微镜和流式细胞仪检测标记效果和传代后的细胞标记率.同时,进行细胞爬片培养后免疫荧光染色,观察标记后细胞表达平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、钙调节蛋白(Calponin)和增殖细胞核抗原(PCNA)的情况.进行台盼蓝排斥实验、细胞粘附实验、细胞增殖实验和细胞迁移实验,观察标记后的SPC存活率以及粘附、增殖和迁移能力的变化.结果发现,培养4d左右可见SPC开始生长,一周后出现SPC克隆.通过免疫荧光和流式细胞术分析,CM-DiI标记率为96%左右,连续传代2周后标记率仍在40%以上.标记后的细胞可表达α-SMA、Calponin和PCNA.同时发现,标记后的细胞存活率无明显降低,细胞粘附能力、增殖能力和迁移能力无明显改变.本研究证明采用CM-DiI标记SPC操作简便,效果好,不改变细胞表型,不影响细胞的存活率和粘附、增殖及迁移能力,可作为SPC的荧光示踪剂.

关键词：荧光示踪平滑肌祖细胞组织工程

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成人外周血平滑肌祖细胞的体外培养

中国组织工程研究与临床康复 2011年第14期15卷 2587-2591页

作者：周学凯倪旭东李飞张荣庆郭文怡解放军第四军医大学西京医院心血管内科陕西省西安市710032

背景:外周血平滑肌祖细胞具有向平滑肌细胞分化的能力。目的:探索体外分离培养成人外周血平滑肌祖细胞的方法及其生长分化特性。方法:采用密度梯度离心法分离获得成人外周血单个核细胞,培养12d后,应用流式细胞仪鉴定分析平滑肌祖细胞并... 详细信息

背景:外周血平滑肌祖细胞具有向平滑肌细胞分化的能力。目的:探索体外分离培养成人外周血平滑肌祖细胞的方法及其生长分化特性。方法:采用密度梯度离心法分离获得成人外周血单个核细胞,培养12d后,应用流式细胞仪鉴定分析平滑肌祖细胞并分选纯化,继续培养诱导分化。采用倒置显微镜观察平滑肌祖细胞的形态变化,免疫荧光染色法观察其α-肌动蛋白的表达,同时应用Westernblot法检测调宁蛋白、平滑肌肌球蛋白重链的表达情况。此外,观察平滑肌祖细胞的生长特性,绘制生长曲线。结果与结论:成人外周血单个核细胞诱导培养4d时开始出现细胞集落,12d时细胞呈明显梭形。流式细胞仪分析显示,CD14和CD105双阳性的平滑肌祖细胞占贴壁细胞的(71.8±7.2)%。分选纯化的平滑肌祖细胞培养到28d呈旋涡状生长。间接免疫荧光染色显示,α-肌动蛋白表达呈阳性。Westernblot检测显示,调宁蛋白和平滑肌肌球蛋白重链分别于14,21d开始表达,并逐渐增加。生长曲线表明,细胞生长至第6天进入对数生长期,第12天后进入平台期。提示通过对外周血单个核细胞的诱导培养,可以获得大量的平滑肌祖细胞。它能稳定增殖,并可进一步分化为平滑肌细胞。

关键词：平滑肌祖细胞 CD14 CD105 细胞培养诱导分化组织工程种子细胞

氧化型低密度脂蛋白对平滑肌祖细胞增殖和表型的影响

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中国动脉硬化杂志 2009年第9期17卷 723-726页

作者：陈锋张振东唐新华南昌大学第二附属医院血管外科江西省南昌市330006 南昌大学第一附属医院病理科江西省南昌市330006

目的研究氧化型低密度脂蛋白对血管平滑肌祖细胞生物学性状的影响。方法分离人外周血单个核细胞,用纤粘连蛋白、血小板源性生长因子BB和EGM培养基诱导培养出平滑肌祖细胞,用细胞免疫荧光法和逆转录-聚合酶链反应法鉴定。用分别含终浓度... 详细信息

目的研究氧化型低密度脂蛋白对血管平滑肌祖细胞生物学性状的影响。方法分离人外周血单个核细胞,用纤粘连蛋白、血小板源性生长因子BB和EGM培养基诱导培养出平滑肌祖细胞,用细胞免疫荧光法和逆转录-聚合酶链反应法鉴定。用分别含终浓度为25、50、100、200 mg/L氧化型低密度脂蛋白的培养基培养平滑肌祖细胞24 h,然后用噻唑蓝(MTT)法检测细胞的增殖能力,用细胞免疫荧光法和逆转录-聚合酶链反应法检测α-平滑肌肌动蛋白的表达。结果平滑肌祖细胞呈"峰、谷"样生长,可表达α-平滑肌肌动蛋白和调宁蛋白。4种不同浓度氧化型低密度脂蛋白组细胞增殖能力均高于对照组(P细胞增殖能力最强,氧化型低密度脂蛋白组细胞内α-平滑肌肌动蛋白的表达明显弱于对照组。结论氧化型低密度脂蛋白可以促进血管平滑肌祖细胞的增殖并减弱其α-平滑肌肌动蛋白的表达。

关键词：平滑肌祖细胞氧化型低密度脂蛋白 α-平滑肌肌动蛋白调宁蛋白